تطبيق البروتوكول منخفضة التكلفة لتحليل البصمة والمعلق اختبار مربع للفئران الإجهاد المزمن من ضبط النفس

لدينا بروتوكول باستخدام تحليل مشية مفيد جدا في تحديد ما إذا كانت محركات الماوس من اضطرابات الحركة تحاكي أعراض المريض مع اضطراب المشية. لذلك ، يمكن إجراء تحليل المشية في اختبار تحميل الإجهاد بسهولة ، وبدون معدات باهظة الثمن ، للكشف عن بعض الأنماط الظاهرية الحركية في الفئران ، مع عدم وجود تأثيرات تلقائية. قبل بدء الاختبار السلوكي، قم بتسجيل وزن كل فأرة، واستخدم قلم وضع العلامات لتسمية كل ذيل.

عندما تم وزن جميع الحيوانات وعلامة، ووضع الفئران في غرفة تجريبية لمدة 30 دقيقة على الأقل، وتعيين واضحة، 25 في 25 في 40 مربع معلقة سم، مع غطاء شبكة قابلة للتناوب، على مقاعد البدلاء في المختبر. عندما تكون الفئران قد تأقلمت، ضع ماوس واحد في وسط غطاء الشبكة، وقم بتقلب الغطاء بشكل دقيق. ثم، قياس الكمون سقوط الماوس من غطاء شبكة، قبل العودة الماوس إلى انها قفص المنزل.

عندما تم اختبار جميع الفئران، ضع قطعة من الورق الأبيض من 9.9 سنتمتر في 42 على مقعد المختبر، ووضع مربع هدف مظلم في نهاية الورقة البعيدة. وضع صناديق أخرى، تقريبا نفس طول ورقة، على جانبي المدرج لمنع الهروب. وإضافة الحبر الأسود والأحمر لفصل 35 ملليلتر أطباق بيتري.

لتدريب الفئران للتحليل، ضع الماوس في الطرف القريب من الورقة، مواجهًا مربع الهدف، ودع الماوس يمشي من النهاية القريبة للورقة إلى مربع الهدف. عندما يصل الماوس إلى المربع ، يقشر الحيوان برفق ، ويدس الظهر والذيل بين كرة الإبهام والأصابع الأخرى ، للحد من حركة الأطراف الخلفية. وتزج قيعان من قبليمبليمبس في الحبر الأحمر، وأسفل الأطراف الخلفية في الحبر الأسود.

ثم، فوراً ضع الماوس مرة أخرى إلى النهاية القريبة من الورقة، التي تواجه مربع الهدف، ودع الماوس يمشي من النهاية القريبة إلى مربع الهدف. بعد تجفيف الهواء ورقة القدم المطبوعة، واستخدام مسطرة للحصول على ثلاثة قياسات لطول خطوة، من خلال قياس المسافات بين نفس الأجزاء من بصمات مخلب. من عرض القاعدة الأمامية ، من خلال رسم خط بين آثار أقدام متتالية ، من نفس الجانب ، أمامية ، وقياس طول الخط الرأسي من لوحة البصمة الأمامية ، إلى الخط المرسوم بين آثار الأقدام.

وعرض قاعدة الخلفية، من خلال رسم خط بين آثار الأقدام الخلفية اليمنى المتتابعة، وقياس طول الخط العمودي من لوحة البصمة الخلفية اليسرى، إلى الخط المرسوم بين آثار الأقدام اليمنى الأخرى. للتداخل، قم بقياس المسافة بين منصات البصمات الأمامية وبصمات الأقدام الخلفية. لإعداد أنبوب ضبط النفس، استخدم تمرين مربع لجعل 16 حفرة 2 ملليمتر في أنبوب 50 ملليلتر على طول علامات المقياس، والخلف لكل علامة مقياس.

قطع طرف الأنبوب لجعل حفرة خمسة ملليمتر، للتنفس، وجعل ثقب أربعة ملليمتر في غطاء أنبوب، للذيل. لاختبار الإجهاد تحميل، scruff الماوس، ووضع الحيوان في رأس أنبوب تقييد أولا، مع forelimbs محصورة بلطف. تمرير الذيل من خلال ثقب في الغطاء قبل وضع سقف الأنبوب.

ووضع الماوس على أعلى مقاعد البدلاء لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. في نهاية فترة الإجهاد التحميل، وإزالة الماوس من الأنبوب، والعودة إلى قفص الحيوان المنزل. كما لوحظ في هذه الأرقام التمثيلية ، heterozygous سريع بداية خلل التوتر باركنسونية نموذج الفئران ، وتبين أقصر بكثير من الأمام وأطوال خطوة hindlimb ، من يفعل زملاءهم القمامة من النوع البرية في أربعة أسابيع من العمر.

الإجهاد heterozygous سريع بداية خلل التوتر باركنسونية الفئران نموذج, كما يحمل أطوال خطوة أقصر بكثير من كلا الطرفين من تلك التي من النوع البرية وشدد النفايات الاصحاب في ثمانية أسابيع من العمر. عدم التماثل في أطوال خطوات كلا الطرفين لا تختلف اختلافا كبيرا، في أي مجموعة من الفئران، في أي سن. القاعدة الأمامية وتداخلات كلا الطرفين متشابهة أيضا، في جميع الفئات، في جميع الأعمار.

القاعدة الخلفية هي أوسع بكثير في هذه وشدد heterozygous سريع بداية عسر الحركة باركنسونيا الفئران نموذج, من تلك التي لوحظت في الحيوانات من نوع البرية الإجهاد في 10 أسابيع من العمر, مشيرا إلى أن الإجهاد يسبب العجز في الحركة الحركية في عسر الحركة السريعة ظهور راكنسونيا الفئران نموذج. لا توجد اختلافات كبيرة في وقت الشنق ، بين النوع البري والمتحول ، لوحظت في الحيوانات القديمة من أربعة إلى 10 أسابيع. في 12 أسبوعا من العمر، ومع ذلك، فإن الوقت شنقا من الإجهاد فئران البرية من نوع أطول بكثير من أن من الحيوانات الأخرى، مما يشير إلى أن العجز في المحرك في heterozygous سريع بداية الشلل الرعاش باركنسوني فئران نموذج، هو تمييز عن الفئران من النوع البري عن طريق اختبار ضبط النفس في الحيوانات القديمة.

ضع الماوس على الورقة مباشرة بعد أن يعلق الماوس قيعان الأطراف في الحبر لتجنب تجفيف الحبر قبل اختبار المشي. اختبارات إضافية للخصائص العاطفية، مثل حقل مفتوح، مرتفعة زائد المتاهة، واختبار السباحة كله، يمكن أن يؤديها للإجابة على ما إذا كان شذوذ المشية نتيجة من العجز الحركي فقط. يمكن استخدام بروتوكولنا لاستكشاف قابلية الإجهاد ، عن طريق تغيير عدد ومدة تحميل الإجهاد ، ومقارنة الأنماط الظاهرية الحركية بين ظروف التحميل المختلفة.

يمكن استخدام بروتوكولنا لاستكشاف قابلية الإجهاد عن طريق تغيير عدد ومدة التحميلات الإجهاد، ومقارنة الظاهريات الحركية بين ظروف التحميل المختلفة.