Name: نموذج المصفوفة خارج الخلية العظام ثلاثية الأبعاد ل Osteosarcoma (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: اكتشف نموذج المصفوفة خارج الخلية العظام ثلاثية الأبعاد لدراسة سرطان العظام. يحاكي هذا النموذج نمو الورم الأولي ويساعد الباحثين على فهم تطور الورم واختبار حساسية الأدوية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

الكتاب قيمة دعم تشن ليويينج للمساعدة الإدارية و "طويلة جاو" لها لمساعدته التقنية ممتازة أثناء تشييد السقالات المصفوفة خارج الخلية العظام. يتم اعتماد هذه الدراسة من المنح المقدمة من "مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية" (31871413).

رعاية الحيوان واستخدام تجري وفقا "المعاهد الوطنية للصحة دليل" لرعاية واستخدام للحيوانات المختبرية (المعاهد الوطنية للصحة المنشور NO.80-23، المنقح في عام 1996) بعد الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات الحيوان في صن يأت-صن "جامعة".
1-إعداد العظام
<ol><li>الحصول على 4 إلى 6 عاماً الأسبوع بالب/ج الفئران (دون اشتراط الجنس). Euthanize ماوس أسيبتيكالي بخلع عنق الرحم وقطعت الشظية الطازجة والساق وعظم الفخذ من اللكتات مع مقص الجراحية المعقمة. تقشر الأنسجة الظهارية، ثم قم بإزالة جزء كبير من الأنسجة اللينة ممكن استخدام مقص وملاقط.</li>
	<li>شطف في عظام الساق مع 10 ملم معقمة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مرتين لإزالة الدم في طبق 6 سم. تزج العظام في الإيثانول 75% لمدة 3 دقائق، ثم شطف مع برنامج تلفزيوني مرتين. يمكن تخزين عظام نظيفة في أنبوب الطرد مركزي عقيمة 50 مل مع PBS العقيمة في-80 درجة مئوية لمدة أشهر حتى المطلوبة. ملاحظة: برنامج تلفزيوني المستخدمة في كافة الخطوات التالية على 10 مم ص43−.</li>
</ol>2-العظام القعود وديسيلولاريزيشن
<ol><li>ذوبان العظام المجمدة في درجة حرارة الغرفة، ومن ثم تجميد مرة أخرى في-80 درجة مئوية حاء 1 رهنا بالعظام أكثر من 2 – 3 دورات تجميد أذاب لانهيار الأنسجة وتحلل الخلية.</li>
	<li>احتضان العظام في أنبوب الطرد مركزي عقيمة 50 مل مع 0.5 N HCl بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة على شاكر منصة أو المداري هزاز مع لطيف هزاز/تهتز لضمان تغطية كاملة وحتى العظام. ملاحظة: تأكد من العظام مغمورة تماما أثناء الحركة في الحامض وليس تسوية أثناء العملية. ينبغي أن يكون حجم HCl الحل أكثر من عشر مرات للعظام.</li>
	<li>وبعد ديكالسيفيكيشن، صب حل HCl تماما وشطف تحت الماء ح 1. ثم غسل العظام مرتين لمدة 15 دقيقة كل الغسيل بماء مقطر على شاكر منصة أو المداري هزاز. ملاحظة: تأكد من إزالة الحل أو المياه بين يغسل وبعد الغسيل النهائي مع الماء المقطر.</li>
	<li>استخراج الدهون في العظام ديمينيراليزيد مع خليط 1:1 من الميثانول وكلوروفورم في أنبوب الطرد مركزي 50 مل ملفوفة برقائق القصدير ح 1 في درجة حرارة الغرفة10.</li>
	<li>ثم، المقطر نقل العظام إلى أنبوب آخر من الميثانول ملفوفة برقائق القصدير للحد الأدنى 30 إزالة الميثانول شكل كامل وشطف بالماء مرتين لمدة 15 دقيقة مع الهز برفق. صب الماء يغسل النهائي والمضي قدما في الخطوات التالية تحت ظروف معقمة. ملاحظة: أثناء الخطوة الاستخراج، ويجب تجنب الضوء لمنع التحلل كلوروفورم. يمكن تخزين المخلوط في حاويات مقاومة للضوء أو أنبوب الطرد مركزي ملفوفة برقائق القصدير. القيام بجميع أنواع العلاج وتغسل الخطوات تحت التناوب متواضعة أو هزاز الحركة.</li>
	<li>شطف العظام في طبق 6 سم مع PBS العقيمة لمدة 3 دقائق ومن ثم نقل العظام في أنبوب 50 مل أجهزة الطرد مركزي جديدة. إضافة 40 مل العقيمة 0.05% التربسين-يدتا (TE) في الأنبوب واحتضان عظام ح 23 في حاضنة2 CO في18من 37 درجة مئوية.</li>
	<li>تجاهل حل الشركة المصرية للاتصالات وشطف مرتين مع PBS العقيمة وتستكمل مع 90 ميكروغرام/مل الأمبيسلّين و 90 ميكروغرام/مل كاناميسين. بعد الصب النهائي يغسل برنامج تلفزيوني تماما، وتجديد مع 40 مل PBS العقيمة. غسل جيدا لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع هزاز لطيف أو تهتز لامتصاص المضادات الحيوية. ملاحظة: كل برنامج تلفزيوني المعقمة المستخدمة في هذا المجال والخطوات التالية تحتوي على 90 ميكروغرام/مل الأمبيسلّين و 90 ميكروغرام/مل كاناميسين. يتم تنفيذها بين عشية وضحاها الغسيل تحت التناوب أو هزاز الحركة لفترات طويلة الغمر شامل مع المضادات الحيوية لتحقيق التعقيم الفعالة من مسام ممنوع.</li>
	<li>إزالة برنامج تلفزيوني ونقل العظام في أنبوب الطرد مركزي 50 مل جديدة مليئة PBS العقيمة. ديمينيراليزيد الذي أعد وعظام ديسيلولاريزيد تسمى العظام المصفوفة خارج الخلية (BEM)، ويمكن تخزينها في 4 درجات مئوية لمدة شهرين حتى المطلوبة.</li>
</ol>3-الخلية البذر والثقافة
<ol><li>تأخذ بها BEM من الثلاجة 4 درجات مئوية وأنها تزج في الإيثانول 75% ل 30 ثانية، ثم شطف مع برنامج تلفزيوني مرتين. نقل BEM على طبق من ذهب في ثقافة خلية نظيفة 6-جيدا. إضافة 2 مل المتوسطة ثقافة كاملة (دولبيكو لتعديل المتوسطة/F12 النسر (DF12) التي تحتوي على 5% مصل بقرى الجنين، 90 ميكروغرام/مل الأمبيسلّين و 90 ميكروغرام/مل كاناميسين). احتضان BEM بين عشية وضحاها في حاضنة2 CO في 37 درجة مئوية.</li>
	<li>الحصول على البشرية خطوط الخلايا في نظام التشغيل (مننج/هوس وملغ-63). تعليق ما يقرب من 1.0 × 105 OS الخلايا مع برنامج تلفزيوني 100 ميكروليتر المحتوية على الفينول الأحمر كمؤشر. ملاحظة: لتحسين تعقب ومراقبة الخلايا المتعددة الطبقات ضمن نموذج BEM ثلاثي الأبعاد، مننج/هوس وملغ-63 مصابون بناقل لينتيفيرال الإعراب عن مشري الفلورسنت والبروتينات الفلورية الخضراء (التجارة والنقل).</li>
	<li>بعد هو تماما غارقة في BEM في الأجل المتوسط، حقن الخلايا OS في BEM من epiphysis القريبة أو البعيدة عندما تصل الإبرة إلى تجويف النخاع BEM. تبني نموذج نظام التشغيل--BEM للحد ني ح 2 في هوميديفيد 5% CO2 الغلاف الجوي في 37 درجة مئوية لضمان حقن الخلايا بشدة الانضمام إلى BEM. ملاحظة: الحارة قبل جميع وسائل الإعلام المستخدمة لزراعة الخلايا. حاضنة المستخدمة لزراعة الخلايا وقد هوميديفيد 5% CO2 الغلاف الجوي عند 37 درجة مئوية.</li>
	<li>أضف 1 مل كامل الثقافة المتوسطة إلى لوحة لمعطف تماما على سطح الثقافة BEM بين عشية وضحاها في حاضنة2 CO في 37 درجة مئوية.</li>
	<li>بلطف نقل نظام التشغيل--BEM النموذجية في بئر جديدة للوحة 6-جيدا مع ملقط معقم والمتوسطة ثقافة جديدة ريفيد 1 مل. الثقافة النموذجي لمدة 14 يوما في حاضنة2 CO في 37 درجة مئوية وتحديث المتوسط الثقافة وفقا لحالة انتشار الخلايا نظام التشغيل.</li>
	<li>الحفاظ على مراقبة حالة اللون وخلية متوسطة تحت المجهر المقلوب fluorescence أثناء عملية الثقافة. عند توسيع خلايا نظام التشغيل للوحة، بلطف نقل النموذجي BEM نظام التشغيل إلى آخر جديد تماما مع ملقط معقم. ملاحظة: المتوسط الثقافة أحمر في درجة الحموضة 7.4، الذي هو قيمة pH المثلى لمعظم الثدييات خلية ثقافة. إذا كان المتوسط يتحول إلى أصفر برتقالي أو حتى، فورا تحديث وسيلة للحفاظ على بيئة صحية لخلايا نظام التشغيل.</li>
	<li>نقل طراز OS-BEM في بئر جديدة بملاقط وشطف بلطف مع برنامج تلفزيوني لإزالة المتوسطة الثقافة. ثم نقل إلى أنبوب الطرد مركزي 15 مل وإصلاحها مع الفورمالين 10% مخزنة لتحديد النسيجي.</li>
</ol>

<ol><li>Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bone+osteosarcoma+in+the+pediatric+age%3A+State+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+Reviews%22%5BJournal%5D)">Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art.</a> Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).</li>
<li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma+originates+from+mesenchymal+stem+cells+in+consequence+of+aneuploidization+and+genomic+loss+of+Cdkn2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2.</a> Journal of Pathology. 219, 294-305 (2009).</li>
<li>Mutsaers, A. J., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+of+origin+in+osteosarcoma%3A+mesenchymal+stem+cells+or+osteoblast+committed+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Cells of origin in osteosarcoma: mesenchymal stem cells or osteoblast committed cells.</a> Bone. 62, 56-63 (2014).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+tumors+can+derive+from+Ng2%2FCspg4-Expressing+pericytes+with+%CE%B2-Catenin+modulating+the+neoplastic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal tumors can derive from Ng2/Cspg4-Expressing pericytes with β-Catenin modulating the neoplastic phenotype.</a> Cell Reports. 16, 917-927 (2016).</li>
<li>Patane, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MET+overexpression+turns+human+primary+osteoblasts+into+osteosarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">MET overexpression turns human primary osteoblasts into osteosarcomas.</a> Cancer Research. 66, 4750-4757 (2006).</li>
<li>Poos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+heterogeneity+of+osteosarcoma+-+shift+from+single+candidates+to+functional+modules%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic heterogeneity of osteosarcoma - shift from single candidates to functional modules.</a> PLoS One. 10, 123082(2015).</li>
<li>Martin, J. W., Squire, J. A., Zielenska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Sarcoma%22%5BJournal%5D)">The genetics of osteosarcoma.</a> Sarcoma. 2012, 1-11 (2012).</li>
<li>Alfranca, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+microenvironment+signals+in+osteosarcoma+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Bone microenvironment signals in osteosarcoma development.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 72, 3097-3113 (2015).</li>
<li>Alford, A. I., Kozloff, K. M., Hankenson, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+networks+in+bone+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix networks in bone remodeling.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 65, 20-31 (2015).</li>
<li>Sawkins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogels+derived+from+demineralized+and+decellularized+bone+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Hydrogels derived from demineralized and decellularized bone extracellular matrix.</a> Acta Biomaterialia. 9, 7865-7873 (2013).</li>
<li>Alom, N., Peto, H., Kirkham, G. R., Shakesheff, K. M., Bone White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+extracellular+matrix+hydrogel+enhances+osteogenic+differentiation+of+C2C12+myoblasts+and+mouse+primary+calvarial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+B-Applied+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Bone extracellular matrix hydrogel enhances osteogenic differentiation of C2C12 myoblasts and mouse primary calvarial cells.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B-Applied Biomaterials. 106, 900-908 (2018).</li>
<li>Datta, N., Holtorf, H. L., Sikavitsas, V. I., Jansen, J. A., Mikos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+bone+extracellular+matrix+synthesized+in+vitro+on+the+osteoblastic+differentiation+of+marrow+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Effect of bone extracellular matrix synthesized in vitro on the osteoblastic differentiation of marrow stromal cells.</a> Biomaterials. 26, 971-977 (2005).</li>
<li>Rubio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+environment+is+essential+for+osteosarcoma+development+from+transformed+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Bone environment is essential for osteosarcoma development from transformed mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 32, 1136-1148 (2014).</li>
<li>Sadr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+the+biological+performance+of+synthetic+polymeric+materials+by+decoration+with+engineered%2C+decellularized+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Enhancing the biological performance of synthetic polymeric materials by decoration with engineered, decellularized extracellular matrix.</a> Biomaterials. 33, 5085-5093 (2012).</li>
<li>Gautschi, O. P., Frey, S. P., Zellweger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+morphogenetic+proteins+in+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Anz+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Bone morphogenetic proteins in clinical applications.</a> Anz Journal of Surgery. 77, 626-631 (2007).</li>
<li>Rochet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+gene+expression+induced+in+human+osteogenic+and+osteosarcoma+cells+by+culture+on+a+biphasic+calcium+phosphate+bone+substitute%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Modification of gene expression induced in human osteogenic and osteosarcoma cells by culture on a biphasic calcium phosphate bone substitute.</a> Bone. 32, 602-610 (2003).</li>
<li>Spang, M. T., Christman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+hydrogel+therapies%3A+in+vivo+applications+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix hydrogel therapies: in vivo applications and development.</a> Acta Biomaterialia. 68, 1-14 (2018).</li>
<li>Schenke-Layland, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+decellularization+of+xenogeneic+tissue+on+extracellular+matrix+integrity+for+tissue+engineering+of+heart+valves%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Structural+Biology%22%5BJournal%5D)">Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves.</a> Journal of Structural Biology. 143, 201-208 (2003).</li>
<li>Klein, M. J., Siegal, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+anatomic+and+histologic+variants%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: anatomic and histologic variants.</a> American Journal of Clinical Pathology. 125, 555-581 (2006).</li>
<li>Lipinski, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+evolution+and+the+limits+of+predictability+in+precision+cancer+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer evolution and the limits of predictability in precision cancer medicine.</a> Trends in Cancer. 2, 49-63 (2016).</li>
<li>McGranahan, N., Swanton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+heterogeneity+and+tumor+evolution%3A+past%2C+present%2C+and+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future.</a> Cell. 168, 613-628 (2017).</li>
<li>Brown, H. K., Schiavone, K., Gouin, F., Heymann, M., Heymann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+bone+sarcomas+and+new+therapeutic+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Biology of bone sarcomas and new therapeutic developments.</a> Calcified Tissue International. 102, 174-195 (2018).</li>
<li>Abarrategi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+cells-of-origin%2C+cancer+stem+cells%2C+and+targeted+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: cells-of-origin, cancer stem cells, and targeted therapies.</a> Stem Cells International. 2016, 1-13 (2016).</li>
<li>Tsukamoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+promote+tumor+engraftment+and+metastatic+colonization+in+rat+osteosarcoma+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells promote tumor engraftment and metastatic colonization in rat osteosarcoma model.</a> International Journal of Oncology. 40, 163-169 (2012).</li>
<li>Rodriguez, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aerosol+gemcitabine%3A+preclinical+safety+and+in+vivo+antitumor+activity+in+osteosarcoma-bearing+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Aerosol+Medicine+and+Pulmonary+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Aerosol gemcitabine: preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs.</a> Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 23, 197-206 (2010).</li>
<li>Rodriguez, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+canine+osteosarcoma+as+a+model+to+assess+efficacy+of+novel+therapies%3A+Can+old+dogs+teach+us+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Using canine osteosarcoma as a model to assess efficacy of novel therapies: Can old dogs teach us new tricks.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 237-256 (2014).</li>
<li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+osteosarcoma+zebrafish+model+implicates+Mmp-19+and+Ets-1+as+well+as+reduced+host+immune+response+in+angiogenesis+and+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">An osteosarcoma zebrafish model implicates Mmp-19 and Ets-1 as well as reduced host immune response in angiogenesis and migration.</a> Journal of Pathology. 227, 245-253 (2012).</li>
<li>Saalfrank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porcine+model+of+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogenesis%22%5BJournal%5D)">A porcine model of osteosarcoma.</a> Oncogenesis. 5, 210(2016).</li>
<li>Zhang, Y., Pan, Y., Xie, C., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiR-34a+exerts+as+a+key+regulator+in+the+dedifferentiation+of+osteosarcoma+via+PAI-1%E2%80%93Sox2+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">MiR-34a exerts as a key regulator in the dedifferentiation of osteosarcoma via PAI-1–Sox2 axis.</a> Cell Death & Disease. 9, (2018).</li>
<li>Hashimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+decellularized+bone%2Fbone+marrow+produced+by+high-hydrostatic+pressurization+on+the+osteogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of decellularized bone/bone marrow produced by high-hydrostatic pressurization on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 32, 7060-7067 (2011).</li>
<li>Benders, K. E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in Biotechnology. 31, 169-176 (2013).</li>
<li>Grayson, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+initial+seeding+density+and+fluid+perfusion+rate+on+formation+of+tissue-engineered+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Effects of initial seeding density and fluid perfusion rate on formation of tissue-engineered bone.</a> Tissue Engineering Part A. 14, 1809-1820 (2008).</li>
<li>Mikulic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+angiogenesis+and+outcome+in+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumor angiogenesis and outcome in osteosarcoma.</a> Pediatric Hematology and Oncology. 21, 611-619 (2004).</li>
<li>Ren, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry%3A+a+new+prognostic+sign+of+human+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma.</a> Human Pathology. 45, 2120-2129 (2014).</li>
<li>Bonuccelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mesenchymal+stem+cells+in+osteosarcoma+and+metabolic+reprogramming+of+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Role of mesenchymal stem cells in osteosarcoma and metabolic reprogramming of tumor cells.</a> Oncotarget. 5, 7575-7588 (2014).</li>
</ol>

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

عموما، يمكن تصنيف نظام التشغيل كما أوستيوبلاستيك، الأنواع الفرعية تشوندروبلاستيك، و ﬁbroblastic حسب عنصرها النسجية المسيطرة. التكهن به يعتمد ليس فقط على المعلمات النسجية بل أيضا على موقعها التشريحية. وقد يحدث داخل العظام (في إينتراميدولاري أو حجرة إينتراكورتيكال)، على أسطح العظام، وفي مواقع اكستراوسيوس19. يمكن توضيح ظهور والتباين في نظام التشغيل كما اقتران الأحداث النمطان ودفعه ميكرونفيرونمينتال كاف، تليها زيادة التنمية والهجرة إلى الأجهزة البعيدة20،<sup class="x...

Osteosarcoma (OS) يحدث عادة في مناطق، ميتافيسيس العظام الطويلة، زراعة بنشاط خلال فترة المراهقة. أكثر من 80% المواقع المتضررة من نظام التشغيل لديها تفضيل ميتافيسيس الدانية الساق وعظم العضد الدانية، فضلا عن عظم الفخذ البعيدة والقريبة على حد سواء، المقابلة لموقع لوحة النمو1. يتألف نظام التشغيل متعددة الأنواع الفرعية الخلية مع خصائص الوسيطة وتنوع كبير في ميزات النسجية والصف. أدلة تدعم الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) وخلايا الاوستيوبلاستس ملتزمة السلائف وبيريسيتيس كخلايا المنشأ2،3،،من45. هذه الخلايا يمكن أن تتراكم التعديلات الوراثية أو جينية وأن تؤدي إلى نظام التشغيل تحت تأثير بعض الإشارات ميكرونفيرونمينتال العظام. الآليات الذاتية والخارجية على السواء تؤدي إلى عدم الاستقرار المجيني والتباين في نظام التشغيل، مع عدة تعمل الخصائص المورفولوجية والسريرية6،7. للعلاجات الفردية أو فحص العقاقير الجديدة، يلزم نماذج الرواية توليدها إلى ضد عدم التجانس أو غيرها من الاضطرابات السريرية.
نظام التشغيل ورم صلبة خبيث داخل العظمى. تعقيد والنشاط المحيطة العناصر المكروية يضفي الاختلافات المظهرية والوظيفية على خلايا نظام التشغيل في مواقع مختلفة من الورم. عظم المصفوفة خارج الخلية (BEM) يوفر سقالة الهيكلية والبيوكيميائية للترسبات المعدنية وإعادة عرض العظام. الجزء العضوي من المصفوفة خارج الخلية (ECM) يتكون بشكل رئيسي من نوع أنا الكولاجين يفرز من خلايا النسب أوستيوبلاستيك، بينما حصتها غضاريف تتكون من فوسفات الكالسيوم في شكل هيدروكسيباتيت8. الدور الدينامي لشبكات إدارة المحتوى في المؤسسة لتنظيم التصاق الخلايا، التمايز، عبر الحديث والأنسجة تعمل صيانة9.
وقد استخدمت بنجاح في خلية ثقافة الهلاميات المائية BEM وإدارة المحتوى في المؤسسة ديمينيراليزيد ويمكن تعزيز خلية انتشار10،11. يمكن تنظيم المركبة مثل العظام ECM حجم التجمع، ومصير القرارات وتطور النسب MSCs12،،من1314. وعلاوة على ذلك، الأدلة النتائج أهميته السريرية لتقديم نشاط osteogenic بتحفيز العمليات الخلوية خلال العظم تشكيل وتجديد15،،من1617.
في هذه المادة، ينشئ مجموعتنا نموذج تم التعديل والبديل مواتية لثقافة طويلة الأجل ثلاثي الأبعاد. تقديم الخلايا OS حقن BEM المستمدة من الأنسجة النمط الظاهري الوسيطة بين سهولة مقارنة بالبلاستيك الثقافات ثنائي الأبعاد. BEM المستمدة من الأنسجة المتجانسة الخاصة بالموقع وتظهر ميزته درامية كما يجري مكانة أصلي لنظام التشغيل الخلايا في المختبر ويتمتع بإمكانات كبيرة في مجال البحوث النظرية والسريرية OS. هذا المنهاج بم تتسم بسيطة ولكنها فعالة للبحث في المختبر ، ويجوز تمديدها في النمذجة سرطانات متعددة.

<table><tbody><tr><td>أنبوب الطرد المركزي 15 مل</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>50 مل أنبوب الطرد المركزي</td><td>Greiner</td><td>227270</td><td></td></tr><tr><td>طبق ثقافة الخلايا 6 سم</td><td>Greiner</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>لوحة 6 آبار</td><td>Greiner</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>C57-BL / 6J ماوس</td><td>مختبر جامعة صن يات صن مركز</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 حاضنة</td><td>SHEL LAB</td><td>SCO5A</td><td></td></tr><tr><td>ثنائي القاعدة فوسفات الصوديوم</td><td>مصنع الكواشف الكيميائي قوانغتشو</td><td>BE14-GR-500G</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F12</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0547</td><td></td></tr><tr><td>مصل الأبقار الجنيني</td><td>Hyclone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>مقياس الدم</td><td>BLAU</td><td>717805</td><td></td></tr><tr><td>Kanamycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1487</td><td></td></tr><tr><td>MG-63</td><td>الأكاديمية الصينية للعلوم ، شنغهاي سيل بنك</td><td></td><td>خط خلايا الساركوما العظمية البشرية</td></tr><tr><td>MNG / HOS</td><td>الأكاديمية الصينية للعلوم ، شنغهاي سيل بنك</td><td></td><td>خط خلايا الساركوما العظمية البشرية</td></tr><tr><td>الفينول الأحمر</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>P4633</td><td>يتم استخدام محلول الفينول الأحمر كمؤشر لدرجة الحموضة: يظهر لونه انتقالا تدريجيا من الأصفر إلى الأحمر على نطاق الأس الهيدروجيني 6.6 إلى 8.0.</td></tr><tr><td>كلوريد البوتاسيوم</td><td>سانجون للتكنولوجيا الحيوية</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة</td><td>سانجون التكنولوجيا الحيوية</td><td>A501211</td><td></td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم</td><td>سانجون التكنولوجيا الحيوية</td><td>A501218</td><td></td></tr></tbody></table>

نموذج المصفوفة خارج الخلية العظام ثلاثية الأبعاد ل osteosarcoma

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

أوستيوساركوما (نظام التشغيل) هو الأكثر شيوعاً وورم العظام الأولية شديدة عدوانية. فهو يتسم بالاختلافات التشريحية ونسيجية جنبا إلى جنب مع صعوبات التشخيص أو تشخيصية. ويتألف نظام التشغيل الخلايا السرطانية غير متجانسة جينوتيبيكالي وفينوتيبيكالي. وأثبتت العناصر المكروية العظام لحساب لتطور الورم عدم التجانس والمرض. عظم المصفوفة خارج الخلية (BEM) يحتفظ بمصفوفات ميكروستروكتورال والبيوكيميائية عناصر المصفوفة خارج الخلية الأصلية. يوفر هذا المتخصصة الخاصة بالانسجة سقالة مواتية وطويلة الأجل للخلية OS البذر وانتشار. توفر هذه المقالة بروتوكول لإعداد نموذج BEM وتطبيقه التجريبية. يمكن أن تنمو الخلايا OS وتفرق في متسقة مع تعقيد نسيجية من العينات السريرية OS متعددة تعمل. يسمح النموذج أيضا التصور مورفولوجيس المتنوعة وارتباطها مع التعديلات الوراثية والآليات التنظيمية الأساسية. كمثلي للبشرية نظام التشغيل، يمكن وضع هذا النموذج BEM-نظام التشغيل وتطبيق لعلم الأمراض والبحوث السريرية لنظام التشغيل.

بعد القعود وديسيلولاريزيشن، يبدو أن BEM شفافة مع مرونة وتماسك العظام الماوس الأصلي بالمقارنة مع أقوى. بقايا العضلات قليلاً والفضاء من تجويف النخاع يمكن وضوح ملاحظة (الشكل 1أ، ب). لتحديد ديسيلولاريزيشن فعالة من بم، بم جزءا لا يتجزأ من البارافين بعد التثبيت، وشرائح ثم إلى 3 – 5 ميكرومترات أقسام لتلوين الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E). إزالة شاملة لنواة الخلية يظهر بواسطة تصوير مشرق الميدانية. ترتيب شبكة بنية والكولاجين المسامية الطبيعية جيدا ويحتفظ BEM ديسيلولاريزيد (<strong ...

نموذج المصفوفة خارج الخلية (BEM) العظام osteosarcoma (OS) راسخة وهو موضح هنا. يمكن استخدامه سقالة مناسبة لمحاكاة الورم الرئيسي النمو في المختبر ، وتقدم نموذجا مثاليا لدراسة تباين النسجية وفحص نظام التشغيل.

نموذج المصفوفة خارج الخلية العظام ثلاثية الأبعاد ل Osteosarcoma

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

يوفر هذا الأسلوب استراتيجية فعالة لإعداد السقالات الوظيفية لأبحاث ورم العظام. decellularized العظام المصفوفة extracelullar، وأظهرت قابلية نموة مائية متغيرة للبقاء على قيد الحياة وأنشطة خلايا العظام. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن ثقافة خلايا العظام في المصفوفة المشتقة من العظام تظهر مورفولوجيا شديدة ال heterogenous مشابهة لهشاشة العظام السريرية.توفر هذه الطريقة نموذجًا مثاليًا للتحقيق في تطور وتطور حساسيات المخدرات لأورام العظام ، مثل ورم العظام ، ساركوما Ewing ، وغيرها من الأورام الخبيثة الانبثاث حتى العظم. للبدء ، والحصول على أربعة إلى ستة أسابيع من العمر BALB / c الفئران ، بعد القتل الرحيم فأر باستخدام مقص الجراحية العقيمة ، وقطع الشظية الطازجة ، الساق ، وعظم الفخذ من طرف خلفي. مع مساعدة من ملاقط، قشر قبالة الأنسجة الظهارية، ومن ثم إزالة أكبر قدر ممكن من الأنسجة الرخوة.شطف عظام الساق مع محلول PBS معقمة 10 mM مرتين لإزالة الدم في طبق طوله ستة سنتيمترات. تزج العظام في طبق مع 75٪ الإيثانول لمدة ثلاث دقائق ثم شطف مع برنامج تلفزيوني مرتين. تخزين العظام النظيفة في أنبوب جهاز طرد مركزي 50 ملليلتر مع أنبوب معقم PBS في 80 درجة مئوية.اذيب العظام المجمدة في درجة حرارة الغرفة ثم تجمد مرة أخرى عند 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. إخضاع العظام لأكثر من دورتين تجميد ذوبان للخلايا وانهيار الأنسجة. ثم، ضع العظام في أنبوب جهاز طرد مركزي معقمة 50 ملليلتر مملوءة بـ 0.5 من كلوريد الهدّان الطبيعي واحتضانها بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة على شاكر مداري مع اهتزاز لطيف لضمان تغطية كاملة وحتى للعظام.بعد decalcification ، decant حمض الهيدروكلوريك حل تماما وشطف العظام تحت المياه الجارية لمدة ساعة واحدة. ثم، استخدام الماء المقطر لغسل العظام مرتين لمدة 15 دقيقة لكل غسل على شاكر المدارية. تماما decant الحل.لاستخراج الدهون في العظام ذات الملهى، ضع العظام في أنبوب طرد مركزي 50 ملليلتر مع خليط 1:1 من الميثانول والكلوروفورم. التفاف أنبوب مع رقائق القصدير لتجنب الضوء لمنع تحلل الكلوروفورم. ووضع الأنبوب على شاكر مداري لمدة ساعة واحدة.ثم، استخدام ملاقط لنقل العظام إلى أنبوب آخر من الميثانول مع رقائق القصدير لمدة 30 دقيقة. إزالة الميثانول تماما، ويغسل بالماء المقطر مرتين لمدة 15 دقيقة على شاكر المدارية. Decant غسل المياه النهائية والمضي قدما في ظل حالة معقمة.شطف العظام في طبق ستة سنتيمترات مع برنامج تلفزيوني عقيم لمدة ثلاث دقائق. أضف 40 ملليلتر من محلول TE المعقم بنسبة 0.05٪ إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر وعظام حاضنة لمدة 23 ساعة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية. تجاهل الحل TE، وشطف مرتين مع برنامج تلفزيوني عقيمة تكملها 90 غرام /مليلتر أمبيسيلين و 90 غرام / مل kanamycin لمدة 15 دقيقة لكل من على شاكر المدارية.بعد decanting غسل النهائي تماما، وتجديد مرة أخرى مع 40 ملليلتر من برنامج تلفزيوني عقيمة مع المضادات الحيوية. اغسل جيدا لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع اهتزاز لطيف لتحقيق التعقيم الفعال للمساحات المسامية. ثم، نقل العظام إلى أنبوب جهاز طرد مركزي 50 ملليلتر مليئة برنامج تلفزيوني مع المضادات الحيوية العقيمة.يمكن تخزين المصفوفة خارج الخلية العظمية المعدة عند أربع درجات مئوية لمدة شهرين. اغمر بي إم في 75٪ الإيثانول في طبق ويصافح الطبق باليد لمدة 30 ثانية. ثم شطف مع برنامج تلفزيوني لمدة 30 ثانية، مرتين.نقل BEM على لوحة ثقافة خلية ستة-جيدا نظيفة. إضافة ملليلترين من ثقافة كاملة متوسطة لكل بئر. احتضان BEM بين عشية وضحاها في حاضنة ثاني أكسيد الكربون في 37 درجة مئوية.الحصول على خطوط خلايا نظام التشغيل البشري في 100 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني مسبق الدفء تحتوي على مؤشر الفينول الأحمر. استخدام ماصة لتعليق خلايا OS مع تركيز تقريبي من 1 مرات 10 إلى 5. بعد أن يتم نقع BEM بالكامل في الوسط ، من epiphyses القريبة أو البعيدة ، يخترق الإبرة إلى تجويف النخاع في BEM وحقن خلايا OS في BEM.احتضان نموذج OS-BEM لمدة ساعتين على الأقل في جو ثاني أكسيد الكربون المرطب 5٪ عند 37 درجة مئوية لضمان التزام الخلايا المحقونة بقوة بـ BEM. ثم أخرج الصحن من الحاضنة أضف ثقافة ملليلتر واحدة متوسطة على اللوحة، وابقيها في الحاضنة بين عشية وضحاها لتغطي سطح ثقافة BEM تمامًا.قم بنقل نموذج OS-BEM برفق إلى بئر جديد من لوحة سداسية مع ملاقطة معقمة، ثم قم بإعادة تغذية متوسط ثقافة المليلتر الطازجة. ثقافة النموذج لمدة 14 يوما في الحاضنة. خلال فترة الحضانة لمدة 14 يومًا، استمر في مراقبة اللون المتوسط.إذا تحول المتوسط إلى البرتقالي، أو حتى الأصفر، على الفور تحديث المتوسطة عن طريق تجاهل نصف المتوسطة القديمة وإضافة في المتوسطة الجديدة للحفاظ على بيئة صحية لخلايا نظام التشغيل. الحفاظ على رصد حالة الخلية تحت المجهر المقلوب الفلورانس. عندما تتوسع خلايا نظام التشغيل إلى لوحة، قم بنقل نموذج OS-BEM بلطف إلى بئر جديد آخر مع ملاقط عقيمة.بعد ثقافة 14 يوما، بلطف شطف نموذج OS-BEM مع برنامج تلفزيوني لإزالة الوسط ثقافة. ثم نقل إلى أنبوب جهاز طرد مركزي 15 ملليلتر وإضافة 10٪ buffered formalin لإصلاح لتحديد النسيج. بعد إزالة الألغام وإزالة الخلية، يبدو أن BEM شفافة مع مرونة أقوى ومثابرة مقارنة بعظم الفأر الأصلي.يمكن ملاحظة بقايا العضلات الصغيرة في مساحة تجويف النخاع بوضوح. يظهر التصوير في المجال الساطع للعظم الأصلي و BEM المزيل الخلية، الإزالة الشاملة لخلايا الخلايا. البنية المسامية الطبيعية في ترتيب شبكة الكولاجين يتم صيانتها بشكل جيد في BEM غير الخلوية.بالإضافة إلى ذلك، يُظهر التلطيخ المناعي للكولاجين الأول والكولاجين الرابع أن المكونات الرئيسية للمصفوفة خارج الخلية يتم الحفاظ عليها في قصبة الماوس بعد إزالة الخلايا. خلال ثقافة 14 يوما، يتم اختراق كل من periosteum و endosteum من قبل التوسع في خلايا نظام التشغيل. تظهر خلايا نظام التشغيل على BEM غير الخلية مورفولوجيا غير متجانسة للغاية تشبه ميزات cytopathologic لقسم نظام التشغيل.تحليل البيوكيميائية بعد زراعة في نموذج BEM لمدة 14 يوما يظهر مزايا كبيرة في الثقافات على المدى الطويل. أيضا، خلايا OS و BEM الثقافة، أعرب عن مصفوفة العظام عالية الجليكوبروتين، وهو محدد لمصفوفة العظام. وقد استخدم هذا النموذج ثلاثي الأبعاد في المختبر لإثبات عدم التجانس الظاهري وآلية تنظيمية للفك الفصال العظمي مع النجاح.

three-dimensional-bone-extracellular-matrix-model-for-osteosarcoma

Research

JoVE Journal

Cancer Research

أبحاث السرطان

في طرق الثقافة القياسية تؤخذ خلايا من بيئتهم الفسيولوجية ونمت على سطح البلاستيك من صحن. لدراسة سلوك خلايا نخاع العظام البشرية الأولية أنشأنا نظام الثقافة 3-D حيث تزرع الخلايا تحت الظروف تلخص المكروية مواطن من الأنسجة.

ثقافة الأنسجة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الابتدائية نخاع العظم الإنسان والأورام الخبيثة في

يتم تضمين الخلايا السرطانية في هلام الكولاجين ثم يتم وضعها في هلام الفيبرين اللاخلوي لتوليد نظام ثقافة ثلاثي الأبعاد يمكن من خلاله مراقبة الغزو وتشكيل أورام الأقمار الصناعية.

ثلاثي الأبعاد ثقافة الفحص لاستكشاف سرطان الغازية خلية والأقمار الصناعية ورم تشكيل

الحقن المباشر حويصلات خارج الخلية المستمدة من السرطان (EVs) ويؤدي إلى إعادة برمجة نخاع العظام دعم تطور الورم؛ ومع ذلك، الخلايا التي تتوسط هذا التأثير غير واضح. هنا، نحن تصف بروتوكول خطوة بخطوة للتحقيق EV بوساطة الخلايا الجذعية الورم الوسيطة (MSC) التفاعلات في فيفو، يكشف عن دور حاسم للمتعلمين EV MSCs في ورم خبيث.

نموذج ماوس الإكلينيكية من أوستيوساركوما لتعريف الاتصال خارج الخلية حويصلة بوساطة بين الورم والخلايا الجذعية الوسيطة

هنا، نقدم بروتوكولا لتوليد المستحثة pluripotent الخلايا الجذعية (إيبسكس) من متلازمة لي-Fraumeni (الدراسة الاستقصائية) الليفية المشتقة المريض، التفريق بين إيبسكس عبر الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) إلى خلايا الاوستيوبلاستس، والنمذجة في فيفو توموريجينيسيس باستخدام خلايا الاوستيوبلاستس المستمدة من المريض في الدراسة الاستقصائية.

Osteosarcoma متلازمة لي-Fraumeni الخلايا الجذعية Pluripotent المستحث المستمدة من المريض باستخدام النمذجة

لا تتطور نماذج ورم خبيث في العظام إلى ورم خبيث بشكل موحد أو بنسبة 100٪. يمكن أن يؤدي الحقن المباشر داخل الخلايا السرطانية العظمية إلى انصمام الرئة. نقدم تقنيتنا لنمذجة أورام العظام الأولية وورم خبيث في العظام باستخدام زرع طعم الورم الصلب في العظام ، مما يؤدي إلى النقش والنمو القابل للتكرار.

نمذجة أورام العظام الأولية وورم خبيث في العظام مع زرع طعم الورم الصلب في العظام

تسرد هذه الورقة الخطوات المطلوبة لزرع خطوط خلايا الورم الأرومي العصبي على سقالات ثلاثية الأبعاد قائمة على الكولاجين الموصوفة سابقا ، والحفاظ على نمو الخلايا لإطار زمني محدد مسبقا ، واسترداد السقالات للعديد من نمو الخلايا وتحليلات سلوك الخلية والتطبيقات النهائية ، قابلة للتكيف لتلبية مجموعة من الأهداف التجريبية.

نموذج محاكاة حيوية ثلاثي الأبعاد في المختبر للورم الأرومي العصبي باستخدام السقالات القائمة على الكولاجين

يصف البروتوكول الحالي حقن الساركوما العظمية داخل الظنبوب لتوليد نماذج الفئران التي تحمل الساركوما العظمية العظمية وآفات الانبثاث الرئوي.

حقن الساركوما العظمية داخل الظنبوب لتوليد الساركوما العظمية العظمية ونماذج الفئران الخبيثة الرئوية

هنا ، نصف نظاما ميكروفيزيولوجيا موحدا سهل التنفيذ يعكس تعقيد بنية نخاع العظم البشري في الجسم الحي ، مما يوفر نموذجا مناسبا لدراسة مجموعة واسعة من الأحداث الطبيعية والمرضية بدقة.

نموذج 3D لنخاع العظم البشري للتحقيق في الديناميات والتفاعلات بين الخلايا المقيمة في السياقات الفسيولوجية أو التومورية

يصف البروتوكول الحالي طريقة إنشاء نموذج فأر xenograft (PDX) مشتق من المريض باستخدام أنسجة الساركوما العظمية البشرية.

إنشاء نموذج فأر Xenograft مشتق من المريض مع أنسجة الساركوما العظمية البشرية

نقترح بروتوكولا لتقييم تجديد العظام على مستويات هرمية مختلفة. يتيح هذا النهج متعدد الوسائط التحليل الهيكلي عبر مقاييس طول مختلفة، مما يعالج التحديات في تحضير العينة بفعالية. كما يوفر سير عمل موثوق لتقييم فعالية المواد الحيوية في تعزيز تجديد العظام.

النهج متعدد الوسائط لتقييم تجديد العظام وأداء السقالات

يصف هذا البروتوكول تصنيع هياكل عظمية ثلاثية الأبعاد باستخدام خلايا عظمية بشرية مدمجة في هيدروجيلاتين ميثاكريلاتي (GelMA) مع مصفوفة خارج خلايا مفككة الخلية. الطريقة منخفضة التكلفة، قابلة للتوسع، ومتوافقة مع المعدات المختبرية الأساسية، مما يوفر منصة ترجمية لدراسة عمليات أمراض الجهاز العضلي الهيكلي.

منصة ثلاثية الأبعاد لزراعة العظام باستخدام الخلايا العظمية البشرية والمصفوفة خارج الخلايا غير المنفصلة لنمذجة أمراض الجهاز العضلي الهيكلي

اكتشف نموذج المصفوفة خارج الخلية العظام ثلاثية الأبعاد لدراسة سرطان العظام. يحاكي هذا النموذج نمو الورم الأولي ويساعد الباحثين على فهم تطور الورم واختبار حساسية الأدوية.

نموذج المصفوفة خارج الخلية العظام ثلاثية الأبعاد ل Osteosarcoma

استكشف المزيد من الفيديوهات