البوليمرات المركبة كتلة متوافقة بيولوجيا ً وظيفية من الميثيونين لتسليم الحمض النووي البلازميد المستهدف

حاملة المخدرات البوليمر الموجبة لديها مزايا الاستقرار الجيد، وانخفاض المناعة، وإعداد سهلة والتعديل. هنا، ونحن نقدم طريقة سريعة وبسيطة لتوليف. طريقة البلمرة لسلسلة نقل تجزئة الإضافة القابلة للعكس هي طريقة قابلة للتطبيق على إنتاج بوليمرات كتلة مع الوزن الجزيئية الخاضعة للرقابة والهيكل وتحمل المجموعات الوظيفية.

يمكن لحاملي الأدوية هذه حمل الأدوية المختلفة في وقت واحد لتحقيق التعاون في علاج السرطان والالتهاب وأمراض أخرى. البلمرة IFT هو طريقة كلاسيكية، وهذا البروتوكول يعطي مثالا على تطبيقه في العلاج الجيني. مفتاح النجاح في تركيب هذا البوليمر هو التحكم بدقة في درجة حرارة التفاعل.

ومن المستحسن أكثر لاستخدام حمام النفط من حمام مائي. لبدء هذا الإجراء، الحصول على قارورة مستديرة القاع مع سدادة مطاطية وستيرر مغناطيسي لاستخدامها كزجاجة البلمرة. حل 1.87 غرام من الـ 1.87 من الـ 333-hydroxy HEMA في مليلتر واحد من الماء المقطر في زجاجة البلمرة.

في منقار خمسة ملليلتر، قم بحل 0.03 غرام من CTP و 0.02 غرام من ACVA في 0.5 ملليلتر من 1، 4-الديوكسيان. إضافة هذا الخليط إلى زجاجة البلمرة. ثم، استخدام فخ المكثفات لتجميد الحل في زجاجة البلمرة.

إصلاح زجاجة لدعم الحديد، واستخدام قناة تعثرت مع إبرة لتفريغ وضخ النيتروجين في خليط التفاعل. ثم، ختم زجاجة البلمرة، وذوبان الحل في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. كرر هذه دورة التجميد مضخة ذوبان ثلاث مرات.

بعد ذلك، ضع الزجاجة في حمام الزيت عند درجة حرارة 70 درجة مئوية، ودع الحل يتفاعل لمدة 24 ساعة تحت الغلاف الجوي للنيتروجين. في اليوم التالي، هدئ زجاجة البلمرة عند درجة الصفر مئوية وافتح سدادة المطاط لإنهاء تفاعل البلمرة. بعد ذلك ، أسيتون ما قبل البرنول في الثلاجة في درجة مئوية سالبة 20 لمدة ساعتين ، واخلطه مع محلول التفاعل في زجاجة البلمرة بنسبة 50 إلى واحد.

أجهزة الطرد المركزي هذا الخليط في 8، 200 مرة ز لمدة 10 دقائق لإزالة الأسيتون وجمع الترسب. لتنقية توليفها بولي bis-hydroxy HEMA، حل الترسبات التي تم جمعها في مليلترين من الماء النقي. ثم، اخلطه مع 100 ملليلتر من الأسيتون المبرد بنسبة 1 إلى 50.

الطرد المركزي الحل في 8، 200 مرة ز لمدة 10 دقائق لجمع الترسب. كرر عملية تنقية هذه من حل، خلط، وrifuging الترسب ثلاث مرات. أولاً، قم بحل 0.96 جرام من APMA و0.93 جرام من البولي bis-hydroxy HEMA المنقى في خمسة ملليلتر من الماء المقطر في منبر 10 ملليلتر.

حل 0.01 غرام من ACVA في 0.5 ملليلتر من 1, 4-الديوكسيان, وإضافة هذا إلى حل APMA وبولي bis-hydroxy هيما. نقل هذا الخليط إلى زجاجة البلمرة، والتهوية مع النيتروجين الجاف لمدة ساعة واحدة. ثم، وضع زجاجة البلمرة في حمام النفط في 70 درجة مئوية، والسماح لها تتفاعل لمدة 24 ساعة تحت الغلاف الجوي النيتروجين.

في اليوم التالي، هدئ من قشعريرة زجاجة البلمرة عند درجة الصفر مئوية وفتح سدادة المطاط لإنهاء حل عملية البلمرة. للبدء، بذور الخلايا MCF-7 في آبار لوحة ستة جيدا في كثافة 20،000 خلية في البئر. زراعة الخلايا في حاضنة مرطبة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 12 ساعة.

بعد ذلك، استبدل الوسط الثقافي بوسيلة الثقافة الطازجة التي تحتوي على البوليمر الموجب والبوليبليكس pDNA من نسبة مختلفة من نسب النيتروجين إلى الفوسفور. زراعة الخلايا لمدة ست ساعات، ثم استبدال المتوسطة مع مليلترين من 1640 1640 1640 100. مواصلة زراعة لمدة 48 ساعة.

ثم، وجمع الخلايا، واستخدام مقياس تدفق الخلايا للكشف عن الفلورسيه الخضراء. في هذه الدراسة، يتم إعداد مكونات الـ methionine-functionalized biocompatible كتلة copolymers عن طريق عكس طريقة نقل سلسلة تجزئة الإضافة، ويتم التحقيق في الحمض النووي plasmid القدرة المركبة من mBG التي تم الحصول عليها وكفاءة النقل. متوسط حجم الجسيمات وإمكانات زيتا من mBG / pDNA polyplexes هي 124 نانومتر زائد 15.7 ملليفولت، على التوالي، في نسبة N-إلى-P من 16.

التخلف الكهربائي يكشف أن pDNA مع نسبة N-إلى P من صفر يمكن أن تتحرك دون قيود في هلام agarose ويلاحظ كطبار في التصوير هلام. عندما يتم تعقيد pDNA مع mBG ، فإن حركة pDNA متخلفة ، وبالتالي ، يتم تقليل سطوع النطاق. وهذا يدل على أن mBG يمكن أن تعقد تماما pDNA عندما N إلى P أعلى من أربعة.

ثم يتم قياس السمية الخلوية للبوليبليكس mBG/pDNA باستخدام معيار MTT فحص هذه النتائج تظهر أن mBG /pDNA polyplexes لديها السمية الخلوية من بوليبليكس PEI / pDNA في نسب N-إلى-P من أربعة و8 و 16 و 32. كما يمكن أن نرى أيضا، السمية الخلوية للزوج/ pDNA يزيد مع زيادة نسبة N-إلى-P. هذا زيادة السمية الخلوية هو نتيجة لعنصر GPMA مشحونة بشكل إيجابي.

يتم اختيار نسبة N-إلى-P المستخدمة في تجربة الانتار في PDNA وفقًا لنتائج السمية الخلوية. وتقارن قدرات نقل الفلورات من mBG1، mBG2، و mBG3 عن طريق قياس كثافة الفلورس GFP، وأظهرت النتائج أن mBG3 هو الناقل الجيني الأمثل. من المهم أن العادم الهواء من قارورة دائرية في الجزء السفلي من الطمي والحفاظ على درجة حرارة التفاعل.

ويمكن تطبيق ناقلات الأدوية البوليمرية التي تم الحصول عليها على المشاركة في تقديم أدوية العلاج الكيميائي والأدوية الجينية لعلاج السرطان المقاوم للأدوية بشكل تعاوني. ويمكن مواصلة استكشاف الآلية الجزيئية لمزيج من الأدوية الجينية والأدوية الكيميائية لعلاج الأورام المقاومة للأدوية. يتم تصنيف الأسيتون على أنه منخفض السمية لسميته الحادة.

يجب تجنب المفاتيح أو الاستنشاق أو ملامسة العينين أو الجلد. تجنب خطر الحرق أثناء إجراء التدفئة.