قياس حساس للغاية من نفاذية الكبيبي في الفئران مع الفلورسيين إيزوثيوسيانات-بوليسوكروز 70

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أمراض الكلى حول دور نفاذية الكبيات في أمراض الكلى. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن الزيادات الصغيرة والعابرة من نفاذية الكبيّة يتم الكشف عنها باستخدام متتبع الرصاص الفلورسنت المسمى. بعد التخدير، ضع قسطرة بولية في فأرة الإناث.

ضع الماوس في وظيفة إعادة شغل الظهر. تشديد أسفل البطن والعثور على أوستيوم مجرى البول. الحصول على الجزء البلاستيك من القسطرة من 22 G أنجيوكاثيتر وتشحيم مع هلام إكسيلوكاين.

استخدام السبابة اليسرى لوضع التوتر الدقيق على أسفل البطن وإدخال القسطرة ثلاثة ملليمترات في أوستريوم مجرى البول في حين بالتوازي مع محور مجرى مجرى الظهر. بدوره الجزء العلوي من angiocatheter 180 درجة عن طريق الحفاظ على طرف داخل أوستيوم مجرى البول والحفاظ على محور مجرى البول. ثم، أدخل القسطرة سبعة ملليمتر كذلك في الماوس بحيث يتم وضعها داخل المثانة.

ضع أنبوب بني 1.5 ملليلتر فوق الجزء العلوي من أنجيوكاثيتر لجمع البول. تطبيق ملليلتر واحد من 0.9٪ كلوريد الصوديوم تحت الجلد لتعزيز إنتاج البول. حلق عنق الفأر وضعه في إعادة شغل مع الرأس نحو الجراح.

فرط تمديد رأس الماوس مع شريط. تطهير الرقبة مع 70٪ isopropanol. باستخدام ملاقط وزوج من مقص جعل شق الجلد خمسة ملليمتر تحت خط الفك.

قطع الجلد ما يقرب من سنتيمتر واحد في اتجاه القص حتى يتم الوصول إلى منتصف القص. استخدمي مقص تشريح بعناية الجلد إلى الجانب الأيمن من الرقبة.

جعل شق مستطيل من الجلد إلى اليمين لفضح الأنسجة الرخوة من الرقبة. يجب الحرص على عدم الإضرار الوريد الوداجي. استخدمي مقص ومقطّط لإصلاح رفرف الجلد بمشابكين.

باستخدام طرف من الملقط غرامة، وفضح بعناية الوريد الوداجي عن طريق إعداد صريح. إذا لزم الأمر، إزالة الأنسجة مع مقص غرامة. تجنب الإصابة في فروع الوريد.

ضع واغلق رباطًا بخيط حرير في الجزء الزاوي المرئي الذي هو في اتجاه رأس الفأر. إصلاح خيط الحرير مع شريط لوضع التوتر على الرباط. وهذا يضمن التوتر الطفيف على الوريد الوداجي.

إعداد رباط حول الجزء القريب من الوريد الوداجي. بعد ذلك ، قم بملء القسطرة بمحلول التوازن والانصهار. أصلح القسطرة بشريط بحيث تقوم القسطرة بمحاذاة الوريد الوداجي.

السيطرة على فقاعات لتجنب انسداد الهواء. ارفع الوريد الوداجي بملاقط ناعم في موقع الإدراج. محاذاة أنابيب موازية للورد الوداجي وثقب الوريد الوداجي تهدف إلى التجويف.

إدراج ما يقرب من 2-4 ملليمترات موازية لمحور الوريد الوداجي. تجنب أي حركات سريعة. أغلق الأربطة لإصلاح القسطرة.

السيطرة على ضيق من الرباط عن طريق عرض بعناية من خلال المجهر. وضع مسحة رطبة على موقع الجراحة. ضع الكفة التيل في الجزء السفلي من ذيل الماوس بينما يضع الماوس في إعادة شغل الظهر.

بدء القياسات وتكرارها عشر مرات في نقطة الوقت. إذا لم تكن قياسات ضغط الدم صحيحة ويتم إنتاج بيانات خاطئة، قم بضبط موضع الكفة التيل. قبل مرحلة التوازن، قم بتغيير أنبوب جمع البولية وضعه على الجليد.

أضعاف مسحة ووضعها حول قسطرة السفينة الصغيرة التي يتم إدخالها في الوريد الوداجي. وضع المشبك على مسحة لإلغاء تراجع تدفق الدم أو انسداد الهواء. قم بتوصيل إبرة 27 G مع حقنة ملليلتر واحدة مليئة ببولوس FITC إلى نهاية قسطرة السفينة الصغيرة.

فتح المشبك وتطبيق 100 ميكروليتر فيتC bolus. أغلق المشبك مرة أخرى، ثم قم بتوصيل القسطرة الأكبر بالقسطرة الأصغر. إعادة فتح المشبك وبدء ضخ حقنة مع معدل تدفق 0.008 ملليلتر في الدقيقة الواحدة.

استمر في التسريب لمدة 60 دقيقة. في هذه المرحلة ، يتم التحقيق في الأدوية الفعالة على الانتقائية بيرم الكبيّة. تغيير أنبوب البولية شكل نقطة الصفر دقيقة إلى آخر 1.5 ملليلتر أنبوب بني.

ضع مسحة حول قسطرة الأوعية الصغيرة وافصل القسطرة الكبيرة عن قسطرة الأوعية الصغيرة. ملء حقنة مع حل المرحلة التجريبية. وضعه في مضخة الحقنة والسماح لضخ ضخ تشغيل بحيث يتم تعبئة القسطرة الكبيرة مع حل المرحلة التجريبية.

أعد توصيل القسطرة مع تجنب انسداد الهواء وإعادة فتح المشبك. بدء ضخ حقنة بمعدل تدفق 0.008 ملليلتر في الدقيقة الواحدة. مواصلة تشغيل مضخة حقنة لمدة 60 دقيقة وجمع البول داخل أنبوب البولية بعد ذلك.

ضع أنبوب البول على الثلج. في هذه الدراسة، يظهر مسح الفلوريس لبول الماوس الأصلي ذروة عند 395 نانومتر. FITC polysucrose 70 بتركيز 40 ميكروغرام لكل ملليلتر في البول الماوس يعرض الفلورا كحد أقصى في 525 نانومتر.

البول الماوس لا يزعج قياس الفلورانس من فيتC polysucrose 70. عند قبول 525 نانومتر زيادة تركيزات من فيتC polysucrose 70 يظهر زيادة كثافة الفلورس. هذه الطريقة هي أيضا قادرة على الكشف عن الاختلافات في نفاذية الكبيّرة.

الأعمدة البيضاء تمثل فيت سي polysucrose 70 المستويات قبل بدء التحفيز الثاني أنجيوتنسين في المرحلة التجريبية. بعد جرعات لمدة 60 دقيقة, زادت نفاذية الكبيات مقارنة مع مجموعة التحكم. أنجيوتنسين الثاني غسل انخفض نفاذية الكبيّة.

انخفض مستويات فيتC البولي السكروز 70 بعد 60 دقيقة إضافية من التحفيز أنجيوتنسين الثاني أو 60 دقيقة من تبييض أنجيوتنسين الثاني. ويمكن أن يتم حظر الزيادة في نفاذية الكبيّة بسبب أنجيوتنسين الثاني من قبل مانع مستقبلات أنجيوتنسين الثاني. لم يظهر ضغط الدم الذي رصدته طريقة الكفة الذيل اختلافات كبيرة بين مجموعة التحكم و angiotensin II المعالجة.

أثناء محاولة هذا الإجراء من المهم تجنب انسداد الهواء عند تغيير حلول التسريب.