استخدام البرزي caudatum براميسيوم كوسيلة للأمراض المنقولة بالأغذية في "اليرقات الزرد"

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأحياء الدقيقة حول ديناميات الاستعمار والعدوى من قبل الكائنات الحية الدقيقة في الجهاز الهضمي. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها أكثر تمثيلا للعدوى التي تنقلها الأغذية في البشر وأنها تقلل من تلف الأنسجة المحتملة في الأسماك مقارنة مع الزلاجة الفموية. المرئية التوضيحية لهذا الأسلوب أمر بالغ الأهمية كما يمكن أن يكون من الصعب على خطوات الغسيل لتنفيذ بسبب طبيعة عالية من المظلة.

من ثقافة النمو الحية، إضافة ملليلتر واحد من ثقافة البارامسيوم وميليلتر واحد من ثقافة MG1655 الإشريكية القولونية إلى قارورة زراعة الأنسجة عشرة ملليلتر تحتوي على ثمانية ملليلتر من E3 المتوسطة. دوامة طفيفة القارورة قبل وضعه في 22 درجة مئوية تمرير ملليلتر واحد من الثقافة المشتركة في قارورة جديدة ثقافة الأنسجة عشرة ملليلتر تحتوي على تسعة ملليلتر من المتوسط E3 الطازجة، وتستكمل مع 108 وحدات تشكيل مستعمرة لكل ملليلتر من القولونية القولونية MG1655، كل أسبوعين. لتحديد نصف العمر البكتيري داخل paramecium عدد الباراميا من كثافة بصرية من 600 بكتيريا الباراميا المشتركة في الثقافة وإضافة 50 ميكرولتر aliquot من اغرات إلى أنبوب جديد 1.5 ملليلتر microcentrifuge كل ساعة لمدة ست ساعات.

إضافة 950 ميكرولترات من واحد في المئة السطحي غير الأيونية في برنامج تلفزيوني إلى الأنابيب. وتحلل البارامسيا في كل عينة مع دقيقة واحدة من دوامة، ثم جعل واحد من كل عشرة تمييعات من كل عينة في برنامج تلفزيوني عقيمة. ولوحة 100 ميكروليتر من كل تخفيف على لوحات انتقائية لاحتضان 16 ساعة في 37 درجة مئوية.

في اليوم التالي، عد فقط المستعمرات الفردية المعزولة والمتميزة لتحديد عدد المستعمرات البكتيرية على اللوحة. وتحديد لوحة مع التخفيف الذي ينتج 30-300 مستعمرة تشكيل وحدات. في اليوم السابق للعدوى، وجمع حجم واحد من البكتيريا من كثافة بصرية من 600 ثقافة لكل علاج عن طريق الطرد المركزي.

وإعادة تعليق الكريات في ملليلتر واحد من E3 المتوسطة لكل أنبوب. بعد ذلك، أضف ميكرولتر واحد من وصمة عار بكتيرية مناسبة لكل تعليق بكتيري. وحماية أنابيب تبييض الصور مع احباط.

قبل احتضان عينات البكتيريا مع تناوب نهاية النهاية لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة، وغسل البكتيريا مرتين في حجم كبير من E3 المتوسطة لإزالة صبغة الزائدة. وإعادة تعليق الكريات في ملليلتر واحد من طازج E3 المتوسطة لكل أنبوب.

ثم، إضافة ملليلتر واحد من التعليق البكتيري إلى كل من قارورة اثنين من الباراميسيا الطازجة لكل حالة لاحتضان لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. سحب محتويات كل من قارورة لكل حالة في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر الفردية. وبليه العينات عن طريق الطرد المركزي.

باستخدام ماصة معقمة، استبدال ما يقرب من عشرة ملليلترات من E3 supernatant في كل أنبوب مع عشرة ملليلترات من E3 المتوسطة الطازجة ل3 يغسل عن طريق الطرد المركزي. بعد الغسيل الأخير، إزالة ما يقرب من عشرة ملليلترات من عظمى E3، مع الحرص على عدم تعطيل الكريات، وإعادة تعليق الكريات في المليلترات العشر المتبقية من E3 المتوسطة. نقل 500 ميكرولتررس من كل تعليق إلى أنابيب 1.5 ملليلتر microcenrifuge الفردية و بيليه البارامسيا عن طريق الطرد المركزي.

تجاهل 400 ميكرولترات من supernatants، وإضافة 20 ميكرولترات من حل الفورمالديهايد 36.5 في المئة إلى 100 ميكرولترات المتبقية من البارامسيا مع الأنابيب لطيف. بعد خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة، وقياس الحجم الفعلي في كل أنبوب بواسطة ماصة قبل عد عدد البارامشيا الميتة لكل ملليلتر. بالنسبة للعدوى التي تنقلها الأغذية من الحمار الوحشي، تمييع عينات الباراماسية إلى ضعفين عشرة إلى خمسة بارامسيا لكل ملليلتر من التركيز المتوسط E3.

وإضافة 3 ملليلتر من كل ثقافة الباراشيا إلى بئر واحد من 6 لوحة جيدا لكل حالة. بعد ذلك، نقل عشرة حمار وحشي مُهدّد إلى كل بئر في حجم أدنى من السائل. واحتضان الثقافات المشتركة لمدة ساعتين في 30 درجة مئوية في حاضنة نهارية في ظل ظروف النهار.

لتحديد معدل الافتراس، شاهد سمك الحمار الوحشي المغذي تحت مجهر ستيريو أثناء الحصول على لقطات فيديو لالتقاط الفريسة. وتتميز فريسة القبض على ضرب من الحمار الوحشي نحو الفريسة. ويقدر أن كل ضربة هي حدث واحد للقبض على فريسة.

في نهاية الحضانة، وغسل حمار وحشي في 5 آبار مختلفة تحتوي على 3 ملليلتر من المتوسط E3 الطازجة تكملها 100 ملليغرام لكل لتر من تريكين في بئر. وتضمين كل حمار وحشي في 3 ملليلتر من 1 في المئة من أغاروز منخفضة الذوبان في لوحة سوداء جيدة ستة. عندما تم تضمين كل من الأسماك، ضع لوحة تحت مجهر ستيريو واستخدام تلميح تحميل هلام قص للتأكد من أن رؤساء على اليسار والذيول هي على اليمين في كل حقل عرض.

انتظر لمدة 5 دقائق لagarose لتعيين، ثم تراكب الأسماك جزءا لا يتجزأ مع المتوسط E3 الطازجة تكملها tricaine، وصورة حمار وحشي على المجهر الفلورسنت لتقييم التقدم المحرز في الالتهابات البكتيرية. بالنسبة للكولي الإليئي المسبب للأمراض، تكون الكثافة البكتيرية الأولية 790 بكتيريا لكل باراميكيوم، وتتحلل البكتيريا داخل الفاكوليات لكل ذرة قطع باراميكيوم مع نصف عمر حوالي 2.3 ساعة. ويرافق افترس سلوك ضرب مميزة، وتحديد معدل افتراس يستند على افتراض كل ضربة يؤدي إلى استيعاب 1 paramecium.

بعد الهضم، تنتقل البكتيريا الحرة من الأمعاء الأمامية إلى الأمعاء الوسطى واللاحقة، حيث يتم اكتشافها بعد حوالي 1 إلى 2 ساعة من بداية الفريسة. S-enterica، على سبيل المثال، يُترجم في المقام الأول في الغشاء المخاطي المعوي مع بعض الغزو الظهاري مما يؤدي إلى تسلل العدلات إلى الظهارة. لا تنس أن العمل مع أنواع معينة من البكتيريا يمكن أن تكون خطرة للغاية، وأن الاحتياطات مثل ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة يجب أن تتخذ دائما أثناء تنفيذ هذا الإجراء.