دراسات الكائنات الحية المجهرية في الفئران حديثي الولادة باستخدام تزقيمية

دراسات بروبيوتيك, في الفئران حديثي الولادة باستخدام gavage. مقدمة, هذا البروتوكول الفيديو سوف تفاصيل الإعداد والإجراءات للبروبيوتيك gavaging إلى ماوس حديثي الولادة, في يوم من الحياة اثنين. كما يتم تفصيل مجموعة الأمعاء المعقمة ، لتحليل الميكروبيوم المعوي ، في هذا البروتوكول.

وترد بعض النتائج التمثيلية في هذا البروتوكول أيضاً، لإدخال بعض أنواع البيانات التي يمكن استخلاصها من اتباع هذا الإجراء. داخل المريء gavage من الفأر الوليدي، يوم من الحياة اثنين. وضع قفص السد في نفس غطاء محرك السيارة حيث يتم وضع، والأقفاص التجريبية على وسادة التدفئة، يتم تعيين وسادة التدفئة إلى مستوى متوسط، وهو ما يقرب من 38 درجة مئوية.

إزالة بعض تعشيش التربة من القفص المنزلي، فرك التعشيش مع أيدي قفاز لنقل الروائح، من المواد التعشيش على القفاز. هذا يقلل من نقل الروائح الأجنبية ، على الجرو عند التعامل معها. وهذا بدوره يقلل من خطر، من التخلي أو أكل لحوم البشر، من قبل السد بسبب الروائح الأجنبية.

عندما يتم إرجاع الجراء إلى القفص المنزلي، بعد الإجراء. إنشاء عش عقد مخروطي الشكل، ووضعها في القفص التجريبي الجديد والمعقيم، الذي تم تسخينه مسبقا. نقل جميع الجراء من قفص المنزل، إلى القفص التجريبي.

نقل الجراء في التعشيش المخروطية، في القفص التجريبي. إزالة قفص السد ووضعها، بعيدا عن منطقة القفاف. وهذا يقلل من الظروف المجهدة للسد، من خلال منع السد من سماع الجرو، والقيام بهذا الإجراء.

افتح عبوة الحقنة لسهولة الوصول إليها. إزالة لصناعة السيارات قعقعة تغذية إبرة، بطريقة معقمة، وإرفاقه إلى رئيس الحقنة. يتم غسل الإبرة مع 70٪ الإيثانول، والماء، قبل autoclaving.

وتستخدم مجموعات مختلفة من إبر التغذية، بين مجموعات العلاج والسيطرة، لتجنب التلوث عبر. رسم محلول صبغ بروبيوتيك في الحقنة، عكس ونفض الغبار مع الإصبع لإزالة فقاعات، ومساحة فارغة في حجم داخل الحقنة. سحب مرة أخرى على المكبس لمسح السائل، من الإبر الفضاء الميت، ومن ثم الاكتئاب المكبس، لطرد فقاعات الهواء والهواء، وهذا أمر مهم لضمان، أن لا فقاعات الهواء هي gavaged، في الحيوان.

ضبط وحدة التخزين المطلوبة في حقنة، ليوم واحد من الحياة اثنين من الماوس، لا ينبغي أن يكون 30 ميكروليتر أكثر من gavaged. علامة سوداء أنّ أنت رأيت على الإبرة, يشير الطول قصوى, أنّ الإبرة يستطيع كنت أدخلت داخل الفأرة. يتم الحصول على هذا الطول عن طريق قياس خارجيا، وطول بين الخطم وعملية xiphoid.

ضع الحقنة على سطح معقمة ، وأزل الجرو ليتم نقوشه من القفص التجريبي ، ولاحظ العلامات الصحية. وتشمل هذه العلامات الصحية، والتنفس المنتظم والتلوين الوردي للجلد. وضع الجرو على ورقة ملاحظ العقيمة، على وسادة التدفئة.

تليين السطح الخارجي لإبرة التغذية، وذلك باستخدام المذيبات المستخدمة في حل بروبيوتيك. هنا هو ماء ديكستروز، وهذا مرافق دخول سلس من الإبرة، في المريء من الحيوان. Scruff الجرو من الجلد على الرقبة، وذلك باستخدام الإبهام وإصبع السبابة.

فهم حقنة في يدك المهيمنة، في موقف يسمح لك لإدراج الإبرة، والاكتئاب المكبس دون ضبط أصابعك. أدخل لمبة إبرة التغذية بزاوية 45 درجة، حتى تصل إلى الجزء الخلفي من الفم. قم بمحور يدك مع الإبرة بعيدا عنك، في حين عقد لمبة من الإبرة في مكان، مرة واحدة الإبرة هو عادي مع الجذع، وسوف تبدأ في الانزلاق.

تأكد من عدم وجود ضغط إضافي على الحقنة ، لتحفيز الحركة. عملية البلع ستكون بطيئة، والصبر هو المفتاح. كما يحصل على الجرو كبار السن ابتلاع الإبرة، وسوف تصبح أسرع وأسهل.

وقد تم وضع علامة مسبقة لإبرة التغذية، لمنع لمبة من دخول المعدة. بمجرد وضع علامات الاقتراب من خطم, اعتقال حركة الإبرة, وتسليم ببطء الحل بروبيوتيك. بمجرد الانتهاء من التسليم، وإزالة الإبرة ببطء.

وضع الماوس على وسادة التدفئة ومراقبة للانتعاش. حل منعكس يلهث وارتفاع معدل ضربات القلب ، والتلوين الوردي صحية يظهر ، وعدم حل منعكس لهث بعد 45 ثانية ، يشير إلى فشل gavage والفأر يجب أن يكون القتل الرحيم. يجب أن تكون صبغة الحفلاج مرئية من خلال الجلد الشاحب ، وينبغي أن تكون الصبغة مرئية فقط في المنطقة ، حيث توجد عادة بقعة الحليب.

الحبس على الصبغة إلى المعدة, يشير إلى نجاح غافج. إذا تم العثور على الصبغة في تجويف الصدر ، أو أي تجويف آخر غير المعدة ، فيجب أن يكون الماوس قتلًا رحيمًا ، لأنه يشير إلى فشل الخفقان. هناك حاجة إلى الحد الأدنى من الضغط، لscruff يوم من الحياة اثنين من الماوس.

علامات التكسير إلى الصعب يمكن أن تشمل، وعدم القدرة على التنفس، لهث كبير، والتمسك اللسان لمدة طويلة. وهناك بعض الاقتراحات لإجراء ال gavaging، بقية الجزء الخلفي من إصبع اليدين scruffing الخاص بك، على راحة اليد عقد الحقنة، وهذا يضمن وضع الجراء مستقرة، أثناء الإجراء والإبرة، لا يتم نقلها داخل الحيوان. خلال gavage، فإن وزن الإبرة، وتسهيل انزلاق، والسماح للإبرة أن يبتلعها الجرو، دون ممارسة أي ضغط خارجي.

إعادة الجراء إلى قفص السد، ومتابعة مع رصد وفقا للجدول الزمني الخاص بك. جمع عينات الأمعاء لتحليل الاستعمار. تم القتل الرحيم الحيوان إنسانيا، من خلال الأساليب المعتمدة في بروتوكول رعاية الحيوان واستخدامها.

وتصطف الطاولة الجراحية مع حصيرة ماصة معقمة. وقد تم تعقيم الأدوات باستخدام 70 في المائة الإيثانول، والتعقيم فاز الساخنة في 250 درجة مئوية. يتم تطهير الخدمة الخارجية للحيوان، مع 70 نسبة الإيثانول.

قطع الجلد الخارجي باستخدام ملقط ومقص، إلى أربعة أرباع، مع أخذ المزيد من الحذر، لا تمزق الصفاق. ثني الجلد إلى الجانب بحيث، يتم كشف الصفاق بشكل جيد. استخدام مختلف، أدوات عقيمة جديدة، لخفض الصفاق مفتوحة، واتخاذ المزيد من الحذر لا لتمزق، والأعضاء الداخلية في هذه العملية.

حدد موقع المعدة من الجرو، ومشبك في الاثنيع. باستخدام اثنين من ملقط العقيمة، وتحديد موقع المعدة، وتحديد موقع الطرف الاثني للمعدة. المشبك الحق في تقاطع، من المعدة والاثني.

استخدام اثنين من ملقط العقيمة الجديدة لتشغيل الأمعاء، واستخدام قوة واحدة لعقد على الاثنيع، في حين استخدام الآخر لمزق بعيدا أي الأنسجة الضامة، وعقد الأمعاء سليمة. كما كنت كشف، ووضع الأمعاء، على وسادة ماصة معقمة تغطي الحيوان. إذا كنت يحدث لمزق الأمعاء، أثناء عملية كشف، علامة أسفل المنطقة التي مزقت، بحيث اتجاه الأمعاء سليمة.

المشبك في نهاية المستقيم، وجعل التخفيضات في كل من المشابك. وضع الأمعاء سليمة، على رقائق الألومنيوم ملحوظ معقمة في الاتجاه الصحيح. وضع علامة على أي أجزاء من الأمعاء، ضرورية لتحليلك اللاحق.

يتم استخراج الحمض النووي من هذه الأمعاء، وذلك باستخدام إجراء الاستخراج الأمثل، ويتم تحليل QPCR لتحديد كمي بروبيوتيك. يتم استخراج الحمض النووي من الأمعاء الطازجة، أو يمكن تخزين الأمعاء، في درجة حرارة سالبة 80 درجة مئوية باستخدام مربع الفريزر. نتائج تمثيلية، lactobacillus plantarium، والاستيطان مع gavage كل يوم وكل يومين.

لوحظ إشارة ليرة لبنانية أعلى في الأمعاء من الفئران، gavaged كل يومين، بالمقارنة مع الفئران gavaged كل يوم. وهكذا، تم بناء التجارب اللاحقة، وذلك باستخدام gavages كل يومين. الفئران plantarum plantarum، في الإقامة المشتركة مع الفئران ungavaged.

لوحظت إشارات متغيرة من LP في الفئران غير المعالجة ، التي كانت في مكان مشترك مع الفئران LP gavaged. انتشار الاستعمار من ليرة لبنانية، هو ممكن مع زملاء القمامة، وبالتالي تم فصل ظروف العلاج، من قبل أقفاص لتجاربنا اللاحقة. الخلاصة، يمكن استخدام هذا الإجراء لتقديم كميات دقيقة من أي سائل للفئران حديثي الولادة.

يمكن استقراء أخذ عينات من الأمعاء ، لاستكشاف التغيرات في الميكروبيوم ، من خلال طرق أخرى للتحليل. نطاق هذا الفيديو هو توفير منصة، للباحثين لاستخدام نماذج الماوس حديثي الولادة، لفهم الآليات وراء الآثار التي لوحظت، مع الإدارة المبكرة للبروبيوتيك. شكر خاص لفريق مختبر كولمان، خدمات رعاية الحيوان في جامعة كولومبيا البريطانية، لجعل هذه الدراسة ممكنة.