بناء ورقة الطبقات الوسيطة من الخلايا الجذعية مع نظام 3D دينامية الثقافة

وقد تم الإبلاغ على نطاق واسع عن العلاج بالخلايا الجذعية كعلاج واعد للعديد من الأمراض. وقد تم تطوير تقنيات ورقة الخلية من أجل تحسين الاحتفاظ الخلية والبقاء على قيد الحياة داخل الأهداف، أيضا. أثناء بناء أوراق الخلية، وإمدادات التغذية غير كافية لا تزال مشاكل رئيسية لفقدان وظيفة الخلايا الجذعية، وخاصية الخلايا الجذعية غير مرضية من شأنه أن يؤثر في النهاية الآثار العلاجية في الجسم الحي.

هدفنا لإعداد المتاحة متعددة الطبقات المنتج ورقة الخلايا الجذعية، وضعنا فريقنا الأقطاب الخلوية، pericardium وسقالة ورقة الخلية. استنادا إلى سقالة الخلايا المتعددة الطبقات بداية سيتم بناؤها بسرعة مع غير الببتيد الهيدروجين ويستخدم نظام الانفعال ديناميات لضمان إمدادات التغذية في الخلايا الجذعية في المختبر. إخراج سقالة DBP المجففة ووضعها في وسط القاعدة السوداء.

وضع حلقة التوتر الأبيض على سقالة DBP، ولصقها في الناقل الأنسجة. تأكد من أن سقالة DBP ثابتة تمامًا في حامل الأنسجة. أضف 100 من وسائط ثقافة ميكروليترز على سقالة DBP.

ضع السقالة في حاضنة درجة 37 مئوية ، واسمح لها بالانكت لمدة 15 دقيقة. أخرج الخلايا من الحاضنة، وازيل وسائل الثقافة من طبق الثقافة، واغسل الخلايا بلطف بمليلترين من PBS الدافئ. إزالة جميع برنامج تلفزيوني من طبق الثقافة، وتأكد من عدم وجود سائل لا يزال.

إضافة ملليلتر إلى 1.25٪ تريبسين حل للطبق، واحتضان الخلايا لمدة ثلاث دقائق. إيقاف تأثير تريبسين عن طريق إضافة متوسط ثقافة ملليلترين. غسل بلطف الخلايا من الطبق.

نقل تعليق الخلية في أنبوب جديد 15 ملليلتر الطرد المركزي. اِيُجَل الخلايا في 220 مرة جاذبية لمدة خمس دقائق، والحصول على رواسب الخلايا. إزالة المناط، والقضاء على رواسب الخلية.

إعادة تعليق الخلايا مع ثلاثة ملليلتر 10٪ محلول السكروز. pirate 10 microliters تعليق الخلية، ورقم الخلية المحتوى يقرأ قياس الهيموليتات، واستخراج ثلاثة ملايين خلية ونقل في أنبوب الطرد المركزي الجديد 1.5 ملليلتر. ازاح الخلايا في 220 مرة الجذر التربيعي لمدة خمس دقائق، وإزالة تماما عظمى والحصول على الرواسب الخلايا.

إعداد 20 ميكروليترز 10٪ محلول السكروز. بلطف إعادة تعليق الخلايا والحصول على تعليق موحد. إضافة 20 ميكروليتر الببتيد هلام هيدرولي في الجزء العلوي من تعليق بلطف مزيج هلام الببتيد المائية، وتعليق الخلايا مع T، إخراج سقالة DBP، وترك الناقل الأنسجة، ومن ثم التعرق بلطف متوسط calculi مع T.Aspirate الخليط الخليط وإضافة بالتساوي على سقالة DBP.

أضف ملليلتر الكالسيوميدات إلى الجزء السفلي من الناقل الأنسجة. إضافة بلطف أربعة ملليلتر المتوسطة الثقافية في طبق الثقافة ثم تظهر ورقة الخلية. وضع الخلايا في الحاضنة لمدة ساعتين السماح لها الثقافة.

نظام الضخ الديناميكي تشمل حاوية ثقافة الضخ الغاز تبادل recrement وزجاجة. تجميع نظم الضخ ديناميكية كما هو مبين في الشكل. إضافة اثنين من المتوسطات ثقافة المليلتر المائية في زجاجة.

إدراج ورقة الخلية في غرفة حاوية الثقافة، إضافة ثلاثة ملليلترات الثقافة الوسيطات في الحاوية، ووضع نظم ضخ دينامية في الحاضنات، والبدء في ضخ. فتح حاوية الثقافة في إعادة تراكب ثنائي. إخراج ورقة الخلية من حاوية الثقافة ووضعها في طبق الثقافة.

استخدام ملقط واحد لشل الناقل الأنسجة واستخدام أخرى اثنين من ملقط لفصل حلقة التوتر الأبيض من القاعدة السوداء. وأخيراً، الحصول على ورقة الخلية متعددة الطبقات. سقالة DBP شفافة.

وS SEM إعادة بيع يبين أن الكليات القبض والمكونات محجوزة تماما. ويمكن الحصول على أوراق الخلية وعقد بواسطة ملقط للحفاظ على قصيرة. ويمكن نقل هذه الورقة الخلية إلى 1.5 ملليلتر أنبوب السيليندريفورم.

كنموذج على سبيل المثال بدءا من يظهر الخلية من BMFC إيجابية للغاية لعلامة الخلايا الجذعية CD 9O والأقراص المدمجة 29. بعد بناء الخلية يترك BMFC ورقة الخلية لا يزال مستويات التوسع عالية من CD 90 والأقراص المدمجة 29. بناء بنية الخلية متعددة الطبقات هو الخطوة الهامة للبروتوكول.

يتطلب وقت التحريك أربعة جل هيدروني عندما تتغير قيمة PH من SA إلى محايد ، لذلك ، من المهم غسل الخلية بمحلول السكروز لإزالة أيونات السطح. أيضا ، فإن نسبة حجم تعليق الخلية وpanthihydrogel ليست صديقة جيدة لبناء هيكل متعدد الطبقات المؤقتة. بعد تشكيل هيكل الخلايا الجذعية 3D، سترى نظام الضخ الديناميكي مهم لتثبيت هيكل متعدد الطبقات وكذلك الحفاظ على viabilities الخلايا الجذعية.

يمكن للتسرب الديناميكي لمتوسط الثقافة أن يسهل انتشار الخلايا الجذعية واستقراء سياق الخلية داخل البنية متعددة الطبقات أيضًا يجب تعديل موازين الحرارة الديناميكية للثقافة وفقًا لأنواع الخلايا الجذعية المختلفة.