ملء المصفوفة جزيرة ليلى ح Omental Omental داخل "جزيرة ليلى استخدام زرع" (صاروخ موجه)

نقدم هنا، بروتوكول للتحقق من صحة المجراة في العلاج الخلية على أساس المائية، يتضح من مثال زرع جزيرة ليلى. ح-أومينتال جزيرة مصفوفة ملء غرس (صاروخ موجه) يسمح غرس مزيج الخلية-المائية بين طبقات أومينتال، قرب الأوعية الدموية، إلى أقصى حد ممكن انجرافتمينت في بيئة التمثيل الغذائي سليم.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على السؤال الرئيسي في مجال العلاج بالخلايا، مثل، يمكن أن تكون الأمثل زرع جزيرة بواسطة تقنية جراحية hOMING؟ المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها بسيطة وسريعة وقابلة للتواؤم ، والتحقق من صحة المواد الحيوية هو أيضا سريع جدا. إن العرض المرئي لوضع الإبرة أمر بالغ الأهمية لضمان حقنة الكسب غير المشروع السليم داخل الوُمَنَة ، حيث يمكن أن تؤدي الإبرة الموضوعة بشكل غير صحيح إلى تسرب الجزيرة.

للحث على مرض السكري، حقن 75 ملليغرام لكل كيلوغرام من التربتوباتوزتوسين intraperitonally في كل ستة أسابيع من العمر، 150 إلى 190 غرام لويس المتلقي الفئران، والتحقق من حالة مرض السكري عن طريق قياس السكر في الدم يوميا لأول أربعة أيام بعد الحقن. عندما الفئران يحمل جليكيميا أكثر من غرامين للتر الواحد، حقن تحت الجلد ست وحدات من الأنسولين طويلة المفعول يوميا لمنع مضاعفات مرض السكري وفقدان الوزن. إدراج الفئران في الفوج التجريبية عندما اثنين من التدابير من مستوى الجلوكوز في الدم الوريدي الذيل هي أكبر من أربعة إلى خمسة غرامات للتر الواحد لمدة يومين متتاليين، مع مستوى C-الببتيد تحت 200 picomolar.

لزرع بيليه، تأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم في الحيوان المتلقي السكري تخدير وتنظيف الرقبة مع اليود povidone. حلق منطقة الزرع وتنظيف الجلد المكشوف مع اليود povidone إضافية. بعد ثلاث دقائق، تعقيم واحد 1/2 كريات الأنسولين في واحد إلى خمسة محلول اليود povidone واستخدام trocar قياس 16 لاختراق الجلد الرقبة المكشوفة.

ثم، واستخدام دليل stylet لإدراج الكريات وخياطة الفتح مع نقطة واحدة. تنظيف غرزة مع المزيد من اليود povidone والسماح للجرذ لاسترداد في قفص مع الرصد والغذاء لتجنب نقص السكر في الدم. لقياس كفاءة الكريات، وقياس انخفاض الجليميا كل أسبوع لمدة شهر واحد بعد زرع، بما في ذلك الفئران في الفوج التجريبي عندما يتم الحفاظ على مقياس من الدم الذيل الوريد C-الببتيد مستوى تحت 200 picomolar في شهر واحد بعد زرع الكرية الأنسولين.

بالنسبة لتعبئة المصفوفة داخل المصفوفة، عد عدد الجزر المعزولة عن الجرذان المانحة السليمة في مكافئات الجزر، واعد 7660 جزيرة مكافئة لكل كيلوغرام من المتلقي في أنابيب فردية من 1.5 ملليلتر. غسل كل aliquot مع 500 ميكرولترات من المتوسط CMRL دون مصل البقر الجنين و resuspend الكريات جزيرة في 150 ميكرولترات من الناقل هيدروجيل alginate الطازجة المعدة في أنبوب مع خلط دقيق قبل وضع الأنابيب على الجليد. بعد ذلك، قم بتحميل حقن ذات ملليلتر واحدة مجهزة بإبرة 21 قياس أترابتومي مع 150 ميكرولتر من ألجينات فارغة دون حجم ميت، تليها 150 ميكرولترات من الجزر alginate زائد.

وضع الحقن على الجليد وإعداد عنق الحيوان المتلقي الأول كما أظهرت للتو. استخدام مشرط لإجراء شق على الجرح القديم واستخدام ملقط لإزالة الكريات. إغلاق غرزة مع واحد أو اثنين من نقاط غرزة واحدة ووضع الفئران في موقف supine.

تعقيم منطقة البريتونية وحلق. استخدام مشرط لإنشاء واحد 1/2 سنتيمتر البطن فقط تحت القص. ضع شاشًا مبللًا معقمة حول الشق وحدد وسادة الدهون الومنائية الموجودة بجوار المعدة.

استخدام ملقط لسحب بلطف وسادة الدهون من تجويف البريتوني، ونشرها على الشاش. هيدرات الأنسجة الأنفية بشكل جيد مع ملليلترين من ما قبل الدافئة، 37 درجة مئوية المالحة المعقمة، و، عقد الأنسجة مع ملقط منحني صغير في يد واحدة، واختراق الحافة الوميمية بين الطبقات omental مع إبرة حقنة محملة جزيرة مع الآخر. عند إدخال الإبرة، تأكد من أنها محاطة بطبقة رقيقة من الأنسجة الوُمَنَية قبل البدء في الحقن.

أدخل الإبرة تمامًا وتبدأ ببطء في حقن إعداد الجزر الصغيرة مع سحب الإبرة للسماح بالجُزيرات المحقونة أن تنتشر في جميع أنحاء الأنسجة. أثناء الحقن، تراجع الإبرة إلى حافة الأنسجة، ووقف الحقن عندما تكون الإبرة خارج تقريبا. ثم انتظر خمس ثوان قبل بدء حقن جديد في الموقع التالي.

وحقن ثلاثة إلى أربعة aliquots أخرى كما هو موضح. عندما تم الاستغناء عن كل من هيدروجيل، سحب الإبرة بعناية لتجنب فقدان الجزر حقن، والتحقق من أن الجزر ليست مجمعة في حقنة في نهاية الحقن. عندما يتم تسليم جميع الجزر ، قم بترطيب الوميم وجدار استئصال البطن قبل إعادة الأنسجة الوميمية بعناية إلى تجويف البطن.

حقن مليلترين من المالحة المعقمة التي تم تسخينها مسبقًا في تجويف البطن لإعادة هيدرات الجرذ. ثم أغلق جدار العضلات مع خياطة الخيط المستمر وغرزة طبقة الجلد مع نقطة غرزة واحدة. بعد شهر إلى شهرين من المتابعة الأيضية ، افتح الشق الجراحي لكل مستلم كما هو موضح ، واستخدم ملقطًا لنشر الأومنتا بعناية على قطع الشاش المنقوعة بالملوحة الموضوعة بجوار الشقوق.

بدءا من المنطقة التي تُلِق إلى ذيل البنكرياس، استخدم المقص لمعالجة الأنسجة الوُمَنَية وحقنْ مليلترين من الملح المُسْدَئ قبلَ إغلاق كل كما هو مُظهر. إصلاح أومينتا استردادها في 4٪ paraformaldehyde قبل تضمين في البارافين. ثم، الحصول على أربعة ميكرومتر سميكة أقسام من الأنسجة على microtome وتطبيق الهماتوسلين وeosin وصمة عار للتقييم المورفولوجي لعمليات الزرع.

وكثيراً ما لوحظت حبات ديكستران المزروعة باستخدام طريقة hOMING كما هو موضح على مقربة من الأوعية الدموية وزرعت بشكل جيد داخل الأنسجة الدهنية. في هذه الدراسة ايزوجينيك تمثيلية، تم التحكم في الجلس الدم أولاً عن طريق زرع واحد 1/2 الكريات الأنسولين كما هو موضح ومن ثم من قبل الجزر المزروعة كما يتضح من جليكيميا من ما يقرب من غرامين للتر الواحد وC-peptidemia أكبر من 500 picomolar في الحيوانات المتلقية. وبالإضافة إلى ذلك، كشف التحليل النسيجي للومينتو الذي تم زرعه عن وجود جزر ذات أوعية عالية، على الأرجح نتيجة لقربها من الأوعية الدموية.

بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجالات العلاج الخلوي لاستكشاف البيئة الدقيقة للخلايا ذات الهندسة الحيوية في النماذج قبل الظهر.