البروتين كيناز ج-دلتا "الببتيد المانع صياغة" استخدام "الذهب جسيمات نانوية"

يمكن لنظامنا الفريد لتوصيل الأدوية ، الذي يستخدم 20 جسيمات ذهبية نانومترية في ببتيدات قصيرة محددة ، تثبيت جزيئات النانو الذهبية في الحل الفسيولوجي وتعزيز امتصاصه الخلوي ، وبالتالي ، تسليم الأدوية المستندة إلى الببتيد أو غيرها بشكل فعال في الخلايا. لدينا الناتج القومي الإجمالي الببتيد الهجين من السهل توليف ومستقرة. باستخدام الذهب ببتيد نانو جسيمات هجينة كحاملين للمخدرات، يمكننا نقل أدوية الببتيد إلى الخلايا بشكل فعال وفي وفرة.

تعاملنا مع إصابة الإقفاريات في الرئتين مع الناتج القومي الإجمالي / PKCi الهجين. الناتج القومي الإجمالي يجلب الببتيدات مثبطات PKC في السيتوبلازم. وكان هذا الأسلوب التسليم قادرة على الحد من إصابات الرئة أكثر شدة باستخدام جرعة أقل من PKCi من طرق التسليم الأخرى.

لبدء هذا الإجراء، استرداد الببتيدات من الثلاجة في ناقص 20 درجة مئوية، وذوبانها في درجة حرارة الغرفة. استخدم مقياسًا صغيرًا لوزن 0.01 جرام من كل ببتيد مذاب، ونقل كل ببتيد إلى أنبوب مخروطي منفصل 50 ملليلتر. إضافة 18.74 ملليلتر من المياه ديوند إلى أنبوب P2، و 16.93 ملليلتر من المياه ديوند إلى أنبوب P4.

إضافة 8.21 ملليلتر من 50٪ الأسيتونتريل المخفف في المياه الأيونية إلى أنبوب مثبطات دلتا PKC. دوامة حلول الببتيد لفترة وجيزة. ثم ضع الأنابيب في صوتنة في 40 ميغاهيرتز لمدة خمس دقائق.

بعد ذلك، قم بنقل الحلول إلى مجلس وزراء السلامة البيولوجية. من الأهمية بمكان وضع أنبوب مخروطي 50 مل في صوتاتور لمدة خمس دقائق. إذا تم تخطي هذه الخطوة، فإن الناتج القومي الإجمالي/PKCi سيشكل التجميعات.

نقل ملليلتر واحد من كل حل الببتيد إلى أنبوب مخروطي جديد 50 ملليلتر. إضافة 19 ملليلتر من المياه الأيونية إلى الأنابيب التي تحتوي على P2 و P4. وإضافة 19 ملليلتر من 50٪ الأسيتونتريل إلى أنبوب يحتوي على مثبط دلتا PKC. إضافة 475 ملليلتر من حل P2، 25 ميكرولترات من حل P4، 500 ميكرولترات من محلول مثبطات دلتا PKC إلى أنبوب 15 ملليلتر.

ثم إضافة تسعة ملليلتر من 20 نانومتر الناتج القومي الإجمالي الحل لنفس الأنبوب. إزالة حل مجتمعة من مجلس الوزراء السلامة البيولوجية والتفاف الأنبوب في رقائق الألومنيوم. ضع الأنبوب على شاكر بين عشية وضحاها.

في اليوم التالي، إعادة العينات إلى مجلس الوزراء السلامة البيولوجية. نقل 1 ملليلتر aliquots من الناتج القومي الإجمالي / PKCi الحل في أنابيب 1.5 ملليلتر الصغيرة. أجهزة الطرد المركزي الأنابيب الدقيقة في جهاز طرد مركزي صغير في 15294 مرات ز وعلى أربع درجات مئوية لمدة 30 دقيقة.

نقل أنابيب صغيرة مرة أخرى إلى مجلس الوزراء السلامة الحيوية، وإزالة supernatent من كل أنبوب، مع ضمان بيليه الناتج القومي الإجمالي لا disturbed. resuspend كل بيليه في المذيبات المطلوبة وفقا للتركيز المطلوب. لتقييم الناتج القومي الإجمالي/ PKCi الذوبان الهجين، صب 0.5 ملليلتر من الناتج القومي الإجمالي / PKCi الحل في cuvette الاستحقاق.

ضع الـ cuvette على مقياس طيف الأشعة فوق البنفسجية-فيس واختبر ذروة الامتصاص. في هذه الدراسة, البروتين كيناز C دلتا مثبطات مترافق مع الجسيمات النانوية الذهب لتشكيل الناتج القومي الإجمالي / PKCi الهجين. يجب توخي الحذر مع تقييم الخصائص الفيزيائية الحيوية للهجين ، حيث تميل الجسيمات النانوية الذهبية إلى التجميع في المذيبات.

عندما تجمع الجسيمات النانوية، فإن لون الحل يتغير من الوردي إلى الأرجواني. يتم تحليل العينات باستخدام مقياس طيفي للأشعة فوق البنفسجية Vis قادر على الكشف عنه بدرجة عالية من الحساسية. إذا لم يتم تجميع الهجين، يجب أن تكون ذروة امتصاص في 525 نانومتر.

وإذا تم تجميع الناتج القومي الإجمالي، فإن ذروة الاستيعاب ستتحول إلى اليمين. وكما يمكن أن نرى، عندما تكون المجاميع قد تشكلت، تنخفض الكثافة البصرية في الدلتا. عند صياغة الهجينة الببتيد الناتج القومي الإجمالي, من المهم أن نتذكر نسبة الببتيدات إلى الناتج القومي الإجمالي الحل ينبغي أن يكون واحد إلى تسعة.

يمكن استخدام هذه الصيغة الناتج القومي الإجمالي / PKCi لإصابة نقص التروية في نظم الجهاز غير الرئة. أي الببتيدات يمكن أن نعلق على الناتج القومي الإجمالي إذا كانت تلك الببتيدات لديها بقايا السيستين في N-terminus. وهذا يعني أن الناتج القومي الإجمالي الببتيد الهجين يمكن استخدامها لنقل أدوية الببتيد الأخرى إلى الخلية.

الببتيدات المصممة بعقلانية هي تقنية جديدة يمكن أن تجلب تفاعل بروتين بروتيني محدد داخل تلك الخلايا. هذه التقنية، التي تم تطويرها هنا، يمكن استخدامها في توصيل أدوية ببتيد جديدة أو لإصدارات معدلة من الأدوية الموجودة.