في تثبيط فيفو من MicroRNA لتقليل نمو الورم في الفئران

نقوم بإجراء العلاج الأول، ومقرها في مثبط ميكرورنا في نموذج سرطان الغدة الدرقية. تظهر هذه العلاجات النامية وعدًا لعلاج هذا المرض. هذا النوع من نموذج تقويم العظام، باستخدام طريق نظامية من تقديم العلاج، يسهل التحقق من صحة الأدوية الجديدة القائمة على الحمض النووي الريبي الصغير.

على الرغم من أننا نستخدم نموذج تقويم العظام لزرع خلايا سرطان الغدة الدرقية البشرية في الغدة الدرقية الماوس, هذه النماذج يمكن أن تكون جميع النظم لأنواع السرطان الأخرى. إثبات الإجراء مع جوليا راميريز مويا وأدريان أكونا سيكون راكيل أروشا ريسكو. إنها تقنيّة من معهدنا

بعد إنشاء CAL-62 خلية سرطان الغدة الدرقية البشرية خط المتوسطة غير مكتملة، تعليق 1 مرات 10 إلى aliquot الخلية 6 في 50 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية، وخلط الخلايا مع حجم متساو من مصفوفة غشاء الطابق السفلي. تحميل الخلايا في حقنة 1 ملليلتر، ومجهزة إبرة نصف بوصة 27 غيج، وحقن تحت الجلد 100 ميكرولترات من العينة في الجناح الأيسر من صمام 6 الأسبوع مناعيا جيم ماوس عارية. بعد أسبوعين من الحقن، إضافة atagomiR أو العلاج المعالج حل عازلة إلى 160 ميكرولترات من درجة حرارة الغرفة في كاشف التسليم الجسم الحي في 1 نقطة 5 ملليلتر أنبوب.

وعلى الفور دوامة الحل لمدة 10 ثانية لضمان تعقيد الخليط. احتضان محلول المعالجة لمدة 30 دقيقة عند 50 درجة مئوية، يليه طرد مركزي قصير في جهاز طرد مركزي صغير. ثم، تمييع مجمع المعالجة الرسوبية ستة أضعاف مع برنامج تلفزيوني جديد وخلط شامل.

وحقن كامل 200 ميكرولتر حجم العلاج مباشرة في الورم. حقن 50 ميكرولترات من 40 ملليغرام للتر D-Luciferin الركيزة حل تحت الجلد 2 مرات في الأسبوع, في كل التجريبية. التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع بعد التخدير isoflurane.

وضع الحيوان في غرفة في نظام التصوير في vivo bioluminescence، وصورة إشارة الإضاءة الحيوية مع برنامج التصوير في الجسم الحي وفقا للبروتوكولات القياسية. ثم تحليل نمو الورم. مقارنة كلا العلاجات وتحديد أهمية و الاختلافات في النمو باستخدام اختبار T.

لتقويم الغدة الدرقية الغدة الدرقية خلية تعليق aliquot من CAL -62 الخلايا في 5 microliters من برنامج تلفزيوني، وحقن تحت الجلد 100 ميكرولترات من مسكن و 100 ميكرولترات من المضادات الحيوية في 7 صمام 7 الأسبوع القديمة جيم ماوس عارية. بعد التأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع إصبع، ضع الحيوان تحت مجهر تشريح وتطهير عنق الحيوان مع iodopovidone. بعد ذلك، قم بعمل شق 2 سنتيمتر تقريبًا في الجلد، ويزيح الزبالات اللعابية لفضح الرقبة.

استخدام ملقط تشريح، و / أو مقص، لتشريح عضلات حزام لفضح القصبة الهوائية والغدة الدرقية، واستخدام حقنة 10 ميكرولتر، لحقن حجم 5 ميكرولتر من الخلايا السرطانية في الحق في فصيص الغدة الدرقية، وتقع على جانب الغضروف cricoid. عندما يتم تسليم جميع الخلايا، أعد وضع الغلان اللعابي، واستخدام الحرير مضفر، المغلفة، الغرز غير قابلة للامتصاص لإغلاق الشق. ثم تطبيق iodopovidone على منطقة الجرح، ووضع الماوس على بطانية ثيرميك مع رصد حتى الشفاء الكامل.

بعد أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع من حقن الخلايا داخل الغدة الدرقية ، قم بإعداد محلول العلاج كما هو موضح ، وتقديم الحل عن طريق الحقن المداري الرجعي للجيوب الأنفية الوريدية للحيوان الحامل للورم الغدة الدرقية المخدر. في هذه التجربة التمثيلية ، تم قمع نمو الأورام حقن داخليًا دون مثبط ميكرورنا 146B ، بشكل كبير فيما يتعلق بالتحكم السلبي. كما لوحظت مستويات التعبير داخل الدماغ لبعض علامات الانتشار في مستويات منخفضة، في الأورام المعالجة في الأخصوم، مقارنةً بـ الأورام المسيطرة.

وبالإضافة إلى ذلك، يمكن دراسة استعادة أهداف الحمض النووي الريبي الصغرى من خلال تحليل الورم استخراج الحمض النووي الريبي، أو البروتين. كشف جماعي أن تثبيط في الجسم الحي من الجيش الملكي النيبالي الصغير الفردية فعالة ويمكن استغلالها علاجيا لعلاج سرطان الغدة الدرقية. التحليل النسيجي لأورام الغدة الدرقية التي أنشئت في الفئران كما هو موضح، يسمح تلطيخ للخلايا الظهارية المحيطة بالورم، والكشف عن بنية بصيلات الغدة الدرقية من أنسجة الورم.

وتجدر الإشارة إلى أن الحقن الوريدي لمثبط ميكرورنا 146B في الفئران ، مع وجود ورم راسخ ، يؤدي إلى انخفاض كبير في حجم الورم مقارنة بالحيوانات المعالجة بالتحكم. وعلاوة على ذلك، فإن التعبير عن المجهر 146B الهدف 146B في الورم الأولي، يزيد بعد العلاج المضاد للرنا 146B، مما يؤكد على إمكانية تثبيط التعبير الحمض النووي الريبي الصغرى وبالتالي استعادة الجينات المستهدفة انها كعلاج في سرطان الغدة الدرقية. هذه التقنية، ونتائج ليبين اللاحقة، فتح إمكانية استكشاف علاجات جديدة تقوم على عدم علاج الحمض النووي الريبي لعلاج سرطان الغدة الدرقية.