سير عمل بسيطة هجرة/غزو تصوير خلية يعيش الآلي باستخدام

إن انتقال الخلايا السرطانية أمر حاسم لبدء الانبثاث. لذلك ، فإن التحقيق في حركة الخلايا والقدرة الغازية للخلايا السرطانية أمر مهم للغاية. هذه الطريقة المتكاملة للتحقيق في انتقال الخلايا السرطانية والغزو ، على منصة واحدة في الوقت الحقيقي ، توفر خيارًا سهلًا وفعالًا للوقت لدراسة حركة الخلايا وعلم الأمراض.

هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في غزو الخلايا السرطانية، من خلال مصفوفة خارج الخلوية، ويمكن تطبيقها على أنواع الخلايا الأخرى. لتحقيق وقت الصفر الأمثل، تأكد من أن كثافة البذر قد تم تحسينها ولا تطيل فترة الحضانة بمجرد أن وصلت الخلية monolayer 100 في المئة التقاء. لتحديد العدد الأمثل للخلايا المصنفة لإجراء فحص الترحيل، ضع الخلايا في مجموعة من الكثافات في ثلاث ألواح ثلاثية في لوحة من 96 جدارًا.

ضع اللوحة في صورة الخلية المباشرة، وحدد عمليات المسح من قائمة المهام في برنامج التصوير. في جزء إعداد الدرج، حدد مواضع اللوحة، وانقر على إضافة vessel'to تحديد نوع اللوحة. في جزء إعداد المسح الضوئي، حدد أو قم بتحرير نمط المسح الضوئي وفقًا لإعداد اللوحة التجريبية، ثم قم بتعيين نوع المسح الضوئي كنمط قياسي.

انقر بزر الماوس الأيمن فوق المخطط الزمني، وحدد تعيين فواصل زمنية. ثم قم بتعيين إضافة عمليات مسح كل إلى ساعتين لمدة 24 ساعة، وانقر فوق تطبيق. بعد 24 ساعة، افتح درج الإعداد للسماح لوحة التجريبية ليتم اختيارها، وانقر على إزالة السفينة.

حدد ثلاثة إلى ستة صور تمثيلية، ووضعها في مجموعة صور جديدة. لتحديد تعريف معالجة مناسب، استخدم ضبط التجزئة، التنظيف، و عوامل التصفية لتطبيق قناع التقاء مناسب، واستخدم معاينة all'current لعرض دقة الأقنعة. إطلاق وظيفة التحليل وتحديد كثافة الخلية الأمثل، وفقا لالتقاء تقريبا 100 في المئة مع الزمن، في غضون ست إلى ثماني عشرة ساعة، اعتمادا على متى يبدأ إجراء فحص الهجرة.

ثم، تطبيق أداة تحليل معالجة التقاء على مرحلة عالية الوضوح على النقيض الصور التي يتم جمعها تلقائيا لتوليد منحنى انتشار الخلايا مع مرور الوقت. قبل البدء في الفحص ، معطف لوحة للجرافضة مع 50 ميكرولتر من هلام مصفوفة خارج الخلية ، مخففة في الجليد الباردة خلية ثقافة المتوسطة ، إلى 100 ميكروغرام في المليلتر التركيز. ثم، ضع اللوحة في حاضنة ثقافة الخلية بين عشية وضحاها.

بعد ظهر اليوم التالي ، تعرق بلطف المتوسط الزائد ، وطبق الخلايا في الكثافة المثلى ، في ثلاث ية ، في الآبار المناسبة من لوحة مصفوفات خارج الخلية المغلفة ، وإلى لوحة إضافية غير مصقولة 96 جيدا. ثم، ضع اللوحات في حاضنة ثقافة الخلية بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، ضع لوحة مسحة الترحيل غير المصقول في حامل لوحة الأساس لأداة الخدش، واستخدم المسامير الإرشادية لوضع الجزء العلوي من الحامل بعناية إلى القاعدة.

اضغط مع الاستمرار على رافعة سوداء مع رفع كتلة دبوس بعناية لجعل الخدوش. وينبغي أن تكون الخدوش في كل بئر مرئية بالعين المجردة، وكذلك تحت المجهر. ثم، قم بغسل اللوحة مرة أو مرتين بوسيلة ثقافة مُدفأة مسبقًا لإزالة أي خلايا منفصلة أو أوراق خلايا.

بالنسبة للتشـاوض بالغزو، خدش اللوح المطلي كما هو موضح للتو. بعد إزالة أي خلايا وملاءات منفصلة، استخدم صندوقًا باردًا مبردًا مسبقًا لتكبيل الطبق عند أربع درجات مئوية لمدة خمس دقائق قبل التعرق بعناية في الوسط البارد. بعد ذلك، إضافة 50 ميكرولترات من هلام مصفوفة خارج الخلية المخفف في الآبار المناسبة ووضع لوحة في حاضنة ثقافة الخلية لمدة ثلاثين دقيقة.

فقاعات شائعة عند العمل مع هلام مصفوفة خارج الخلية، ولكن يمكن القضاء عليها عن طريق الطامح 70 في المئة الإيثانول. ثم إضافة 100 ميكرولترات من الطازجة، وحار المتوسطة، مع أو بدون مجمع الاختبار، إلى الآبار المناسبة إما الهجرة أو لوحة اختبار الغزو، ووضع لوحة في منصة التصوير الخلية الحية. لتنظيف أداة الخدش ، ضع كتلة الدبوس العلوي في قوارب غسيل فردية 45 ملليلتر ، تحتوي على 5 في المئة من المنظفات واحد ، واحد في المئة من المنظفات اثنين ، الماء المقطر العقيم ، أو 70 في المئة الإيثانول لمدة خمس دقائق لكل غسيل قبل وضع أداة الخدش مرة أخرى على لوحة قاعدتها ، للتخزين في بيئة خالية من الغبار.

لتصوير مقايسات الجرح، بعد السماح للصفيحة بالتركيل لمدة خمس دقائق، حدد نوع الوعاء كصفح سجل الصورة، وقم بتعيين نوع المسح الضوئي كجرح خدش. حدد أو قم بتحرير نمط المسح الضوئي، وفقًا لإعداد اللوحة التجريبية، وحدد الجدول الزمني للمسح الضوئي المتكرر كل ساعة إلى ساعتين لمدة 72 ساعة، أو حتى تلتئم الجروح كما هو موضح. عندما تلتئم جميع الجروح، أوقف المسح الضوئي، واختر ثلاث إلى ست صور تمثيلية، تمتد على مجموعة من النسب المئوية للصوت، بما في ذلك الصور بعد إجراء الجرح مباشرة، وإغلاق الجروح بنسبة 10 و 50 في المائة.

لتحديد تعريف معالجة مناسب، قم بتطبيق قناع جرح الخدش المناسب، وقناع التقاء كما هو موضح، واستخدم معاينة all'current لعرض دقة الأقنعة. ثم، قم بتشغيل وظيفة التحليل. في فحص الهجرة، عرض الجرح هو متوسط المسافة بين أغطية الخلايا بجانب الجرح.

التقاء الجرح هو التقاء داخل المنطقة الجرحى. وينبغي أن يكون التقاء الجرح الأولي المثالي على مقربة من الصفر في المئة. تشير كثافة الجرح النسبي والتقاء الجروح إلى سرعة الخلايا التي تحتل منطقة جرح الخدش.

تتداخل هذه البيانات تقريباً في كل من خطوط الخلايا التمثيلية هذه. خطوط الخلية المختلفة تظهر قدرات التئام الجروح مختلفة جدا، مما يدل على قدرات الهجرة التفاضلية بين خطوط الخلية. على سبيل المثال، لوحظ lamellipodia في هذا الثدي غدية خط الخلية في جبهة الهجرة في بداية الهجرة، في حين أن هذا مخاطين 1 المنتجة لسرطان الثدي خط الخلية أظهرت أي علامة على الهجرة الخلية في نفس النقطة الوقت.

وعلاوة على ذلك، كانت كثافة الجرح النسبي لخط الثدي غدية مشبعة بعد 50 ساعة، في حين أن كثافة الجرح النسبي لخط خلايا سرطان الثدي المنتجة للموسين 1 لم تتغير بمرور الوقت، مما يؤكد على النمط الظاهري الشديد الغازية لخلايا الخلايا الغدية وعدم التوغل في خلايا سرطان الثدي المنتجة للموسين 1. كما تصرفت خلايا الغدة السرطانية بشكل مختلف أثناء غزوها من خلال هلام المصفوفة خارج الخلية، مما يدل على مورفولوجيا ممدود مع نتوءات رائدة، وفي مقايسات الهجرة، تم تصور بليب في جبهة الهجرة. عند الطلاء، تذكر أنه إذا كانت الخلايا قليلة جداً بذر، فإن الصفر لن يتشكل بشكل صحيح، وإذا تم زرع الكثير من الخلايا، سيكون هناك اكتظاظ.

بعد هذا الإجراء، يمكن إضافة علاجات المسار، مما يسمح بتكييف هذه الطريقة لفحص المسار عالي الإنتاجية. هذه الطريقة تسمح للباحثين بإجراء هذه المقايسات على منصة واحدة ، وهي عالية الإنتاجية ، وتسمح للباحثين بمراقبة خلاياهم في الوقت الحقيقي ، وليس في نقطة النهاية التجريبية. قد تكون المطهرات المستخدمة لتعقيم أداة الخدش خطرة.

تأكد من جمع والتخلص من الحلول وفقا لMSDS ذات الصلة، وخطوط الزناد العادية للمرفق الخاص بك.