تقييم الاستجابة المناعية الخلوية ذبابة الفاكهة، melanogaster المورفولوجية، استخدام "في فيفو البلعمه بالانزيم"

هذا في فحص البلعوم في الجسم الحي يسمح للباحثين بتنفيذ الشاشات الوراثية ودراسات الجمعيات على نطاق الجينوم لتحديد الجينات الجديدة التي تنظم البلعميات في خلايا الدم البالغة. هذه التجربة هي كمية وسهلة الأداء، ويمكن تطبيقها على فحص الحيوانات الحية للعوامل المضيفة التي تؤثر على التعرف على مسببات الأمراض، وامتصاص، وإزالة. بعد سحب الشعر الشعري الزجاجي رفيع الجدار مع إبرة، استخدم ميكرومتر لعقد الإبرة تحت المجهر، واستخدام رقم خمسة، الدقيقة نقطة، ملاقط الفولاذ المقاوم للصدأ لكسر الطرف إلى قطر طرف ميكرومتر 100.

لقياس حجم السائل الذي سيتم حقنه في كل ذبابة، تحميل إبرة شعرية مع تلوين الطعام العقيمة 5٪ في برنامج تلفزيوني، وطرد السائل على قطرة من الزيت المعدني على ميكرومتر مرحلة 0.01 ملليمتر. الاستغناء عن 10 ميكرولترات من 1.6 ملليغرام لكل ملليلتر الجسيمات على مربع صغير من بارا فيلم، وسحب السائل في الإبرة. جبل الإبرة في فوهة حاقن، وخط الذباب تخدير على طول المنطقة المعينة على منصة الطيران، الجانب البطني حتى، مع رؤساء الموجهة نحو الجزء الأمامي من لوحة.

وضع قارورة في المناطق المقابلة على مقاعد البدلاء، وحقن الذباب في الزاوية العليا من البطن مع خمسة، 100 ميلي ثانية مضخات السائل لتسليم حوالي 10 نانومترات من الجسيمات المجموع. نقل كل ذبابة في القارورة المناسبة كما يتم حقنها، مشيرا إلى الوقت على القارورة. بعد ذلك، قم بتحميل إبرة جديدة مع محلول Trypan Blue بنسبة 0.4٪، ثم قم بتعيين حاقن هوائي إلى بوابة، للسماح بتدفق مستمر للهواء لدفع السائل من الإبرة.

بعد 30 دقيقة من الحقن الأولي، حقن كل ذبابة البطن مع الأزرق Trypan حتى البطن ممتلئة ومزدوج. جبل الذباب على الشرائح المجهر مع الشريط الكهربائي، الجانب البطني إلى أسفل، ودفع الأجنحة إلى جانب الذبابة لتأمينها إلى الشريط. ثم، دفع بلطف الرأس في الشريط لضمان أن الطاير لن تتحرك.

مباشرة بعد تأمين كل الذباب ، صور الحشرات ، واحدة في وقت واحد ، في تكبير 25 أو 32 مرة على مجهر الفلورانس المقلوب المرفق بكاميرا رقمية وحاسب رقمي ، مع التركيز على السفينة الظهرية لكل ذبابة باستخدام برنامج الكمبيوتر للكاميرا الرقمية. ثم، تسجيل وقت التعرض والتكبير بين التجارب. لقياس الفلور، افتح برنامج تحليل التصوير المناسب، وفتح صورة واحدة.

لقياس شدة الفلور في الوعاء الظهري، ارسم مضلع حول الوعاء الظهري، وحدد قياس لتسجيل شدة الفلور داخل المضلع. لتحديد شدة الفلورنس الخلفية، انسخ المضلع الأول، ثم قم بنقله إلى منطقة مجاورة للسفينة الظهرية لكل ذبابة. ثم حدد قياس، وسجل كثافة الفلوريسنس من منطقة الخلفية.

لتطبيع الفلورية السفينة الظهرية من قبل الفلورانس الخلفية، بعد قياس شدة الفلوريسنس من بقية الذباب، وتقسيم الفلورس السفينة الظهرية من قبل الفلورنسي الخلفية، وحساب متوسط كثافة الفلور الأوعية الظهرية تطبيع من جميع الذباب في سلالة واحدة. بعد أن شنت الجانب البطني أسفل على قطعة من الشريط الكهربائي، والجزأين الأولين من البطن، حيث تقع السفينة الظهرية، واضحة للعيان. تنشأ المصادر الرئيسية للخطأ التجريبي عند خطوات الحقن والتصوير في الإجراء.

قد يؤدي استخدام نفس الإبرة لحقن ذباب متعدد إلى انسدادها مع أنسجة الذباب أو الجسيمات. الذباب التي لا تتلقى ما يكفي من الفلورية Trypan الأزرق مشرق في جميع أنحاء البطن بأكملها، والتي يمكن أن تقلل من نسبة السفينة الظهرية إلى الفلورانس الخلفية، وبالتالي تقليل نسبة كثافة الفلوريسين الحقيقي للحيوان. وينبغي تصوير الذباب أثناء شل حركته بسبب ثاني أكسيد الكربون، حيث أن الذباب المتحرك بنشاط ينتج صورا ضبابية لا يمكن تحديدها كميا.

خط متحول من مجموعة زوكر من ذباب الإيثيل ميثانسولفونات المعالجة غير قادر على phagocytose الغرام سلبية والبكتيريا إيجابية الغرام ويعرض تقريبا أي الفلورسي السفينة الظهرية في مقايسة phagocytosis في الجسم الحي، ويقترن سلالة Zuker الخلفية isogenic وأخرى سلالة مشتركة السيطرة المختبرية. تتبع الوقت والنظام الذي يتم حقن الذباب لضمان أن الذباب في مراحل مماثلة من التعرف على مسببات الأمراض وامتصاص عند تصويرها. يمكن تحديد الآليات الجزيئية الكامنة وراء العيوب البلعومية من خلال دراسة خلايا الدم المفردة مع المجهر النقّاز أو بعد فرز الخلايا المُنشّط بالفلور أو عن طريق عزل الخرز المغناطيسي لخلايا الدم البالغين.