كشف الذيفان في تركيبات النانو باستخدام فحوصات ليستي (ال) أموبوسيتي ليمولوس

الكشف عن اندوتوكسينس في المواد النانوية المهندسة يمثل أحد التحديات الكبرى في مجال لطب النانوي. نقدم هنا، دراسة حالة يصف إطار يتألف من ثلاثة أشكال لل مختلفة لتقدير احتمال تلوث الذيفان في جسيمات نانوية.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة في المجال الطبي حول سلامة الأدوية نانو. مزايا هذه التقنية هو أنه هو المعيار، ويستخدم في جميع أنحاء العالم لتقييم المنتجات، إلى الأدوية نانو. مظاهرة من الإجراء، وسوف يكون باري نويون، في مختبر توصيف تكنولوجيا النانو.

لإعداد معيار المعايرة، استخدم 900 ميكرولترات من limulus amebocyte lysate، أو LAL LAL الصف المياه. و 100 ميكرولترات من التحكم في إندوتوكين القياسية، لإعداد العديد من التخفيفات المتوسطة حسب الحاجة، لتمكين إعداد معيار المعايرة مع تركيز وحدة واحدة من endotoxin لكل ملليلتر. ثم باستخدام 900 ميكرولترات من LAL الصف المياه، و 100 ميكرولترات من وحدة واحدة endotoxin لكل ملليلتر معايرة القياسية، وإعداد معيار معايرة الثانية، في تركيز وحدة 0.1 endotoxin لكل ملليلتر.

ثم كرر تخفيف المسلسل عشرة أضعاف لإعداد اثنين من معايير معايرة أقل. للحصول على ما مجموعه أربعة معايير معايرة، تتراوح بين 0001 وحدة إندوكسيين لكل ملليلتر. لإعداد وحدة 05 endotoxin لكل ملليلتر مراقبة الجودة، يجمع بين 50 ميكرولتر من وحدة endotoxin واحد لكل ملليلتر من التحكم محلول endotoxin القياسية، مع 950 ميكرولترات من المياه الصف LAL.

المقبل في البرنامج حدد إعدادات الصك ، وإنشاء القالب. حدد تجميع البيانات، وأدخل معرف الاختبار ومجموعة البيانات في علامة التبويب عام. ضمن علامة التبويب الأجهزة، حدد نوع الجهاز، والأسلوب LAL، وتحقق من ظهور رقم تسلسلي ومعرف النظام ومعلومات المنفذ التسلسلي على الشاشة.

انقر فوق موافق مرتين لتأكيد اختيار الصك، والاتصال مع الصك، وأدخل معرف العينة في نفس الترتيب الذي سيتم اختبار العينات. ثم استخدم الأزرار الافتراضية لإدخال منحنى التحكم القياسي السالب، واختبار العينات. إضافة حجم مناسب من معايير معايرة التحكم السلبية، ومراقبة الجودة في أنابيب الزجاج قبل مكررة المسمى.

وإضافة حجم مناسب من LAL إلى أول اختبار حقير. دوامة الخسيس لفترة وجيزة، ووضع القارورة في فتحات الاختبارات المناسبة في العداد الصك. قبل تحميل العينات، تنفيذ عدة عمليات تخفيف من المواد نانو اختبار ضمن الحد الأقصى لتخفيف صالحة كما هو موضح.

لإعداد وحدة 05 endotoxin لكل ملليلتر من التحكم في تعزيز تثبيط، والجمع بين 25 ميكرولترات من وحدة endotoxin واحد لكل ملليلتر من التحكم محلول endotoxin القياسية، مع 475 ميكرولترات من مادة نانو اختبار في تخفيف معين. بعد الدوامة، تحميل ضوابط تعزيز الابتكار المناسبة، وعينات الدراسة غير المنفقة في الصك. ثم aliquot unspiked والمواد النانوية ارتفعت في تخفيف محددة في أنابيب قبل المسمى.

قبل دوامة، وتحميل في العداد الصك. لتنفيذ جل جل- تجلط LAL، وإعداد التحكم في endotoxin القياسية لتركيز النهائي من أربعة لامدا، والجمع بين 100 ميكرولترات من المعيار، مع 100 ميكرولترات من الماء، أو عينة اختبار لتحقيق تركيز نهائي من التحكم في endotoxin القياسية اثنين من لامدا. إضافة 100 ميكرولترات من ليسين إلى كل تخفيف لامدا.

دوامة الأنابيب لفترة وجيزة، ووضع رف من الأنابيب في حمام الماء 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. في نهاية الحضانة، عكس الأنابيب مع حركة ناعمة، وتسجيل النتائج يدويا باستخدام زائد لجلط شركة، وناقصا لعدم وجود جلطة، أو جلطة فضفاضة. في هذا التحليل التمثيلي، تدخلت doxorubicin ليبوسومات البيجية PEGylated مع LAL CHROMOGENIC عند التخفيف خمسة، ولكن تم التغلب على هذا التداخل في التخفيفات أعلى.

وكان الانتعاش سبايك بين 50 و 200٪ عندما تم اختبار صياغة في التخفيفات 50 و 500 في LAL العكر وchromogenic، وكذلك في التخفيف خمسة، في LAL العكر. عندما تم تعديلها من قبل عامل التخفيف ، كانت النتائج متسقة بين الأوهام في كلتا المقالتين. وعلاوة على ذلك، كانت النتائج متسقة بين أشكال المقالات الثلاثة.

تذكر أن كل عينة لها مجموعة خاصة بها من التخفيفات، كل تنسيق LAL يستخدم معيار التحكم في doxin وlysate، وأن الأنابيب المستخدمة لإعداد التخفيفات، وأداء رد فعل في مختلفة لكل مقال LAL. لهذا الإجراء يمكن تنفيذ أساليب أخرى مثل الإجابة على أسئلة إضافية حول المواد بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للخياطة ومجال الطب نانو، لاستكشاف التطبيقات الطبية لتكنولوجيا النانو وضعت الأدوية في البشر، والنماذج السريرية بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر الرئيسيات غير البشرية والأرانب والكلاب والجرذان. لا تنسى أن العمل مع doxin يمكن أن تكون خطرة للغاية والاحتياطات مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية، وينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.