التحليل التجريبي لأحاطه الخلايا الشحمية بواسطة الضامة

يولد الجسم واحد إلى 10 مليار من الخلايا المبرمجة كل يوم. ويساعد إزالة هذه الخلايا بكفاءة في إزالة حطام الخلايا والحفاظ على المخزونات. يمكن استخدام هذه الطريقة في العديد من التطبيقات لتوصيف ربط الخلايا المبرمج وابتلاع العديد من أنواع الخلايا البلعمية الأخرى.

إثبات هذا الإجراء سيكون يوكسوان تشن، وهو فني كبير في مختبري. لحصاد الخلايا الزعترية، بعد فتح تجويف الصدر من ماوس أسود C57 سذج، استخدم ملقط طرف ناعم منحني لسحب الغدة الصعترية. وضع الجهاز في طبق ثقافة الأنسجة التي تحتوي على 10 ملليلتر من RPMI 1640 المتوسطة.

طحن الغدة الصعترية كلها ضد نهايات متجمد من اثنين من الشرائح المجهر وتصفية تعليق الأنسجة الناتجة من خلال مصفاة خلية ميكرومتر 70 في أنبوب 50 ملليلتر. جمع الخلايا الزعتية عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه في 40 ملليلتر. بعد عد, الطرد المركزي الخلايا مرة أخرى وإعادة تعليق ما يصل إلى مرتين 10 إلى الخلايا الثماني في 20 ملليلتر من برنامج تلفزيوني جديد لكل 50 ملليلتر أنبوب.

تسمية الخلايا مع CFSE خمسة ميكرومولار في 20 ملليلتر من برنامج تلفزيوني لكل أنبوب. عكس الأنابيب مرتين إلى ثلاث مرات لخلط قبل احتضان الخلايا الزعتية لمدة لا تزيد عن دقيقتين في درجة حرارة الغرفة المحمية من الضوء. في نهاية الحضانة ، أوقف التفاعل مع 10 ملليلتر من مصل الحصان المعطل للحرارة وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي.

Resuspend الخلايا المسماة في 40 ملليلتر من برنامج تلفزيوني جديد للعد والطرد المركزي تليها غسل إضافية مع 40 ملليلتر من المتوسطة. بعد غسل المتوسطة، resuspend الخلايا الزعتية في سبع مرات 10 إلى الخلايا الست لكل ملليلتر من تركيز متوسط ثقافة الأنسجة وبذات الخلايا في طبق ثقافة الأنسجة 100 ملليمتر. ثم إضافة الستوروسبورين إلى ثقافة الخلية في تركيز نهائي واحد micromolar ووضع لوحة في حاضنة ثقافة الأنسجة لمدة أربع ساعات.

لعزل الضامة البريتونية، حقن اثنين C57 الأسود 6 الفئران intraperitoneally مع ملليلتر واحد من 3٪ من الثيوغليكولات الذين تتراوح أعمارهم بين في اليوم صفر قبل فتح جلد البطن دون إزعاج الصفاق في اليوم الخامس. لطرد تجويف البريتوني، استخدم حقنة 10 ملليلتر مجهزة بإبرة قياس 18 لدفع بسرعة 10 ملليلتر من عازلة الغسيل في التجويف قبل التعرق ببطء المخزن المؤقت للتخزين لجمعها في أنبوب 50 ملليلتر. غسل lava البريتوني مرتين مع برنامج تلفزيوني.

resuspend الضامة البريتونية في مرتين 10 إلى الخلايا الست لكل ملليلتر من تركيز متوسط لثقافة الأنسجة. البذور المقبل 500 ميكرولترات من الضامة في كل بئر من لوحة 24 جيدا ووضع لوحة في حاضنة ثقافة الأنسجة لمدة ساعتين. في نهاية الحضانة، استنشاق افراط لإزالة الخلايا العائمة وإضافة 500 ميكرولترات من الأنسجة ثقافة المتوسطة لكل بئر.

على الفور إضافة صفر إلى 12 مرة 10 إلى ست ثيموليسيت في 500 ميكرولترات من المتوسط إلى كل بئر من الآبار من الثقافة ووضع لوحة في الحاضنة ثقافة الأنسجة لمدة أربع ساعات. في نهاية الحضانة، وغسل كل جيدا مرتين مع برنامج تلفزيوني جديد لإزالة أي الخلايا المبرمج العائمة الحرة تليها غسل واحد مع عازلة تلطيخ. التسمية المقبلة الضامة لوحة ملزمة مع 200 ميكرولترات من ضوء العازلة تكملة مع المضادة المناسبة CD11b في بئر ووضع لوحة في أربع درجات مئوية لمدة 20 دقيقة.

في هذه التجربة التمثيلية، أظهرت ما يصل إلى 30٪ من الضامة البريتونية المحفزة thiogly، إشارة إيجابية في قناة CFSE تشير إلى أن هذه البلعات قد ابتلعت الخلايا المبرمجة المسمى CFSE. المراقبة المجهرية من الضامة الابتلاع من الخلايا المبرمج ضروري للتحقيق في قدرة الضامة على استيعاب الخلايا المبرمج كما تليفات سفسي الإيجابية المنتشرة في الربع الأيمن السفلي بسبب كثافة مختلفة تشير إلى أن عدد الخلايا المبرمج داخل الضامة الفردية مختلفة. زيادة نسبة الخلايا المبرمج إلى الضامة لا يزيد فقط من عدد الضامة استيعاب الخلايا المبرمج ولكن أيضا يعزز قدرة الضامة على استيعاب المزيد من الخلايا المبرمج.

في مجموعة أخرى من التجارب، حوالي 15٪ من الضامة أصبحت إيجابية CFSE عندما تم إضافة CFSE المسمى الخلايا الزعتية المبرمج إلى ثقافة الضامة لمدة أربع ساعات مما يشير إلى أن هذه الضامة كانت الضامة البلعمية. مير الأجسام المضادة كتل التناضح في المدى الغض النظري بطريقة تعتمد على الجرعة ، وعموما انسداد قد تمثل حوالي 30 ٪ من كفاءة ائي في الإعداد الحالي. بالإضافة إلى ذلك، فإن مثبطات مستقبلات TAM المعتمدة حديثًا تُخفف من هضاب الضامة بطريقة تعتمد على الجرعة تصل إلى تركيز نانومولير حوالي 100.

تذكر دائما للتحقق من النسبة المئوية للخلايا المبرمج كما يؤثر هذا العدد مباشرة على كفاءة تليف الدم. يمكن تحليل الضامة البلعوية بمزيد من التحليل بواسطة البقع الغربية للتحقيق في جزيئات الإشارة التي تنظمها عملية الابتلاع والمجهر لدراسة ديناميكيات الابتلاع.