ميكروبيوبسي ماصة العينة واستخراج الحمض النووي الريبي للدم كسبها، ومتزامنة، وتحليل الجلد

يمكن لهذه الطريقة أن تسهل إنشاء علامات بيولوجية للأمراض الجلدية، كما تقلل من خطر المشاركين في الأبحاث السريرية. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها لا تتطلب تدريبا مكثفا وأنها لا تترك أي ندوب. قبل خمس دقائق من ميكروبيوبسي، ضع أنبوب جهاز طرد مركزي فارغ ملليلتر على الجليد الجاف لمدة خمس دقائق.

ارتداء قفازات المتاح، رش اليدين والأدوات مع 70٪ الإيثانول قبل تطهير موقع التطبيق على هذا الموضوع مع مسح الكحول. إزالة خزعة صغيرة من حزمة أشعة غاما معقمة دون لمس microneedle وسحب المكبس حتى يتم سماع نقرة وأقفال المكبس في مكان. صوب الجهاز المحمّل بزاوية عمودية تقريبًا على الجلد ليتم أخذ عينات منه، مع الحرص على أن منطقة أخذ العينات في وضع ثابت، ثم ضعي الجهاز على الجلد في غضون كيلوغرام واحد على الأقل من القوة.

ثم اضغط على الزناد مع الاستمرار في مكان الجهاز لمدة عشر ثوان على الأقل. إذا تم تحرير الجهاز قبل عشر ثوان، هناك فرصة أكبر للاختلاف في امتصاص الدم وأيضا التحليل اللاحق. عندما تم امتصاص العينة، وسحب بلطف المكبس وماصة microneedle من القضية واستخدام ملقط العقيمة لسحب على اثنين من الثقوب من microneedle لإزالته من المكبس.

إضافة 50 ميكرولترات من استخراج العازلة إلى أنبوب على الجليد الجاف ووضع microneedle سليمة في أنبوب على الجانب إبرة الجليد الجافة إلى أسفل. يجب الحرص على عدم السماح غيض من microneedle تلمس أي شيء أثناء عملية الإزالة. دوامة الأنبوب لمدة ثلاث إلى خمس ثوان لجمع بعض المواد العينة من طرف microneedle واحتضان الأنبوب في كتلة الحرارة أو حمام الماء لمدة 30 دقيقة في 42 درجة مئوية.

في نهاية الحضانة ، استخدم ملقطًا معقمة لوضع النهاية الخلفية لمستوى microneedle مع الحافة العليا من أنبوب microfuge وإغلاق غطاء الأنبوب بحيث يتم عقد الجزء العلوي من microneedle في مكان بين الغطاء والإنبوب. الطرد المركزي أنبوب لجمع المواد العينة من طبقة ماصة من الجهاز واستخدام ملقط لإزالة بعناية microneedle دون غمس طرف مرة أخرى في الحل العازلة. الطرد المركزي العينة مرة أخرى ونقل بعناية فائقة إلى أنبوب جديد أجهزة الطرد المركزي الجزئي.

أضف التالي 250 ميكرولترات من عازلة تكييف على غشاء تصفية عمود تنقية لمدة خمس دقائق حضانة في درجة حرارة الغرفة وتمييع العازلة عن طريق الطرد المركزي. إضافة 50 ميكرولترات من 70٪ الإيثانول إلى عينة الحمض النووي الريبي المستخرجة مع خلط لطيف ونقل الخليط إلى عمود تنقية الشروط المسبقة. على الفور الطرد المركزي الأنبوب مرتين لإزالة تدفق من خلال، تليها غسل في مائة ميكرولترات من غسل العازلة واحد.

لهضم الحمض النووي، إضافة 40 ميكرولترات من مزيج حضانة DNAs الطازجة أعدت مباشرة على غشاء عمود تنقية لاحتضان 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة تليها غسل مع 40 ميكروليتر من غسل العازلة واحد. في نهاية الطرد المركزي، قم بغسل العمود بـ 100 ميكرولترات من عازل الغسيل الثاني وتحقق من عمود التنقية لأي عازل غسيل متبقي. نقل عمود تنقية في أنبوب أجهزة الطرد المركزي الصغرى 0.5 ملليلتر المقدمة في طقم استخراج الحمض النووي الريبي ووضع غيض من الماصات مباشرة على غشاء عمود تنقية لإضافة 11 ميكرولترات من المياه RNA sPRE إلى العمود.

بعد حضانة لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة، والطرد المركزي العمود مرة واحدة لتوزيع المياه RNA sPRE في جميع أنحاء العمود، ومرة واحدة ل elute الجيش الملكي النيبالي. ثم تخزين عينة RNA مجموع في ناقص 80 درجة مئوية إذا لم يتم تنفيذ التوليف cDNA على الفور. و microbiopsy microneedle ماصة تتكون من طبقتين من صفيحة الصلب مع طبقة ماصة في ما بين لأخذ عينات في وقت واحد من الجلد والدم.

استخدام ميكروبايبسي ماصة يدفع فقط حمامي طفيفة, هذا غير ملحوظ بعد 48 ساعة. بعد ثقب، يتم التقاط بضع قطع صغيرة من الجلد بالقرب من غيض من microneedle ويتم امتصاص الدم في ورقة التصفية. عندما تتم إزالة ميكرونيدل ماصة مباشرة بعد ثقب, حجم العينة وكمية لاحقة من الميرنا المستخرجة أقل بكثير من ذلك الذي حصل بعد عقد لمدة عشر ثوان بعد ثقب.

يتم الكشف عن مستويات مماثلة من تعبير علامة الجلد بعد استخدام microbiopsy ماصة وmicrobiopsy الجلد السلف عن طريق التحليل الكمي PCR. ولكن يتم الكشف عن مستوى أعلى بكثير من التعبير علامة الخلايا البيضاء في الدم الحيوي بعد أخذ العينات microbiopsy ماصة, مما يشير إلى أن microbiopsy microneedle ماصة يؤدي بشكل أفضل لجمع الدم مع الحفاظ على نفس القدرة لالتقاط عينة الجلد كما هو الحال مع microbiopsy الجلد. لذلك أثناء تطبيق هذه التقنية ، من المهم أن نتذكر أن تطبيق الجهاز وفقًا لما نقترحه ضروري للحصول على نتائج موثوقة.

لذلك بعد هذا الإجراء، يمكن اتباع طرق أخرى، مثل PCR في الوقت الحقيقي، من أجل تنميط التعبير الجيني نسبياً. على الرغم من أننا لا نزال نطور الجهاز، إلا أننا واثقون من أن هذه التقنية قد مهدت الطريق لإجراء الأبحاث السريرية لإجراء أخذ العينات، لمستحضرات التجميل الجلدية أو طب الأطفال لأنها بسيطة للغاية وهي طفيفة التوغل.