التحليل الرقمي للتلطيخ المناعي للبروتين المتفاعل ZW10 في أنسجة الرئة البشرية

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في الكيمياء المرضية والمناعة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن أسرع بما فيه الكفاية، وتنتج وسائل الإعلام الرقمية ذات جودة عالية. تبدأ عن طريق تحديد عينة من ثلاثة في ثلاثة سنتيمتر في نسيج الكونغ 4٪ شبهformaldehyde لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة.

في اليوم التالي، يجفف الأنسجة في غمرات الإيثانول التصاعدية في درجة حرارة الغرفة، تليها ثلاثة غمرات في 100٪ من الزيلين لمدة 20 دقيقة لكل علاج. بعد الغمر الزيلين الماضي، وضع الأنسجة في البارافين 63 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، تليها الغمر الثاني 45 دقيقة في البارافين 63 درجة مئوية جديدة، ثم تغيير البارافين مرة أخرى لاحتضان ساعة واحدة النهائي. عندما يبرد البارافين، استخدم ميكروم الروتاري للحصول على خمسة أقسام سميكة ميكرومتر من عينة الأنسجة المدمجة في البارافين، والتقاط المقاطع على 20 ميكروغرام لكل ملليلتر متعدد اللين-لين- الشرائح المغلفة.

لdyهوaxing، وضع الشرائح في فرن 65 درجة مئوية لمدة ساعتين، تليها الغمر في ثنائي المزيج لمدة 15 دقيقة ونقع في 100٪ من إكسيلين لمدة 15 دقيقة، ثم إعادة ترطيب الشرائح في سلسلة الغمر الإيثانول تنازلي. لإصلاح مستضد، ضع الشرائح في مربع إصلاح مستضد وإضافة 300 ملليلتر من السائل إصلاح حمض الستريك إلى المربع. سخني الصندوق في فرن ميكروويف في طاقة عالية لمدة دقيقتين، يليهما تسخين في طاقة منخفضة للحفاظ على الغليان لمدة ست دقائق.

عندما تبرد الشرائح إلى درجة حرارة الغرفة، وغسل عينات الأنسجة مع ثلاثة خمس دقائق 0.01 PBS المول يغسل في شاكر دوارة في درجة حرارة الغرفة. للقضاء على البيروكسيداز الذاتية، احتضان الشرائح مع بيروكسيد الهيدروجين 3٪ في الماء المقطر المزدوج لمدة 30 دقيقة في مربع الرطب في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، وغسل الشرائح كما هو موضح والمكونات أي ربط غير محددة على كل قسم مع 100 ميكرولترات من مصل الماعز 10٪ لمدة 39 دقيقة في 37 درجة مئوية.

بعد ذلك ، قم بتسمية الأنسجة بـ 100 ميكرولترات من الأجسام المضادة لـ ZWINT لكل شريحة عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها ، تليها ثلاثة غسلات في PBS 0.01 molar. بعد الغسيل الأخير، احتضان الشرائح مع جسم مضاد الثانوية المناسبة لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية، تليها ثلاثة 0.01 PBS المولى يغسل. بعد الغسيل الأخير، أضف الشرائح إلى 300 ميكرولترات من الداب الطازجة لمدة 10 دقائق، تليها غسل 10 ثانية مع مياه الصنبور في درجة حرارة الغرفة.

العدادات تلطخ الأنسجة بمحلول تلطيخ الهماوكسيلين لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة، يليها الغسيل في ماء الصنبور لمدة 15 دقيقة، ثم تجفيف الأنسجة مرة أخرى في غمرات الإيثانول التصاعدية، يليهما غمران لمدة 15 دقيقة في إكسيلين في درجة حرارة الغرفة. بعد الغمر الأخير 100٪ الإيثانول، تحميل المقاطع مع 15 ميكرولترات من 5٪ من الزيلين في محلول اللثة محايدة وتغطي كل عينة الأنسجة مع غطاء الزجاج. لمسح تلقائي كامل الشريحة من المقاطع، أولاً السماح للشرائح لتجف في درجة حرارة الغرفة لمدة 12 ساعة لتجفيف عينات الأنسجة.

بعد ذلك، في الماسح الضوئي التلقائي الشريحة الكاملة، حدد برايتفيلد يدويا وأدخل واجهة المسح اليدوي. راجع اسم الشرائح وحدد مسار تخزين للصور. قم بتعيين منطقة المسح الضوئي وحدد عينات المسح الضوئي باستخدام خيار عتبات Set User.

العتبة حوالي 50 مع قيمة توسع منطقة المسح الضوئي من 200 ميكرومتر. تعيين قيمة التركيز المسح الضوئي وحدد التركيز التلقائي ووضع طبقة واحدة، ثم تحميل الشرائح إلى محطة العمل وبدء المسح التلقائي. عند مسح كافة الشرائح ضوئياً، احفظ الصور لتحليلها لاحقاً.

لتحليل صور أقسام أنسجة الرئة، افتح برنامج تحليل الصور الهستوباتية وحدد الكمبيوتر المحلي لفتح الملف باستخدام بيانات المسح الضوئي. حدد مستوى التكبير/التصغير المناسب واستخدم تبديل ضبط اللون لضبط اللون على النقيض الأمثل، ثم دائرة المناطق ذات الأهمية على كل صورة. المقبل ، تحت الإضافات ، حدد QC. سوف تنبثق منشئ السيناريو.

حدد كثافة الكم وضبط شريط الكشف. ضبط مستويات النقاط حتى كثافة تلطيخ المناطق دائرة مماثلة لتلك التي من الصور الأصلية، وتخزين واسم النموذج كملف جديد، ثم تطبيق النموذج على الشرائح الأخرى وحدد التعليق المحدد للسماح للبرنامج حساب نقاط القرد تلقائيا للمناطق ذات الأهمية في كل صورة. مسح كامل الشريحة الرقمية من أقسام أنسجة الرئة من الورم والأنسجة المجاورة غير الورم من عينات سرطان الرئة الخلايا غير الصغيرة تنتج صورا رقمية ذات جودة عالية.

درجات APE محسوبة من هذه الأنواع من عينات سرطان الرئة عادة ما تكون أعلى بكثير من تلك التي تحدد للأنسجة غير السرطانية المجاورة. بالإضافة إلى ذلك، كثيرا ما يتم تحديد مستويات التعبير ZWINT في أقسام الأنسجة السرطانية الحرشفية الخلية لتكون أعلى بكثير من تلك التي تقاس في عينات الأنسجة abnocarcinoma. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن تُعد بجودة عالية من مناطق الورم أو الورم أثناء إجراء المسح المرضي.

بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء طرق أخرى من المجهر من أجل الإجابة على أسئلة إضافية. لا طريقة مختلفة أو للمسح المرضي. بعد هذه التقنية مهدت الطريق للباحثين في مجال المسح المرضي لاستكشاف التشخيص الرقمي في الغرض البحثي.

لا تنس أن العمل مع ما قبلية الديمدهايد يمكن أن تكون خطرة للغاية وينبغي اتخاذ الاحتياطات مثل الأقنعة دائما أثناء تنفيذ هذا الإجراء.