التصور الفلورسنت من الحمض النووي الريبي المانجو الموسومة في المواد الهلامية البولي أكريلاميد عن طريق طريقة بوستينينغ

منهجية التصوير هلام الموسومة المانجو أظهرت هنا قوية ومن المتوقع أن تكون قادرة على أن تكون مجرد توسيع من حيث الحساسية وخصوصية. وهذا من شأنه أن يزيد من تبسيط تنقية روتينية من RNAAs الهامة بيولوجيا ومجمعات الحمض النووي الريبي من قبل وسيلة بسيطة لإضافة المانجو العلامة إلى الجيش الملكي النيبالي من الفائدة. ويجري تورط RNAs في المزيد والمزيد من الأمراض لذلك لهذا الأسلوب آخر يرجع تاريخها هو وسيلة سهلة وسريعة لتكون قادرة على تتبع وتصور الجيش الملكي النيبالي.

وسوف تكون هناك حاجة إلى مزيد من الرعاية في نقل الجل من مكان إلى آخر كما المواد الهلامية هشة وعرضة للكسر. لإعداد هلام denaturing 30 ملليلتر، حدد أولا النسبة المئوية polyacrylamide مع الأزرق بروموفينول المناسبة، وصبغات السيانول الزيلين مقارنة مع الجيش الملكي النيبالي من الفائدة لضمان فصل الفرقة عالية. ثم، مزيج الحلول A، B، وجيم وفقا للجدول واحد وإضافة وكالة الأنباء الجزائرية و تيمود.

صب على الفور حل هلام في جهاز الصب هلام المناسبة. إدراج المخروط المطلوب وترك هلام للبوليمرة لمدة 30 دقيقة تقريبا. تشكل خزان هلام باستخدام 1 XTBE حل وإزالة بعناية المخروط.

رفع بعناية حتى هلام وجبل على الجهاز هلام وآمنة باستخدام مقاطع الموثق. باستخدام حقنة، يتبخر من الآبار مباشرة قبل تحميل العينة. إعداد عينات 1X RNA عن طريق إضافة 2X denaturing هلام الحل لتحميل عينات الحمض النووي الريبي من الفائدة.

استخدم دراجة حرارة لتسخين العينات عند درجة حرارة 95 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. ثم، تحميل عينات تبريد إلى الجزء السفلي من كل بئر باستخدام نصائح هلام التحميل. وأيضا هلام في درجة حرارة الغرفة ضمان السلطة منخفضة بشكل فعال لعدم كسر لوحة زجاجية من الجهاز هلام.

إعداد 1X هلام تلطيخ حل وفقا للمخطوطة في وعاء زجاجي نظيف واسع بما يكفي لتناسب بشكل مريح هلام. إضافة ما يكفي من 1X هلام تلطيخ حل للحاوية بحيث يتم تغطية هلام تماما مع الحل عندما يتم وضعه على دوار المداري. بمجرد انتهاء الجل من التشغيل ، قم بإزالة الجل من الجهاز ، وقطع آباره ، وركن من الجل من أجل المساعدة في تحديد الاتجاه.

ثم، نقل بعناية هلام في حل تلطيخ هلام 1X. لأداء التصوير، قم بفك محلول التلطخ بعناية وشطف الجل بسرعة بالماء. وأخيراً، قم بنقل الجل بعناية إلى الدرج ليتم وضعه في جهاز التصوير.

لفة ماصة زجاجية على هلام لإزالة فقاعات المحاصرين والسائل الزائد. والمضي قدما في اتخاذ صورة هلام. المانجو aptamers واحد، اثنين، ثلاثة، أربعة كانت مقاومة كبيرة لdenaturation تصل إلى ما يقرب من تركيز اليوريا الضرس واحد.

20 إلى 40 دقيقة تلطيخ الوقت كان كافيا لفلوريس هلام الحد الأقصى. لم يكن الوقت الأطول مناسبًا للرنا الرنا الصغيرة المستخدمة في هذه الدراسة حيث بدأوا في الانتشار من الجل. أظهر تحليل قياس الفلور أن المانجو aptamers واحد واثنين وثلاثة في وجود اليوريا يمكن أن أضعاف بسرعة أكبر من aptamer أربعة.

في غياب اليوريا، كان الطي أسرع بكثير كما كان متوقعا. وقد أظهرت حساسية طريقة آخر تلطيخ من قبل عصابات واحدة المقابلة لRNAs مطوية جيدا لكل من المتغيرات المانجو في المواد الهلامية الأصلية و denaturing مع حساسية أقل قليلا عن واحد في وقت لاحق. وكان القياس الكمي للجل الأصلي سجل خطي على مدى أمر واحد من حجم مع المانجو واحد، واثنين، وأربعة يتصرفون بطريقة أكثر خطية من المانجو ثلاثة.

وكان القياس الكمي للجل دسينات أكثر خطية مما يشير إلى أن وجود اليوريا في هلام denaturing قد توفر طريقة أكثر تجانسا لطي aptamers بمجرد وضعها في حل تلطيخ البيوتين TO1. يمكن الكشف عن المانجو الموسومة RNAs في وجود الحمض النووي الريبي الكلي باستخدام تو1 البيوتين تلطيخ مقارنة مع تلطيخ SG. تذكر للتأكد من أن الهلام تلطيخ حاوية كبيرة بما يكفي لتناسب هلام وإلا قد هلام أضعاف على نفسها.

عينات الحمض النووي الريبي ستنقل من مكان إلى آخر. على غرار المواد الهلامية denaturing، يمكن تنفيذ هذه الطريقة لجل الأصلي. تشغيل الجل في غرفة باردة في قوة واط أقل للحفاظ على الظروف الأصلية.