طريقه خاليه من الانزيمات للعزل والتمدد للخلايا الجذعية الدهنية المستمدة من الدهون البشرية

يوفر هذا البروتوكول طريقة بسيطة فعالة من حيث التكلفة لعزل ASCs دون استخدام إنزيمات قاسية أو خطوات الطرد المركزي ، والتي يمكن أن تغير النمط الظاهري للخلية والسلوك. عدم وجود خطوات قاسية تعطي خلايا أقل التلاعب من تلك المعزولة باستخدام الانزيمات والطرد المركزي، والتقليل من الأسئلة حول ما إذا كانت الملاحظات التجريبية هي قطعة أثرية من طريقة العزل. يمكن لهذه الطريقة explant توليد السريرية ذات الصلة ASCs ليتم إدخالها إلى المريض لعلاج مجموعة متنوعة من الأمراض أو توسيع في تطبيقات البحوث تحمل الحياة.

من الصعب شرح طريقة الرمز بالكلمات. يمكن أن تخدم العرض التوضيحي المرئي العلماء الآخرين متاعب تعلم تفكيك الأنسجة نفسها. ويمكن استخدام أساليب مماثلة لعزل مجموعات أخرى من الفئات السكانية الأخرى من الفئات الأخرى مثل تلك التي تُستخدم في الأنسجة السرّية.

ل mince عينات الأنسجة abdominoplasty، نقل أولا الأنسجة إلى غطاء لوحة 100 ملليمتر معقمة. ثم استخدم إبرة معقمة لعقد قطعة من الأنسجة في مكانها واستخدام مشرط معقمة لقطع الأنسجة إلى أقل من قطعة ملليمتر واحد. نقل الأنسجة إلى أنبوب جديد وعكس أو هز العينة من خمس إلى ست مرات لضمان خلط جميع الطبقات.

ثم, مع ملعقة معقمة, نقل 2.5 إلى خمسة ملليلتر من الأنسجة إلى 100 ملليمتر فراغ البلازما الغاز معالجة الأنسجة لوحة. قياس حجم العينة عن طريق صب في أنبوب جديد للطرد المركزي. بعد ذلك، إضافة حجم مكافئ من وسائل الإعلام ثقافة الأنسجة إلى لوحة ودوامة بلطف لوحة لخلط المحتويات.

احتضان لوحة في 37 درجة مئوية في خمسة في المئة من ثاني أكسيد الكربون حتى ينظر إلى عدد كاف من الخلايا على قاعدة لوحة. مرة واحدة لوحظ عدد كاف من الخلايا على لوحة أو بعد سبعة أيام، أيهما أقرب، وإزالة جميع القطع المتبقية من الأنسجة. بعد ذلك ، ثقافة ASCs في وسائل الإعلام ثقافة الأنسجة حتى تصل إلى 70 ٪ التقاء أو حتى تصبح المجموعات كثيفة في هذه النقطة الخلايا التي يجب أن يتم تمريرها.

شطف بلطف لوحة مع 1X الفوسفات المخزنة المالحة. لstepsinize الخلايا الملتصية، وpirate المالحة الفوسفات المخزنة، إضافة ملليلتر واحد من التربسين تستكمل مع 0.25٪ EDTA إلى كل لوحة واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. إضافة كمية صغيرة من الوسائط إلى لوحة لإلغاء تنشيط التربسين.

ثم الماصات بلطف التربسين وسائل الإعلام من أعلى لوحة إلى أسفل، فقدان أي خلايا ضعيفة تعلق من لوحة. لزرع الخلايا، أولا إضافة وسائل الاعلام إلى لوحة. ثم، إضافة الخلايا بطريقة قطرة ثم دوامة لوحة لضمان التوزيع حتى عبر لوحة.

بعد ثلاثة مقاطع، انتقل إلى تدفق قياس الخلايا والتمايز. بعد ثلاثة مقاطع، تم العثور على ASCs معزولة من عينات lipoaspirate وبضمين البطن أن يكون مورفولوجيا MSC وphenotype، على غرار ASCs المعزولة بعد الهضم الأنزيمي. مثل غيرها من MSCs، واكسونل المعزولة ASCs سلبية لـ CD45 وإيجابية لـ CD73 و CD90 و CD105.

عند تحديد النسيج، يجب أن تكون مساحة سطح كل قطعة كبيرة بما يكفي لـ ASCs للهجرة من الأنسجة. هذه هي الخلايا الجذعية الأساسية التي يمكن استخدامها لمجموعة واسعة من التطبيقات. ويمكن استخدام ASCs المعزولة لأي تطبيق المصب، في الجسم الحي أو في المختبر.