جراحة استئصال النخاع الشوكي للحبل الشوكي وتقييم المحرك الحركي المفتوح في الفئران

استئصال النخاع الشوكي الصدري الفئران هو نموذج قيّم واستنساخي لإصابة الحبل الشوكي من جانب واحد للتحقيق في الآليات العصبية للشفاء الحركي وفعالية العلاج. تتضمن هذه المقالة دليل مفصل خطوة بخطوة لتنفيذ إجراء استئصال الفص وتقييم الأداء الحركي في ساحة مفتوحة.

العمود الفقري hemisection تنتج قابلة للقياس الكمي ومثالية العجز الحركي القابلة للاستنساخ التي يمكن التقاطها مع مقياس القاطرة التي قمنا بتطويرها. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي الانتقائية وإعادة إنتاج الآفة ، مما يؤدي إلى انخفاض التباين في الأنماط الظاهرية السلوكية بين الحيوانات. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع في فأر بالغ تخدير، جعل شق 2.5 سنتيمتر في الجلد حليق الإفراط في T-6 إلى T-10 فقرات واستخدام مقص حاد لسحب الجلد والدهون السطحية.

استخدام مقص تشريح حادة والسحب الذاتي الاحتفاظ لفصل العضلات الفقرية, إدراج على الجانب الظهري من T-7 إلى T-9 فقرات واستخدام ملقط غرامة والقطن يميل applicators ل debride ومسح أي الأنسجة المتبقية لفضح العمليات العرضية وlamina الفقرية. ضع المعدل تحت مجهر ستيريو واستخدم تقليم العظام الحساسة لقطع الأوجه بعناية على فقرات T-7 و T-8. استخدم مشرطًا لإجراء قطع سطحي من ملليمتر واحد في النسيج الضام الظهري بين الصفيحة T-8 و T-9 الفقارية ، مع الحرص على عدم إصابة الحبل السفلي واستخدام تقليم العظام لإزالة العملية العرضية من الفقرات T-8.

مع ملقط hemostatic المنحنية فرضت بعناية على عملية T-7 العرضية، تدوير نهايةdal من t-8 صفح قليلا 20 درجة تقريبا وإدراج التشذيب العظام تحت t-8 lamina. جعل قطع خط الوسط تمتد على طول lamina، ومواصلة استئصال لامينك عن طريق تكرار التخفيضات على الجانب الأيسر والأيّني من اللامينا الوسيطة الفقارية لعمليات عرضية لفضح الحبل الشوكي. بالتنقيط 100 ميكرولترات من 2٪ ليدوكاين في القناة الشوكية المكشوفة واستخدام ملقط غرامة ومقص iridectomy لإزالة dura تراكب الجزء T-8 العمود الفقري.

كرر إدارة الليدوكائين إلى الحبل المكشوف وحدد خط الوسط في الحبل عن طريق التصور لخط الوسط الذي تم إنشاؤه بين العمليات العرضية الممتدة بين فقرة T-7 المكشوفة إلى T-9. باستخدام ملقط غرامة لتحقيق الاستقرار في الحبل الشوكي، واستخدام سكين تشريح لتحلل الحبل الشوكي من خط الوسط نحو جانب واحد من الحيوان، مع الحرص على عدم قطع من خلال الشريان الشوكي الأمامي على الجانب البطني. باستخدام مقص استئصال الرحم، قطع بعناية من خلال أي الأنسجة المتبقية على الجانب الآفة من الحبل الشوكي لضمان الربع البطني الجانبي هو بشكل مناسب مُنقط ووضع معقمة، ما يقرب من ستة من قبل اثنين ملليمترات من الإسفنج الإسفنج الملحية الغارقة في تجويف مكشوف فوق الحبل الشوكي.

ثم، استخدام 4-O البوليجلاكتين 910 الغرز لإغلاق طبقات العضلات والجلد حول موقع شق ووضع الفئران في بيئة دافئة تحت مصباح الحرارة مع رصد حتى الشفاء الكامل. في الوقت المناسب في وقت تجريبي للاختبار السلوكي، بعد أن تم التعود على الفئران إلى الساحة، تبدأ تسجيل الفيديو ووضع الفئران في وسط الساحة، في ظل ظروف الإضاءة الخافتة لتشجيع النشاط الحركي. السماح للجرذ لاستكشاف لمدة لا تقل عن أربع دقائق، ونقل الفئران مرة أخرى إلى وسط الساحة عندما لا تزال ثابتة لفترة أطول من 20 ثانية لتعزيز الحركة.

ثم، تسجيل الأداء الحركي من جلسة الاختبار المسجلة. لحركات الأطراف المفصلية، تسجيل حركات المفصل الخلفية أثناء الحركة التلقائية بشكل منفصل للكاحل والركبة والورك، إما طبيعية أو طفيفة أو غائبة. للحصول على دعم الوزن، تقييم قدرة العضلات الممدودة hindlimb على العقد ودعم وزن الجسم محملة عندما يكون الطرف على الأرض عندما يكون الجرذ ثابتة، وكذلك أثناء الحركة النشطة.

بالنسبة للموقف الرقمي، قم بتقييم موضع الأرقام الخلفية بينما يكون الجرذ ثابتًا وأثناء الحركة. إكمال معلمة خطوة إلا إذا كان الجرذ يمكن أن تدعم وزنه الجسم أثناء الدوس عن طريق تصنيف اتجاه وضع مخلب hindlimb في وقت الاتصال الأولي وعند رفع من الأرض بالإضافة إلى سيولة من مرحلة التأرجح أثناء الدوس. إكمال معلمة التنسيق forelimb/hindlimb فقط إذا حدثت أربع خطوات متتالية أثناء الاختبار وإذا كان يمكن للأطراف دعم وزن الجسم بنشاط.

تقييم موقف الذيل أثناء الحركة إما صعودا أو للأسفل. ثم إضافة الدرجات الفردية من كل معلمة لتوفير إجمالي لكل hindlimb إلى حد أقصى من 20 نقطة. لتقييم ومقارنة أحجام الآفة بين المجموعات التجريبية ، يمكن حساب المنطقة القصوى للآفة كنسبة مئوية من إجمالي المقطع المقطعي للنخاع الشوكي بسهولة مع التلطخ النسيجي لأقسام الحبل الشوكي.

على سبيل المثال، هذه الآفة التمثيلية للهيميورد الأيسر مع تراكب نسبة منطقة الآفة القصوى المشتركة بين الفئران أظهرت متوسط حجم الآفة من حوالي 47٪ من منطقة الحبل المقطعي. هذه التغييرات التمثيلية في الأداء الحركي في الحالة السليمة على مدى الأسابيع الخمسة الأولى بعد قذف الجانب الأيسر تظهر ضعفًا كبيرًا في الحركة في الجانب الخلفي الأيسر للحيوان خلال الأسابيع الثلاثة الأولى بعد الجراحة. ويلاحظ تحسن في مستوى الحركة في hindlimb الحق من قبل أسبوعين بعد العملية.

أهم الأشياء التي يجب تذكرها هي أن تحديد دقيق لخط الوسط الشوكي للعناية بال hemisection والعناية بالحيوان ومراقبتها بعد الجراحة أمران ضروريان لبروتوكول ناجح. هذا التقييم السلوكي يوفر بروتوكولا مثاليا لفحص للمؤشرات paretrecorvial العلوي لتكملة مع اختبار متخصص لمعالجة مسألة محددة من الفائدة على الانتعاش الحركي.