المعدلة المغايرة الأوستيوميوكوتانيوس رفرف النموذج في الفئران لنقل الاوعيه الدموية المركبة المركب البحوث

الطعم المركب الاوعيه الدموية يقدم فوائد تغيير الحياة لمتلقي الزراعة ، ولكن الأسباب البيولوجية لرفض الكسب غير المزروع واعتلال الاوعيه الدموية لا تزال غير مفهومه بشكل سيئ. يقدم نموذج القوارض الجراحي المعروض هنا نموذجا قابلا للتكرار وذي صله سريريا للزرع ، مما يسمح للباحثين بتقييم احداث الرفض والاستراتيجيات العلاجية المحتملة لمنع حدوثها.

العدد القليل من زرع الخلايا الاحية المركبة الوعائية التي يتم إجراؤها سريرياً يتطلب نموذجًا حيوانيًا موثوقًا به ويمكن استنساخه من أجل دراسة الأسباب الكامنة وراء رفض الكسب غير المشروع. الأنسجة ذات الصلة سريريا مثل الجلد, العضلات, والعظام كلها موجودة في النموذج. بالإضافة إلى ذلك، فإن الطبيعة غير الوظيفية لنموذجنا تسمح بإجراء جراحة أسرع، ووقت أقل لرفرف، وانخفاض المراضة مقارنة مع نماذج تقويم العظام من VCA.

في متلقي زراعة اليدين ، يمكن أن يؤدي اعتلال الأوعية الدموية للسفن المانحة إلى إغلاق كامل للسفن ، وتلف نقص تروية اليد المطعمة. هذا النموذج هو أداة لدراسة تطوير هذه الأحداث الأوعية الدموية. قبل محاولة هذا النموذج الجراحي، يجب أن يكون الجراح الأساسي على دراية وتقنيات الجراحة الأوعية الدموية macrovascular.

هذا هو إجراء معقد وطويل. سوف مظاهرة البصرية مساعدة مختبرات أخرى على إعداد وفقا لذلك، وفهم خطوات الجراحة. للبدء ، حصاد أول الطرف الخلفي من الفئران المانحة عن طريق إجراء شق الجلد في concavity الفخذ ، وفضح الأوعية الفخذية.

جعل شق الجلد البطني، والتي سوف تساعد في تشريح من pedicle. بعد التفكيك في الركبة والكاحل ، قم بإجراء قطع الجلد الظهرية ، ونقل الpedicle لتحرير الكسب غير المشروع ، ونقل الكسب غير المشروع على الفور إلى الجدول الجراحي المتلقي ، حيث يتم إعداد الموقع الجراحي للحيوان المتلقي مسبقًا لتقليل وقت الإقفار في الكسب غير المشروع. على الحيوان المتلقي، وفضح وتشريح الأوعية الفخذية كما كان من قبل، ومن ثم anastomose الكسب غير المشروع، الوريد من طرف إلى جانب، الشريان من نهاية إلى نهاية.

Inset الكسب غير المشروع في الجيب الإربي وتوجيهه رأسا على عقب. أخيرا، خياطة الجلد. لبدء الإجراء ، حلق فأر متبرع مُخَذِر ، ثم استخدم كريمًا مزيل الشعر.

حقن 30 وحدة من الهيبارين تحت الجلد في منطقة scruff. ضع الحيوان على وسادة تسخين وإنتاج حقل جراحي معقمة عن طريق التحضير، وتنقية، واللف المنطقة الجراحية، بما في ذلك الجانب الظهري من الساق. استخدام مشرط شفرة رقم 15 لجعل شق الجلد 3 سنتيمترا في concavity الفخذ من الفئران المانحة.

استخدام مقص إيريس لتعكس بشكلٍ مُرَمَسِرِيًا لوحة الدهون الإربية. باستخدام تشريح حادة مع مسحة القطن، وفضح الأوعية الفخذية المشتركة، ومن ثم وضع خطاف الأسلاك مع شريط مرن لسحب عضلات البطن. تحت مجهر تشريح مع ما يصل إلى 40X التكبير، واستخدام مقص صغير، رقم ثلاثة ملقط صائغ مستقيم، ورقم خمسة ملقط 45 درجة الزاوية لتشريح pedicle proximally من ظهور الأوعية الفخذية المشتركة تحت الرباط الأربية، وdistally إلى التقاء الأوعية الزبرجدي في الكسب غير المشروع.

باستخدام مقاطع صغيرة وقطط المجوهرات ثنائي القطب، ligate وتقسيم فروع الشرايين والشريين الكبيرة لتعبئة الأوعية الفخذ الرئيسية. استخدام ملقط ثنائي القطب غرامة لتكويد أي فروع صغيرة. استخدم مقص Iris لإجراء شق جلدي من وسط الجلد السابق قطع على طول الجانب البطني من hindlimb إلى منطقة الكاحل.

قطع العضلات gracilis والعضلات الأخرى adductor تحته بطريقة عمودية لفضح وligate الأوعية الجينية الوسيطة، والأوعية الصغيرة المتفرعة العميقة، والعصب الوركي. عند هذه النقطة، على طاولة جراحية منفصلة، يجب على الجراح الآخر أن يُنبت ويُقَذن الحيوان المتلقي لإعداد موقع جراحية المتلقي في الوقت المناسب لوضع الكسب غير المشروع، وتقليل وقت الإقفار في الكسب غير المشروع. قم بعمل شقوق جلدية محيطية على مستوى الركبة والكاحل، وفك الركبة والكاحل، وإزالة العضلات والأنسجة الدخيلة.

جعل شق الجلد الرأسي على الجانب الظهري من hindlimb لتحرير الكسب غير المشروع، وتتألف من الشظية والساق، والآن متصلة فقط من قبل بيديكل. ضع المشابك الصغيرة بشكل تقريبي قدر الإمكان على الشريان الفخذي والوريد وقطع الدقة في أقرب وقت ممكن من الرباط الأربيني. استخدام 27 قياس سكب القنب حادة لحقن الملحية heparinized في الشريان الفخذي لطرد الكسب غير المشروع من الدم.

التفاف الكسب غير المشروع المعزول في الشاش الدافئة المالحة غارقة ونقله على الفور إلى الجدول مع الحيوان المتلقي، مع موقع الجراحية التي أعدت بالفعل لالاستئصال الوعائي. Intubate الجرذ المتلقي، و التخدير العميق مع 2.5 إلى 3٪ يبخر isoflurane، متوازنة مع لتر واحد في الدقيقة من الأوكسجين. وضع supine الحيوان على وسادة التدفئة، وفرك والستائر في موقع الجراحة.

في حين أن الجراح الأول يعمل على تحرير الكسب غير المشروع من الحيوان المانح ، استخدم شفرة مشرط رقم 15 لإجراء شق جلدي طوله ثلاثة سنتيمترات في قعقعة الفخذ من فأر المتلقي المُخدّر. استخدام مقص إيريس لتعكس بشكلٍ مُرَمَسِرِيًا لوحة الدهون الإربية. بعد تعريض الأوعية الفخذية المشتركة بنفس الطريقة كما هو الحال مع الحيوان المانح ، ضع خطافًا بسلك مع شريط مرن لسحب عضلات البطن.

ثم ligate وتقسيم فروع ميرفي. باستخدام 10-0 خياطة النايلون توقف، الأوعية المانحة أنستوميوس. إلى السفن المتلقية عن طريق تقنية وريدية من طرف إلى جانب.

ثم قم بإجراء التهاب الأوعية الشرياني عن طريق تقنية النهاية إلى النهاية. بعد الإفراج تدريجيا المشابك، ومراقبة المواقع anastomotic للنزيف وإضافة خياطة إضافية إذا لزم الأمر. من أجل ضمان إعادة ضخ الكسب غير المشروع الفعال ، تقييم بصريًا لعموم الأوعية الدموية.

ثم inset الكسب غير المشروع في الجيب الإربي، وتوجيهه رأسا على عقب، مع مفصل الكاحل متفوقة، ومفصل الركبة أدنى. استخدام خياطة الدس لتأمين الكسب غير المشروع للعضلات المجاورة. وأخيراً، أغلق الجلد عن طريق فراش أفقي متقطع قابل لامتصاص الجلد 4-0 خياطة، والاستمرار في الرعاية بعد العملية الجراحية كما هو موضح في المخطوطة.

الفئران VCA heterotopic hindlimb osteomyocutaneous نموذج رفرف يسمح للبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل allograft تحت ضغط المناعة. رفرف مخفية جيدا في منطقة الفخذ، ويشكل الحد الأدنى من المراضة وعدم الراحة للحيوان. عندما تم إيقاف علاج قمع المناعة ، تم رفض الكسب غير المشروع.

صور دوبلر من allograft تظهر تحولا من الحد الأدنى من وفرة الدم على الفور بعد VCA، إلى revascularization كامل من رفرف في اليوم 64. خزعة الجلد من allograft syngeneic في اليوم 45 يظهر مورفولوجيا طبيعية من مكونات الجلد، في حين أن هناك ضمور وتسلل الخلايا أحادية النوى في allograft allograft في رفض في اليوم 75 تعامل يوميا مع جرعة أقل من المثبط للمناعة. خزعة العضلات من allograft syngeneic في اليوم 45 يظهر مورفولوجيا طبيعية، في حين ضمور العضلات وتسلل الخلايا أحادية النوى واضحة في allograft الالوجراف في رفض في اليوم 98، تعامل يوميا مع جرعة أقل من المثبط للمناعة.

خزعة الشريان الفخذي من allograft syngeneic في اليوم 45 يظهر مورفولوجيا طبيعية من الشريان، على النقيض من الشريان الفخذي من allograft ألوجينيك في الرفض في اليوم 98، تعامل يوميا مع جرعة أقل من المثبط للمناعة. يوفر هذا النموذج أداة لاختبار آثار الرفض الحاد والرفض المزمن والعوامل البيئية مثل العدوى والشتائم الجراحية على تطور اعتلال الأوعية الدموية. مطلوب الأدوية المثبطة للمناعة للبقاء على المدى الطويل من الكسب غير المشروع.

هذه الأدوية خطرة كيميائيا، وينبغي التعامل معها بحذر ومعدات حماية الموظفين المناسبة.