نقاط النهاية الهامة وعلامات التكاثر لتقييم إصابات الأمعاء الصغيرة والتكيف باستخدام نموذج الماوس من الغشاء المخاطي الناجم عن العلاج الكيميائي

يمكن استخدام هذا النموذج من التهاب الغشاء المخاطي الناجم عن العلاج الكيميائي لتحديد نقاط النهاية الهامة والعلامات المنتشرة للإصابة المعوية الصغيرة وانتشار فرط النشاط التعويضي في الفئران. هذا الأسلوب هو الوقت والتكلفة وفعالة وسهلة لتنفيذ. مع طريقة موحدة مثل هذا، فمن الأسهل لمقارنة نقاط النهاية التحليلية مع بعض الاختلافات.

ل5-Florauracil أو 5FU mucositis التعريفي، تحميل حقنة 1 ملليلتر مجهزة قياس 27 من قبل 19 ملليمتر إبرة مع حجم مناسب من 5FU وكبح جماح يدويا الماوس المتلقي. مع الحفاظ على الماوس في قبضة ثابتة ولكن لطيف، وفضح الجانب البطني من الحيوان وإدراج الإبرة في تجويف داخل الصفاق داخل واحد من الربع السفلي من البطن. ثم، الطامح لضمان وضع إبرة السليم وحقن 5FU.

عند نقطة النهاية التجريبية المناسبة، 4-برومو-ديوكسيوريدين أو الكم BrdU، تزن فأر مصاب 5FU و توصل 5 ملليغرام لكل كيلوغرام من BrdU عن طريق الحقن داخل الصفتون في غطاء الدخان. بعد 150 دقيقة من الـ BrdU injetion، تأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القار، وسجل وزن الفأر المُقصّر، ووضع الحيوان في موضع الزى. إجراء عملية استئصال البطن لفضح تجويف البطن وإجراء شق في تجويف الصدر لإدخال بفوتوراس الصدر.

قطع متفوقة على البوادب، واستخراج بعناية سحب الأنسجة المعوية بعيدا عن الحيوان حتى يتم التوصل إلى cecum. باستخدام ملقط، المشبك بلطف التجويف القريب اغلاق واستخدام حقنة 10 ملليلتر مجهزة إبرة قياس 25 لطرد الأمعاء الدقيقة مع المالحة. ثم ضع الأمعاء الفارغة على ورق نظيف من النشاف لإزالة محلول الملح الزائد بعناية.

لجمع الأنسجة، حصاد الأمعاء الدقيقة من الحيوان المحقون كما أظهرت للتو وتسجيل وزن الأنسجة مسح. بعد المعالجة النسيجية، يمكن تصوير الأنسجة تحت الهدف 10x من مجهر خفيف متصل بكاميرا للحصول على صور الأنسجة النسيجية للأنسجة المقطوعة. لقياس مساحة الخلايا النشطة المناعية BrdU، افتح صورة الاهتمام في الصورة J، وفتح صورة المرحلة ميكرومتر.

استخدم أداة تحديد الخط المستقيم لرسم خط مستقيم على صورة ميكرومتر لتحديد مسافة معروفة وتحديد مقياس مجموعة في القائمة تحليل. أدخل قيمة في مربع المسافة المعروفة، وحدد وحدة الطول في مربع وحدة الطول. افتح صورة ذات أهمية لقياس مساحة الخلايا النشطة المناعية BrdU لكل سرداب، ثم قم بتعيين الرسومات الملونة إلى 8 بتات أسفل قائمة نوع الصورة.

زيادة التباين من الصورة تحت عملية معززة التباين، وتعيين بكسل المشبعة إلى 0.4٪ تطبيق عتبة على الصورة لتقسيم الإيجابية المناعية وتحديد ضبط الصورة. حدد العتبة والأحمر، وتحريك شريط العتبة لتحديد عتبة من حوالي 10 إلى 20 في المئة. ثم حدد سرداب جيد المنحى ، واستخدم أداة التحديد اليدوي لوضع علامة على المنطقة المحيطة به.

لقياس مساحة العتبة، افتح علامة التبويب تحليل وحدد تحليل الجسيمات. في إطار تحليل الجسيمات، قم بتعيين الحجم إلى 20 إلى ما لا نهاية، وانقر فوق وحدات بكسل المربع. تعيين الدائري إلى صفر إلى واحد، وتعيين إظهار إلى حدود.

ثم انقر فوق نتائج العرض، وتلخيص، وتشمل مربعات الثقوب. سيتم عرض نتائج القياس في نافذة الملخص. لقياس عمق السرداب، افتح صورة في ضوء Zen واربط الكاميرا.

أخذ لقطات في وضع الكاميرا مع هدف 20x، والتحول إلى وضع المعالجة لفتح اللقطة. التبديل إلى طريقة عرض القياس. استخدام أداة خط لبدء خط في الجزء السفلي من سرداب موجه بشكل جيد، والانتهاء من الخط في الجزء العلوي من سرداب.

ثم تصدير القياسات وحساب متوسط عمق سرداب وملء كما ارتفاع. ينخفض وزن الأمعاء الدقيقة من اليوم 2 حتى اليوم الرابع ، مما يشير إلى فقدان كتلة enterocyte. ملاحظة، في اليوم 5، الوزن لا يختلف كثيرا عن وزن اليوم 0 على الحيوانات المعالجة.

ويكاد يتم إلغاء الانتشار المقاس عن طريق تأسيس BrdU في اليومين 1 و 2، ولكن في اليومين 4 و 5، هناك زيادات في انتشارهما تبلغ أربعة وخمسة أضعاف تقريباً، على التوالي. كما لوحظ هذا الانتشار المفرط عند قياس عمق السرداب. في مرحلة تجديد التهاب الغشاء المخاطي ، هناك ارتباط قوي بين دمج BrdU وعمق crypt الذي لم يتم ملاحظته خلال المرحلة الحادة ، مما يشير إلى أن استخدام عمق السرداب كنقطة نهاية قد يكون مناسبًا في المرحلة الحادة من التهاب الغشاء المخاطي.

الفئران المعدلة وراثيا، مع إفراز L-الخلية غير كافية، تثبت فقدان كبير لوزن الجسم وانخفاض في وزن الأمعاء الدقيقة في مرحلة الانتعاش، مقارنة بتلك التي لوحظت في الفئران من النوع البري 5-FU. وعلاوة على ذلك، تفشل الفئران المعدلة وراثيا في إظهار فرط الانتشار التعويضي لأن السردابات أقصر بكثير مما هي عليه في كل من الفئران من النوع البري والضوابط الصحية. أثناء محاولة هذا الإجراء ، تأكد من إفراغ الأمعاء الدقيقة تمامًا ، وإزالة الملح الزائد قبل وزن الأنسجة للحصول على وزن صغير معوي فقط.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء وجمع وتحديد نقاط النهاية الهامة للإصابة المعوية الصغيرة. والحصول على البيانات القابلة للاستنساخ بشكل فعال. لا تنس أن العمل مع المركبات الكيميائية مثل 5FU و BrdU يمكن أن تكون خطرة وأن الاحتياطات، مثل استخدام معطف المختبر، والقفازات، وغطاء الدخان ينبغي دائما اتخاذها عند تنفيذ هذه الإجراءات.