التحكم المكاني والزماني للبدء من الميلانوما من الخلايا الجذعية المتحولة للخلايا الصباغية

يتم تشخيص سرطان الجلد على نطاق واسع في جميع أنحاء العالم ، مع زيادة في الإصابة. تسمح هذه البروتوكولات بالمراحل المبكرة من بدء الورم الميلانيني إلى التحكم فيها بعناية ، مما يسهل دراسة تطوره. من خلال التحكم في وقت وموقع تنشيط الخلايا الجذعية الصباغية ، لدينا القدرة على تمييز التغيرات داخل مجموعة الخلايا الجذعية وإقهار الورم الميلانيني الجديد.

ومن خلال هذا الإجراء، سيكون دهاهم كيم ولوي أن، طالبان خريجان من المختبر. قبل يومين إلى ثلاثة أيام من بدء العملية، استخدم أداة تشذيب كهربائية لحلاقة الجلد الظهري من كل فأر عمره سبعة أسابيع. في يوم التجربة ، استخدم مسحة قطنية لتطبيق طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر على الجلد المكشوف.

مرة واحدة وقد تم تطبيقها بالتساوي كريم، واستخدام مسحات القطن نظيفة لإزالة كريم، تليها مسح لطيف مع قطعة قماش مبللة لإزالة أي كريم المتبقية. ثم العودة كل الماوس إلى قفصها المنزل مع رصد حتى الشفاء الكامل. للإشعاع فوق البنفسجية-B، تغطية الجلد الظهري مع المواد الواقية UV-B بحيث سيتم كشف المنطقة المطلوبة فقط، وتغطية غرفة الأشعة فوق البنفسجية مع غطاء مقاومة للأشعة فوق البنفسجية.

ثم تشغيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية-B لتشعيع الماوس لفترة زمنية تجريبية مناسبة قبل العودة الماوس إلى قفص فارغ مع رصد حتى الشفاء الكامل. لعزل عينات الجلد، استخدم أداة تشذيب كهربائية لإزالة أي شعر من منطقة الجلد الظهرية للفئران المشعة، وفرشاة طفيفة الجلد المكشوف مع الأنسجة الخالية من الوبر لمسح المنطقة. جعل شق صغير مع مقص حاد فقط فوق قاعدة الذيل وإدراج مقص كبير، حادة في شق لفصل الأنسجة الضامة تحت الجلد.

باستخدام مقص حاد، وقطع بعناية على طول حافة منطقة الجلد من الفائدة لعزل عينة الأنسجة ووضع أنسجة الجلد استئصالها على منشفة ورقية نظيفة. ثم استخدام ملقط مملة لتمتد الجلد بحيث يلتصق المنشفة ومشدود. عندما تم حصاد جميع العينات، ضع عينة جلدية ومنشفة ورقية تدعم في قطعة من ورق التصفية المطوية المجاورة مباشرة للتجعد، مع الحرص على أن العينة ناعمة وغير مطوية أو متكومة.

أغلق جانبي ورق التصفية باستخدام الدبابيس، ثم اقطع الورق. ثم تغمر تماما العينات في 10٪ محايد buffered formalin لمدة ثلاث إلى خمس ساعات في درجة حرارة الغرفة قبل غسل الأنسجة مع اثنين من يغسل لمدة خمس دقائق في المياه الأيونية. بعد الغسيل الثاني، قم بإزالة أي مادة متبقية من أنسجة الجلد بعناية، وتقليم حواف العينات بحيث لا تكون خشنة.

المقبل، وجعل ثلاثة قطع القوس في كل عينة بحيث عرض الشرائط لا يزيد عن خمسة ملليمترات، وجعل التخفيضات عرضية بحيث العينات ليست أكثر من 20 ملليمتر واسعة. ضع قالبًا كريو يحتوي على درجة حرارة قطع مثالية أو متوسطة في اتجاه عمودي ، ووضع أربع إلى خمس قطع من الجلد على قمة أكتوبر. عندما تكون جميع القطع في مكانها ، استخدم زوجين من ملقط غرامة لجلب حافة طويلة من كل قطعة من الجلد إلى الجزء السفلي من قالب التبريد بحيث تكون العينات عمودية داخل OCT وتعامد على قاعدة القالب.

ثم ملء القالب مع أوكت إضافية إلى الشفة الثانية ووضع القالب على سطح مستو من قطعة من الجليد الجاف، وذلك باستخدام ملقط لضبط أي قطع الجلد التي قد تحولت أثناء النقل كما كتلة يبدأ في تجميد حسب الضرورة. عندما تكون الفئران سبعة أسابيع بعد الولادة، بشرتهم الظهرية في telogen. خلال telogen، ومن المعروف أن الخلايا الجذعية بصيلات الشعر والميلانوسيت تكون في حالة راحة هادئة، والجلد يجب أن تظهر أي نمو الشعر كبيرة بعد الحلاقة.

ومع ذلك، يمكن أن تحفز إزالة الشعر الكيميائي تنشيط الخلايا الجذعية بصيلات الشعر، مما يؤدي إلى نمو كبير للشعر داخل المنطقة ذات الاهتمام. كما إزالة كيميائي يمكن أن تحفز بشكل كبير على تنشيط كل من جريب الشعر والخلايا الجذعية الميلانوسييت, الخلايا الجذعية الميلانوسيت المعرضة للورما في حالة نشطة يمكن أن تشكل الأورام ويمكن ملاحظة بدء سرطان الجلد المجهرية في غضون أسبوعين من إزالة الشعر الكيميائي. يمكن للإشعاع الأشعة فوق البنفسجية-B أيضا الحث على بدء الورم من الخلايا الجذعية الصباغية سيرس، عرضة للورم.

الأهم من ذلك، الأشعة فوق البنفسجية-B يحفز النقل المباشر للخلايا الجذعية الميلانوسيت من تخصص الخلايا الجذعية الجريب إلى البشرة بين الجريبات. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تحفز الأشعة فوق البنفسجية-B الخلايا الجذعية الخلايا الجذعية المنشأ تكوين الورم الميلانيني في جميع أنحاء البشرة بين الدواخل. على غرار الجلد الظهري، يمكن ملاحظة بدء الورم الميلانيني الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية-B بشكل ملحوظ في مناطق الجلد الأخرى، مثل جلد الأذن.

في الواقع، بالمقارنة مع السيطرة على جلد الأذن، التي تغطيها القماش المقاوم للأشعة فوق البنفسجية، جلد الأذن المعرض للأشعة فوق البنفسجية-B يدل على تصبغ أعلى بسبب ارتفاع عبء بدء الورم الميلانيني. جرعات مختلفة من الأشعة فوق البنفسجية-B قد يكون لها آثار مختلفة على جلد الماوس ونشاط الصباغ. لذلك، من المهم تحديد وتحسين جرعة التشعيع قبل بدء التجربة.