Name: تنقيه الصفائح الدموية من الدم الفار (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: تعلم تنقية الصفائح الدموية من دم الفئران باستخدام تقنية الطرد المركزي على تدرج iohexol. تتيح هذه الطريقة دراسة وظائف الصفائح وتفعيلها باستخدام التدفق الخلوي والمجهر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقد تم دعم هذا العمل من خلال التمويل الاولي لمؤسسه سينسيناتي لبحوث الأطفال ومنحه جامعه سينسيناتي التجريبية الانتقالية إلى محمد ناظم ونود ان نشكر الدراسات الخلوية في مستشفي الأطفال سينسيناتي لتدفق البحوث الاساسيه لخدماتهم.

وينبغي اجراء جمع الدم الماوس مع الرعاية المؤسسية المناسبة الحيوانية والموافقة علي لجنه الاستخدام.
ملاحظه: يتم وصف بروتوكول تنقيه الصفائح الدموية في رسم تخطيطي للتدفق في الشكل 1.
1. جمع الدم
<ol><li>أضافه 25 μL من 3.2 ٪ سيترات الصوديوم (pH 7.2) كمضاد للتخثر و 0.4 mM من بشكل جلي-برو-الأرجنتين-Pro (GPRP) في أنبوب البولي بروبيلين.</li>
	<li>
جمع ما يقرب من 200 μL من الدم من الماوس C57BL/6 باستخدام الرجعية المدارية النزيف. ملاحظه: يمكن جمع الدم من اي نوع من سلاله الماوس بغض الانتباه عن العمر أو الجنس.<ol>
<li>استخدام 2 مل من ايزوفلوراني في اي نوع من الغرفة لتخدير الماوس. ملاحظه: يتم فحص عمق التخدير عن طريق علامات زيادة التنفس وانخفاض الحركة. يجب ان الماوس لا تستجيب لحركه غرفه التخدير ، أو ليتم التعامل معها. إذا كان الماوس يستجيب للحركة أو المناولة ، فانه يتطلب المزيد من الوقت للحفاظ علي غرفه التخدير.</li>
		<li>1-2-2 فتح اما الجفن الأيمن أو الأيسر من الماوس وادراج 7.5 سم (0.12 سم قطر) أنبوب الشعرية في الضفيرة الوعائية للعين.</li>
		<li>تويست أنبوب الشعرية نصف بدوره في حين تطبيق الضغط علي أنبوب الشعرية لكسر الاوعيه وبدء تدفق الدم. عقد الحيوانية راسا علي عقب علي قنينة جمع ليتم ملؤها عن طريق العمل الشعرية.</li>
		<li>بمجرد ان يتم جمع الحجم المناسب من الدم ، وأزاله أنبوب الشعرية وإغلاق العين عن طريق تطبيق ضغط خفيف لمده 30 ثانيه علي الجفن مع الشاش. مره واحده يتم إيقاف النزيف ، وأعاده الماوس إلى قفصها ورصد لنزيف.</li>
		<li>فحص العينين للصدمة 1-2 أيام بعد النزيف المداري الرجعية. أزاله اي الماوس من الدراسة تظهر علامات صدمه كبيره للعين نتيجة لهذا الاجراء و موت ببطء. ملاحظه: يجب ان الماوس لا تخضع لأي نوع من العلاج الذي يمكن ان تمنع الصفائح الدموية لمده أسبوعين علي الأقل قبل جمع الدم. يجب استخدام عينه الدم لتنقيه الصفائح الدموية في غضون ساعة واحده من نزيف الماوس.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. تنقيه الصفائح الدموية
ملاحظه: وينبغي اجراء تنقيه الصفائح الدموية في درجه حرارة الغرفة لمنع تدهورها. تاكد من ان درجه حرارة الكواشف والاداات بين 18 إلى 22 درجه مئوية. لمنع تدهور الصفائح الدموية ، يجب تجنب التغليف السريع والاهتزاز القوي اثناء العملية.
<ol><li>أضافه 600 μL من التدرج iohexol المتوسطة (12 ٪ مسحوق iohexol في 0.85 ٪ كلوريد الصوديوم ، 5 مم Tricine ، pH 7.2)11 في أنبوب 1.5 mL.</li>
	<li>أضافه 200 μL من عينه الدم ببطء أسفل الجانب من الأنبوب علي راس متوسط التدرج مع طرف ماصه واسعه تتحمل بحيث الدم و iohexol المتوسطة لا تخلط (الشكل 2A).</li>
	<li>الطرد المركزي العينة التي تحتوي علي أنبوب في 400 x g لمده 20 دقيقه في 20 °c في دوار دلو يتارجح مع تسارع بطيء والتباطؤ.</li>
	<li>جمع معظم الطبقات الغنية بالصفائح الدموية وجزء صغير من طبقه الصفائح الدموية الفقيرة (إجمالي 300 إلى 400 μL) باستخدام طرف ماصه واسعه التجويف دون إزعاج طبقات ار بي سي ومكافحه الحرائق (الشكل 2 ب). نقل عينه الصفائح الدموية إلى أنبوب جديد. ملاحظه: إذا كان عدد الصفائح الدموية اقل في الدم أو يتم استخدام حجم أصغر من الدم ، يمكن ان ينظر إلى طبقه الصفائح الدموية الغنية وطبقه الصفيحات الفقيرة علي انها طبقه واحده.</li>
	<li>أضافه 1 مل من تلفزيوني إلى عينه الصفائح الدموية ، ومزيج من قبل عكس ، والطرد المركزي في 800 x g لمده 10 دقيقه في 20 درجه مئوية في دوار دلو يتارجح. تجاهل الحل تماما وأضافه 200 μL من تلفزيوني لأعاده تعليق الصفائح الدموية مع الأنابيب الخفيفة. ملاحظه: هذه الخطوة اختياريه ، لأنها تزيل بروتينات البلازما المتوسطة واللونية وتزيد من حساسية الصفائح الدموية لناهضات مثل الصفيحة. بما ان أجهزه الطرد المركزي المختلفة لديها برامج مختلفه ، يمكن تحديد التسارع/التباطؤ البطيء عن طريق قراءه دليل المستخدم لجهاز الطرد المركزي.</li>
	<li>نقل 30 μL من هذه العينة إلى أنبوب جديد لحساب الصفائح الدموية. ويمكن استخدام الصفائح الدموية المتبقية لاختبارات الكيمياء الحيوية والفسيولوجية مثل تنشيط الصفائح الدموية ، والتجميع ، والإفراج الحبيبية ، الخ.</li>
	<li>لاستخراج الحمض الريبي النيبالي أو البروتين ، والطرد المركزي عينه الصفائح الدموية في 800 x g ل 10 دقيقه لبيليه الصفائح الدموية. تجاهل سوبرناتانت تماما دون إزعاج بيليه. أضافه الحجم المطلوب من RNA أو البروتين تحلل العازلة لlyse الصفائح الدموية.</li>
</ol>3. عد الصفائح الدموية
<ol><li>عد خلايا الدم بأكملها دون تخفيف وتنقيه الصفائح الدموية (المخفف 2 إلى 5 اضعاف مع تلفزيوني) باستخدام محلل الخلايا الألى. استخدام العينات من 30 إلى 50 μL للعد.</li>
	<li>احسب العدد الإجمالي لصفائح الصفيح بالضرب بحجم العينة.</li>
	<li>حساب النسبة المئوية لغله/استعاده الصفائح الدموية المنقية.</li>
	<li>حساب ار بي سي والكريات البيضاء في عينه الصفائح الدموية المنقية (المخفف 50 إلى 100-اضعاف مع التلفزيونية) مع المجهر.</li>
</ol>4. تنشيط الصفائح الدموية
<ol><li>في أنبوب ، أضافه 1 إلى 2,000,000 الصفائح الدموية المنقية في ما يصل إلى 100 μL من تلطيخ العازلة (تلفزيوني مع 2 ٪ الجنين البقري المصل ، الدم).</li>
	<li>لعدد متعدد من العينات ، وجعل مزيج رئيسي من الأجسام المضادة مع 1 μL (0.5 ملغ/مل) من التالي: PE-Cy7 الفئران المضادة للماوس TER 119 ، PE الفئران المضادة للماوس CD45 ، FITC الفئران المضادة للماوس CD41 ، والفئران APC المضادة للماوس/CD62P الإنسان الصفائح الدموية المنشطة ، علي التوالي. أضافه المزيج الرئيسي إلى أنابيب لتلطيخ الخلايا. لا تقم باضافه البعد.</li>
	<li>في أنبوب آخر ، أضافه 1 إلى 2,000,000 من الصفائح الدموية المنقية في ما يصل إلى 100 μL من تلطيخ العازلة ، و 0.4 mM GPRP الببتيد. أضافه الانسجه لتنشيط الصفائح الدموية ووصمه عار الخلايا التالية الخطوة 4.2. ملاحظه: يجب أضافه GPRP إلى العينة قبل أضافه الشكل لمنع التراكم أو التجلط من خلال تنشيط الصفائح الدموية. يجب تحسين تركيز الصفيحة للحصول علي تنشيط جيد لصفائح الصفيح. بعد تنشيط الصفائح الدموية ، يتم تقليل عدد الاحداث اثناء الحصول علي العينات عن طريق قياس التدفق الخلوي.</li>
	<li>كعنصر تحكم إيجابي ، أضافه 1 μL من الدم كله في ما يصل إلى 100 μL العازلة تلطيخ في أنبوب و 0.4 mM GPRP الببتيد. أضافه الشكل لتنشيط الصفائح الدموية. كعنصر تحكم سلبي ، أضافه 1 μL من الدم كله في ما يصل إلى 100 μL من تلطيخ العازلة. لا تقم باضافه الشكل في عينه التحكم السلبية. وصمه عار الخلايا التالية الخطوة 4.2.</li>
	<li>للتحكم في النمط الخلوي التدفق ، تسميه 5 أنابيب مع غير ملون ، PE-Cy7 ، PE ، FITC ، و APC. أضافه 100 μL من تلطيخ العازلة ، 1 μL من الدم ، و 1 μL من الأجسام المضادة لكل منها إلى أنابيب المسمي لوصمه عار الخلايا.</li>
	<li>احتضان عينات لوصمه عار لمده 30 دقيقه في درجه حرارة الغرفة في الظلام.</li>
	<li>غسل العينات عن طريق أضافه 1 مل من تلطيخ العازلة لكل أنبوب. الطرد المركزي في 800 x g لمده 5 دقائق في درجه حرارة الغرفة. تجاهل العازلة تلطيخ بعناية دون التخلي عن بيليه.</li>
	<li>أضافه 300 μL من تلطيخ العازلة لكل أنبوب ، مزيج اقل ما يقال ، ونقل إلى أنبوب FACS. خزن العينات الملونة في الظلام حتى يتم تحليلها باستخدام مقياس التدفق الخلوي.</li>
</ol>5. تحليل تدفق الخلوي الصفائح الدموية
<ol><li>
إنشاء تجربه جديده وتوليد سجل مبعثر مقابل الجانب سجل مبعثر المؤامرات نقطه وتعيين بوابات ل Ter119 PE-Cy7 (ربك) ، CD45 PE (الكريات البيضاء) ، CD41 FITC (الصفائح الدموية) ، و CD62P APC (الصفائح الدموية المنشطة) السكان وفقا لاستراتيجية النابضة المختارة لل تجربه في برنامج المغنية FACS.
	<ol>
<li>افتح التسلسل الهرمي للسكان عن طريق اختيار إظهار التسلسل الهرمي للسكان ضمن علامة التبويب السكان. تحرير التسلسل الهرمي للسكان عن طريق التحقق من استراتيجية النابضة وأعاده تسميه البوابات بشكل صحيح. </li>
		<li>افتح طريقه عرض الإحصائيات عن طريق اختيار إنشاء عرض إحصائيات. تحرير عرض الإحصائيات وفقا لتفضيلات المستخدم بالنقر بزر الأيمن فوق عرض الإحصاءات وتحديد تحرير عرضالإحصاءات.</li>
		<li>اختيار لون لكل بوابه التي تعزز الجانب البصري للتخطيط عن طريق النقر المزدوج علي مربع المقابلة للسكان.</li>
	</ol>
</li>
	<li>في نافذه المضخم الخلوي ، انقر علي علامة التبويب المعلمات وضبط الفولتية للمعلمات لتصور السكان من الفائدة علي المؤامرات. </li>
	<li>ضبط الفولتية لكل من المعلمات بحيث يمكن تمييز السكان السلبية من السكان الايجابيه. قبل تسجيل العينات لمراقبه التعويض ، تاكد من ان الضوابط الايجابيه ذات الصبغة الواحدة علي النطاق (تاكد من ان القمم الموجبة مرئية وليست بعيده إلى اليمين). ملاحظه: إذا كانت القمم الايجابيه خارج النطاق ، ينبغي تعديل الفولتية لرؤية السكان الإيجابيين.</li>
	<li>تسجيل الخلايا الملونة أحاديه اللون لعناصر التحكم في التعويض (غير ملون ، PE-Cy7 ، PE ، FITC ، APC).</li>
	<li>إذا لم يتم اعداد بوابات التحكم الايجابيه بشكل صحيح ، فاضبطها عن طريق تغيير الفولتية.</li>
	<li>انتقل إلى التجربة &Gt; اعداد التعويض &Gt; حساب التعويض. اختر تطبيق فقط في النافذة الناتجة.</li>
	<li>قم بالتبديل إلى ورقه العمل العمومية بالنقر فوق زر التبديل في الأعلى ، يسار اطار ورقه العمل.</li>
	<li>تحميل عينه التحكم الايجابيه والحصول علي ما يكفي من الخلايا لضبط التعويض والبوابات.</li>
	<li>تحميل العينة مره أخرى والتحقق من ان كل مؤامرة يظهر السكان الخلية المتوقعة استنادا إلى الأجسام المضادة الملونة الفلوروكروم. الحصول علي وتسجيل 100,000 الاحداث لعينات الدم الكامل و 10,000 الاحداث الصفائح الدموية المنقية. تحميل العينات واحدا تلو الآخر حتى يكتمل الاستحواذ.</li>
	<li>تحليل بيانات التدفق الخلوي مع البرنامج مع المؤامرات والبوابات المناسبة (الشكل 3)</li>
</ol>

<ol><li>de Witt, S. M., Verdoold, R., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+platelet-based+control+of+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Insights into platelet-based control of coagulation.</a> Thrombosis Research. 133, S139-S148 (2014).</li>
<li>Machlus, K. R., Thon, J. N., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpreting+the+developmental+dance+of+the+megakaryocyte%3A+a+review+of+the+cellular+and+molecular+processes+mediating+platelet+formation%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Interpreting the developmental dance of the megakaryocyte: a review of the cellular and molecular processes mediating platelet formation.</a> British Journal of Haematology. 165 (2), 227-236 (2014).</li>
<li>Weyrich, A. S., Zimmerman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets%3A+signaling+cells+in+the+immune+continuum%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Platelets: signaling cells in the immune continuum.</a> Trends in Immunology. 25 (9), 489-495 (2004).</li>
<li>Nami, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+platelets+and+PBMC%3A+New+evidence+in+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between platelets and PBMC: New evidence in wound healing.</a> Platelets. 27 (2), 143-148 (2016).</li>
<li>Mancuso, M. E., Santagostino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets%3A+much+more+than+bricks+in+a+breached+wall%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Platelets: much more than bricks in a breached wall.</a> British Journal of Haematology. 178 (2), 209-219 (2017).</li>
<li>Hampton, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets%27+Role+in+Adaptive+Immunity+May+Contribute+to+Sepsis+and+Shock%5BTitle%5D)+AND+%22Journals+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Platelets' Role in Adaptive Immunity May Contribute to Sepsis and Shock.</a> Journals of the American Medical Association. 319 (13), 1311-1312 (2018).</li>
<li>Sabrkhany, S., Griffioen, A. W., Oude Egbrink, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+blood+platelets+in+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29+-+Reviews+on+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of blood platelets in tumor angiogenesis.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Reviews on Cancer. 1815 (2), 189-196 (2011).</li>
<li>Menter, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+%26%2334%3Bfirst+responders%26%2334%3B+in+wound+response%2C+cancer%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+and+Metastasis+Reviews%22%5BJournal%5D)">Platelet &#34;first responders&#34; in wound response, cancer, and metastasis.</a> Cancer and Metastasis Reviews. 36 (2), 199-213 (2017).</li>
<li>Fink, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+platelet-specific+mRNA+by+real-time+PCR+after+laser-assisted+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Characterization of platelet-specific mRNA by real-time PCR after laser-assisted microdissection.</a> Thrombosis and Haemostasis. 90 (4), 749-756 (2003).</li>
<li>Trichler, S. A., Bulla, S. C., Thomason, J., Lunsford, K. V., Bulla, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-pure+platelet+isolation+from+canine+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Central+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Ultra-pure platelet isolation from canine whole blood.</a> BioMed Central Veterinary Research. 9, 144(2013).</li>
<li>Ford, T. C., Graham, J., Rickwood, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new%2C+rapid%2C+one-step+method+for+the+isolation+of+platelets+from+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">A new, rapid, one-step method for the isolation of platelets from human blood.</a> Clinica Chimica Acta. 192 (2), 115-119 (1990).</li>
<li>Noisakran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+bone+marrow+cells+by+dengue+virus+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Hematolology%22%5BJournal%5D)">Infection of bone marrow cells by dengue virus in vivo.</a> Experimental Hematolology. 40 (3), 250-259 (2012).</li>
<li>Rickwood, D., Ford, T., Graham, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nycodenz%3A+a+new+nonionic+iodinated+gradient+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Nycodenz: a new nonionic iodinated gradient medium.</a> Analytical Biochemistry. 123 (1), 23-31 (1982).</li>
<li>Graham, J. M., Ford, T., Rickwood, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+the+major+subcellular+organelles+from+mouse+liver+using+Nycodenz+gradients+without+the+use+of+an+ultracentrifuge%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation of the major subcellular organelles from mouse liver using Nycodenz gradients without the use of an ultracentrifuge.</a> Analytical Biochemistry. 187 (2), 318-323 (1990).</li>
<li>Milligan, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+model+of+disseminated+dengue+virus+type+1+infection+in+AG129+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal model of disseminated dengue virus type 1 infection in AG129 mice.</a> Journal of General Virology. 98 (10), 2507-2519 (2017).</li>
<li>Strassel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+gene+rescue+of+a+Bernard-Soulier+mouse+model+to+study+platelet+glycoprotein+Ibbeta+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Lentiviral gene rescue of a Bernard-Soulier mouse model to study platelet glycoprotein Ibbeta function.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (7), 1470-1479 (2016).</li>
<li>Bergmeier, W., Boulaftali, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+transfer+method+to+study+platelet+function+in+mouse+models+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Adoptive transfer method to study platelet function in mouse models of disease.</a> Thrombosis Research. 133, S3-S5 (2014).</li>
<li>Bakchoul, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+the+use+of+the+non-obese+diabetic%2Fsevere+combined+immunodeficiency+mouse+model+in+autoimmune+and+drug-induced+thrombocytopenia%3A+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Recommendations for the use of the non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency mouse model in autoimmune and drug-induced thrombocytopenia: communication from the SSC of the ISTH.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 13 (5), 872-875 (2015).</li>
<li>Aurbach, K., Spindler, M., Haining, E. J., Bender, M., Pleines, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+collection%2C+platelet+isolation+and+measurement+of+platelet+count+and+size+in+mice-a+practical+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Blood collection, platelet isolation and measurement of platelet count and size in mice-a practical guide.</a> Platelets. , 1-10 (2018).</li>
<li>Jirouskova, M., Shet, A. S., Johnson, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+murine+platelet+structure%2C+function%2C+assays%2C+and+genetic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">A guide to murine platelet structure, function, assays, and genetic alterations.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 5 (4), 661-669 (2007).</li>
<li>Birschmann, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+functional+highly+purified+human+platelets+for+the+identification+of+new+proteins+of+the+IPP+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Use of functional highly purified human platelets for the identification of new proteins of the IPP signaling pathway.</a> Thrombosis Research. 122 (1), 59-68 (2008).</li>
</ol>

ولا يعلن أصحاب البلاغ عن اي تضارب في المصالح.

عاده ، يتم عزل الصفائح الدموية بواسطة طرد منخفضه السرعة التي تعطي البلازما الغنية بالصفائح الدموية التي تحتوي علي عدد كبير من خلايا الدم ، والحطام الخلوي ، وبروتينات البلازما التي يمكن ان تتداخل مع الاختبارات البيوكيميائية والفسيولوجية والاحتياجات بعيده تنقيه21. ولذلك ، من المهم استخدام طريقه سريعة وبسيطه التي يمكن ان تسفر عن الصفائح الدموية النقية دون الملوثات الرئيسية. يصف البروتوكول المعروض هنا تنقيه الصفائح الدموية من دم الفار باستخدام وسيطه متدرجة مع طرد منخفضه السرعة. المعلمات المستخدمة في ه...

الصفائح الدموية هي أحد مكونات الدم التي تعمل كبادئ لتخثر الدم ردا علي الضرر في الاوعيه الدموية. انهم يتجمعون في موقع الاصابه لسد جدار السفينة1. الصفائح الدموية هي أجزاء من الخلايا الخلوية المشتقة من البويضات الضخمة لنخاع العظم تحت تاثير الجلطات وتدخل الدورة الدموية2. وتعتبر انها نشطه ايضيه وقادره علي استشعار البيئة خارج الخلية عن طريق تنشيط السلاسل الترددية الإشارات داخل الخلايا التي تؤدي إلى انتشار الصفائح الدموية ، والتراكم ، والأرقاء تشكيل المكونات1،3. إلى جانب الأرقاء/تخثر والتئام الجروح4, الصفائح الدموية تلعب دورا هاما في الاستجاباتالتهابيه المضيف, تولد الاوعيه, و ميتاستاتيس3,5,6,7, 8-الآن
يتم تنقيه الصفائح الدموية من الدم لدراسة خصائصها البيوكيميائية والفسيولوجية ، والتي ينبغي ان تكون خاليه من مكونات الدم الأخرى. منذ خلايا الدم الحمراء (ار بي سي) وخلايا الدم البيضاء (الكريات الحمر) تحتوي علي أكثر بكثير من الحمض الريبي النيبالي والبروتينات من الصفائح الدموية9,10, وجود حتى عدد قليل من هذه الخلايا يمكن ان تتداخل مع التحليلات الناسخة والبروتينية من rna والبروتينات المشتقة من الصفائح الدموية. وجدنا ان الصفائح الدموية المنقية المنشطة مع الأجسام المضادة الربط ، مثل مكافحه GPIIb/IIIa (جون/ا) ومكافحه P-سيلكتين أكثر كفاءه من الصفائح الدموية الكاملة.
وبما ان الصفائح الدموية هشه ، فمن المهم معالجه العينات بأقل ما يمكن. إذا تم تنشيط الصفائح الدموية ، فانها تطلق محتوياتها الحبيبية وتتحلل في نهاية المطاف. لذلك ، للحفاظ علي خصائص الصفائح الدموية الوظيفية سليمه ، من المهم الحفاظ علي الصفيحات الدموية اثناء العزلة. وقد وصفت عده بروتوكولات عزل الصفائح الدموية من الإنسان, الكلبة, الفئران, والرئيسيات غير البشرية بطرق مختلفه1,10,11,12. بعض الطرق تتطلب خطوات متعددة مثل جمع البلازما الغنية بالصفائح الدموية عن طريق الطرد ، والترشيح عن طريق عمود الفصل ، والاختيار السلبي من الصفائح الدموية مع الأجسام المضادة الخاصة بي بي ار-ومكافحه حرائق الآبار مترافق إلى الخرز المغناطيسي ، وهلم جرا ، وهي تستغرق وقتا طويلا وقد تتحلل الصفائح الدموية ومحتوياتها.
ووصف فورد وزملاءه تنقيه الصفائح الدموية من الدم البشري باستخدام iohexol المتوسطة11. يستخدم هذا الأسلوب كميه مماثله من عينه الدم والمتوسطة اثناء تنقيه. وبما ان البشر ينتجون كميه أكبر من الدم ، فمن السهل نسبيا تنقيه الصفائح الدموية.
Iohexol هو التدرج الكثافة العالمية الخاملة المتوسطة القابلة للذوبان بحريه في الماء والمستخدمة في تجزئه الأحماض النووية والبروتينات والسكريات ، والبروتينات النونويه13،14. فقد منخفضه الصبغة وغير سامه ، مما يجعلها وسيله مثاليه لتنقيه الخلايا الحية السليمة11. وهو وسيله غير الجسيمات; ولذلك ، يمكن تحديد توزيع الخلايا في التدرج باستخدام مقياس الكريات الدموية ، وتدفق الخلوي ، أو مقياس الطيف الطيفي. وهو لا يتداخل مع معظم التفاعل الانزيمي أو الكيميائي للخلايا أو الشظايا الخلوية بعد التخفيف.
الفاره بمثابه نموذج الحيوانية الهامه للعديد من الامراض البشرية15،16،17،18. هناك عدد قليل من المقالات المنشورة التي تصف تنقيه الصفائح الدموية الماوس19,20. ومع ذلك ، ينتج الماوس حجما أصغر نسبيا من الدم ، مما يجعل من الصعب تنقيه الصفائح الدموية. إذا تم استخدام نفس الحجم الصغير من التدرج المتوسط وعينات الدم ، لا يمكن فصل طبقه الصفائح الدموية بشكل واضح من طبقه ار بي سي-الكريات البيضاء بعد طرد. في هذه المقالة ، وصفنا طريقه سريعة وبسيطه لتنقيه الصفائح الدموية الماوس مع ثلاثه اضعاف أكثر iohexol التدرج المتوسطة بالنسبة لحجم عينه الدم وانخفاض سرعه طرد. قمنا أيضا بتنشيط الصفائح الدموية المنقية مع الفحص والتحقيق في جودتها مع التدفق الخلوي والمجهر.

<table><tbody><tr><td>APC الفئران المضادة للفأر / البشرية CD62P (P-selectin)</td><td>Thermoscientific</td><td>17-0626-82</td><td>علامة تنشيط الصفائح</td></tr> الدموية <tr><td>أنبوب Eppendorf</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-222-166</td><td>أنبوب لجهاز الطرد المركزي</td></tr><tr><td>برنامج FACS DIVA</td><td>BD Biosciences</td><td>عنصر غير كتالوج</td><td>تحليل الصفائح الدموية وأنبوب FACS</td></tr><tr><td></td><td>الدم الكامل أنابيب 352008 العلمية</td><td></td><td>فيشر للتدفق مصل</td></tr><tr><td>الأبقار الجنينية (FBS)</td><td>Invitrogen</td><td>26140079</td><td>مكون لتلوين المخزن المؤقت</td></tr><tr><td>FITC الفئران المضادة للفأر CD41</td><td>BD Biosciences</td><td>553848</td><td>علامة الصفائح الدموية</td></tr><tr><td>مقياس التدفق الخلوي</td><td>BD Biosciences</td><td>عنصر غير كتالوج</td><td>تحليل الصفائح الدموية والدم الكامل</td></tr><tr><td>برنامج FlowJo</td><td>FlowJo، Inc.</td><td>عنصر غير كتالوج</td><td>تحليل الصفائح الدموية والدم الكامل</td></tr><tr><td>Gly-Pro-Arg-Pro (GPRP)</td> <td>EMD Millipore</td><td>03-34-0001</td><td>منع تكوين جلطة الصفائح</td></tr><tr><td>الدموية أنبوب الشعيرات الدموية الهيماتوكريت</td><td>فيشر Scientific</td><td>22-362566</td><td>أنبوب شعري لجمع الدم</td></tr><tr><td>Hemavet</td><td>Drew عنصر علمي</td><td>غير كتالوج</td><td>محلل خلايا الدم</td></tr> مقياس <tr><td>الدم</td><td>Hausser غرفة عد الخلايا العلمية</td><td>3100</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>1001936040</td><td>تستخدم لتخدير</td></tr><tr><td>مجهر الفأر (Olympus CKX41)</td><td>عنصر أوليمبوس</td><td>غير كتالوج</td><td>مراقبة الخلايا وعدها</td></tr><tr><td>Nycodenz (Histodenz)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>D2158</td><td>التدرج المتوسط</td></tr><tr><td>PE الفئران المضادة للفأر CD45</td><td>BD Biosciences</td><td>561087</td><td>علامة WBC</td></tr><tr><td>PE-Cy7 الفئران المضادة للفأر TER 119</td><td>BD Biosciences</td><td>557853</td><td>علامة RBC</td></tr><tr><td>نصائح Pipet 200 & micro ؛ L ، واسع التجويف</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21-236-1A</td><td>نقل عينات الدم والصفائح</td></tr> الدموية نصائح <tr><td>ماصة 1000 & مايكرو ؛ L ، واسع التجويف</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21-236-2C</td><td>نقل عينات الدم والصفائح</td></tr><tr><td>الدموية محلول ملحي فوسفات (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14040-117</td><td>عازلة للغسيل والتخفيف</td></tr><tr><td>كلوريد الصوديوم</td><td>سيجما ألدريتش</td><td>S7653</td><td>محلول ملحي فسيولوجي</td></tr><tr><td>سترات الصوديوم</td><td>فيشر ساينتفيك</td><td>02-688-26</td><td>مضاد للتخثر</td></tr><tr><td>تلطيخ عازلة</td> داخلية <td></td><td>غير كتالوج الغسيل</td><td>والتخفيف عازلة</td></tr><tr><td>Steile المياه</td><td>الداخلية</td><td>غير كتالوج المذيبات</td><td></td></tr><tr><td>سطح الطاولة الطرد المركزي</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75253839 / 433607</td><td>دلو متأرجح الدوار الطرد المركزي</td></tr><tr><td>Thrombin</td><td>Enzyme Research Laboratoty</td><td>HT 1002a</td><td>ناهض تنشيط الصفائح</td></tr><tr><td>الدموية Tricine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0377</td><td>Buffer ل Nycodenz medium</td></tr></tbody></table>

تنقيه الصفائح الدموية من الدم الفار

Purification of Platelets from Mouse Blood

يتم تنقيه الصفائح الدموية من الدم كله لدراسة خصائصها الوظيفية ، والتي ينبغي ان تكون خاليه من خلايا الدم الحمراء (ار بي سي) ، وخلايا الدم البيضاء (مكافحه الحرائق) ، وبروتينات البلازما. ونحن وصف هنا تنقيه الصفائح الدموية من الدم الفار باستخدام ثلاثه اضعاف أكثر iohexol التدرج المتوسط نسبه إلى حجم عينه الدم وطرد في دوار دلو يتارجح في 400 x g لمده 20 دقيقه في 20 ° c. وكان الانتعاش/الغلة من الصفائح الدموية المنقية 18.2-38.5 ٪ ، والصفائح الدموية المنقية كانت في حاله راحة ، والتي لم تحتوي علي اي عدد كبير من ار بي سي ومكافحه الحرائق. وأظهرت الصفائح الدموية المنقية المعالجة مع القدرة علي التنشيط بنسبه 93% ، مما يشير إلى جدواها. وأكدنا ان الصفائح الدموية المنقية نقيه بما فيه الكفاية باستخدام تدفق الخلوي والتقييم المجهري. يمكن استخدام هذه الصفائح الدموية للتعبير عن الجينات ، والتنشيط ، والإفراج عن الحبيبية ، والتجميع ، واختبارات التصاق. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتنقيه الصفائح الدموية من الدم من الأنواع الأخرى ، وكذلك.

يتم وصف ملخص تنقيه الصفائح الدموية في رسم تخطيطي للتدفق (الشكل 1). وتشمل الخطوات جمع الدم من الماوس باستخدام الرجعية المدارية النزيف في وجود مضاد للتخثر ، أضافه عينه من الدم علي التدرج iohexol ، طرد في دوار دلو يتارجح في 400 x g لمده 20 دقيقه في 20 درجه مئوية. تم تقييم جوده الصفائح الدموية المنقية مع المجهر والتدفق الخلوي بعد تلطيخ مع الأجسام المضادة للكشف عن اي تلوث الخلايا والصفائح الدموية المنشطة.
شكلت الانحدار iohexol المتوسطة وعينه الدم طبقتين منفصلة...

هنا ، تم جمع دم الفار في وجود مضاد للتخثر. تم تنقيه الصفائح الدموية من قبل التدرج iohexol المتوسطة باستخدام طرد السرعة المنخفضة. الصفائح الدموية تم تفعيلها مع الفحص للتحقيق إذا كانت قابله للحياة تم تحليل نوعيه الصفائح الدموية المنقية من خلال تدفق الخلوي والمجهر.

Platelets are purified from whole blood to study their functional properties, which should be free from red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), ...

الصفائح الدموية يجب أن تكون خالية من خلايا الدم والبروتينات عند دراسة خصائصها الكيميائية الحيوية والفسيولوجية. لذلك، قمنا بتطوير بروتوكول لتنقية الصفائح الدموية من دم الماوس. يمكن لهذه التقنية تنقية الصفائح الدموية باستخدام iohexol التدرج المتوسطة والسرعة المنخفضة الطرد المركزي، مما أدى إلى فصل واضح من الصفائح الدموية من مكونات الدم الأخرى.لتنقية الصفائح الدموية، استخدم طرف ماصات واسع الآبار لطبقة 200 ميكرولترات من الدم الكامل الطازج الذي تم حصاده ببطء على جانب أنبوب 1.5 ملليلتر على 600 ميكرولترات من المتوسط التدرج iohexol دون خلط. بعد الطرد المركزي في الدوار دلو يتأرجح لعزل الصفائح الدموية، واستخدام طرف جديد الماصات واسعة تتحمل لجمع معظم طبقة غنية بالصفائح الدموية وجزء صغير من طبقة الصفائح الدموية الفقيرة دون التعرق خلية الدم البيضاء أو طبقة خلايا الدم الحمراء. إضافة عينة الصفائح الدموية إلى أنبوب جديد، وإضافة ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني إلى الصفائح الدموية.اخلطي الصفائح الدموية عن طريق الانعكاس قبل إجراء طرد مركزي آخر. ثم resuspend بيليه في 200 microliters من برنامج تلفزيوني مع الأنابيب خفيفة. لتنشيط الصفائح الدموية، نقل واحد إلى مرتين 10 إلى الصفائح الدموية الستة إلى أنبوب جديد يحتوي على 100 ميكرولترات من عازلة تلطيخ.إضافة واحد إلى اثنين من مرات 10 إلى الصفائح الدموية الستة إلى أنبوب مختلف يحتوي على 100 ميكرولترات من البقع العازلة تكملها 0.4 ملم ببتيد GPRP. إضافة ثرومبين إلى الأنبوب مع الببتيد GPRP لتنشيط الصفائح الدموية، وإضافة كوكتيل الأجسام المضادة من الفائدة لكلا الأنابيب. كتحكم إيجابي، إضافة ميكرولتر واحد من الدم كله في ما يصل إلى 100 ميكرولترات من عازلة تلطيخ في أنبوب يحتوي على 0.4 ملليمولار GPRP ببتيد، وإضافة ثرومبين لتنشيط هذه الصفائح الدموية.كتحكم سلبي، إضافة ميكرولتر واحد من الدم كله في ما يصل إلى 100 ميكرولترات من عازلة تلطيخ. ثم وصمة عار كل من أنابيب التحكم مع كوكتيل الأجسام المضادة. بعد 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام، وغسل العينات مع ملليلتر واحد من عازلة تلطيخ جديدة لكل أنبوب.Resuspend الكريات في 300 ميكرولترات من عازلة تلطيخ جديدة. ثم نقل عينات الخلية إلى تدفق الفردية أنابيب تحليل القياس الخلوي المحمية من الضوء. لتحليل الصفائح الدموية بواسطة قياس تدفق السيتومات، قم بإنشاء تجربة جديدة، وإنشاء مبعثر لوغاريتمي للأمام مقابل قطع نقاط التشتت الجانبية اللوغاريتمية.بعد ضبط الفولتية حسب الضرورة، سجل الخلايا ذات لون واحد الملون لعناصر التحكم في التعويض. الآن تشغيل عينة التحكم الإيجابية للحصول على ما يكفي من الخلايا لضبط التعويض والبوابات. ثم الحصول على وتسجيل 100،000 الأحداث لكل عينة الدم كله، وتحليل تدفق البيانات cytometry باستخدام المؤامرات المناسبة والبوابات.إذا تم إضافة الدم إلى المتوسط ببطء، فإن المتوسط التدرج iohexol وعينة الدم تشكل طبقتين منفصلتين في الأنبوب. بعد الطرد المركزي، أعلى، طبقة القش الملونة يحتوي على البلازما ولكن لا خلايا الدم سليمة. والثانية، بيضاء، طبقة غنية بالصفائح الدموية يحتوي على غالبية الصفائح الدموية.أما الطبقة الثالثة الشفافة فهي طبقة الصفيحات الفقيرة وهي فوق خلايا الدم الحمراء مباشرة وبيضاء خلية الدم. الدم كله معارض مجموعات متميزة من خلايا الدم الحمراء، وخلايا الدم البيضاء، والصفائح الدموية على مبعثر لوغاريتمي إلى الأمام مقابل الجانب مؤامرة نقطة مبعثر. ومع ذلك، تظهر الصفائح الدموية النقية مجموعة سكانية متميزة مع أعداد لا تذكر من خلايا الدم الحمراء أو البيضاء.تحتوي عينات الدم الكامل على خلايا الدم الحمراء الإيجابية Ter119 و CD45-positive خلايا الدم البيضاء التي تكاد تكون غائبة في عينات الصفائح الدموية النقية. الصفائح المنقية غير المعالجة تعبر عن أي علامات تنشيط تؤكد حالة الراحة الخاصة بها تقريبًا ، في حين أن الصفائح الدموية المعالجة بالخثارة النقية عادة ما توضح تعبير P-selectin بنسبة 71٪. التقييم المجهري لعينات الصفائح الدموية النقية غير المعالجة يكشف عن عدم وجود تراكم الصفائح الدموية.بعد التنشيط مع ثرومبين، ومع ذلك، فإن الصفائح الدموية تظهر تجميعا قويا، مما يؤكد المزيد من قدرتها على البقاء بعد تنقية كما هو مبين. طبقة عينة الدم بعناية على المتوسط iohexol، وعند جمع الصفائح الدموية، تأكد من الطامح بعناية لعدم جمع خلايا الدم الحمراء وطبقات خلايا الدم البيضاء لتنقية الصفائح الدموية الناجحة. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتنقية الصفائح الدموية من الأنواع الأخرى كذلك.الصفائح الدموية النقية يمكن استخدامها للتعبير الجيني، والتنشيط، والتجميع، وإطلاق الحبيبات، ودراسات التصاق.

purification-of-platelets-from-mouse-blood

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يوضح هذا الفيديو تقنية لتمايز الخلايا الضخمة وتكوين الصفائح الدموية. تتمايز الخلايا الجذعية السلفية المكونة للدم - المعزولة من دم الحبل السري البشري - إلى خلايا ضخمة ناضجة في وجود الثرومبوبويتين. تنتج الخلايا الضخمة الناضجة امتدادات سيتوبلازمية تسمى البروبلايت ، والتي تؤدي إلى ظهور الصفائح الدموية الفردية.

طريقة في المختبر لتمايز الخلايا الضخمة وتكوين الصفائح الدموية

في هذا الفيديو ، نصف بروتوكولا لتنقية الصفائح الدموية من دم الفئران الكامل وتنشيطها اللاحق باستخدام الثرومبين ناهض الصفائح الدموية. عند تحليلها باستخدام قياس التدفق الخلوي ، يتم تمييز الصفائح الدموية المنقاة بناء على التعبير عن علامة سطح الخلية CD41 ، في حين أن الصفائح الدموية المنشطة المنقاة تشارك في التعبير عن كل من علامات السطح CD41 و CD62P.

تنقية وتنشيط الصفائح الدموية من دم الفئران الكامل

في هذا الفيديو ، نوضح عزل العدلات عالية الكثافة السامة للخلايا والعدلات منخفضة الكثافة من دم الفأر الحامل للورم عن طريق الطرد المركزي المتقطع للتدرج للسكروز.

عزل العدلات السامة للخلايا من دم الفأر الحامل للورم

الكريات البيض في الدم والصفائح الدموية ويمكن أن تستخدم كعلامة للصحة الطاقة البيولوجية الشاملة للفرد وذلك لديها القدرة على رصد العمليات المرضية وتأثير العلاجات. نحن هنا تصف طريقة لعزل وقياس وظيفة الميتوكوندريا وانفجار التأكسدي في هذه الخلايا.

الطاقة الحيوية والأكسدة انفجار: بروتوكولات لعزل وتقييم الكريات البيضاء والصفائح الدموية البشرية

يمكن الحصول على جمهرة نقية جداً من ميجاكاريوسيتيس من الحبل CD34 المستمدة من الدم+ الخلايا. أسلوب ل CD34+ التمايز العزلة و megakaryocyte خلية يرد هنا.

Megakaryocyte التمايز وتكوين الصفائح الدموية من الإنسان الحبل CD34 المستمدة من الدم الخلايا+

الكريات البيضاء شوق تتفاعل مع خلايا الأوعية الدموية والصفائح الدموية بعد إصابة الجدار السفينة أو أثناء التهاب. وهنا يصف لنا تحليل القائم على التدفق الصفحي مباشرة لتوصيف الآليات الجزيئية التي تكمن وراء التفاعلات بين الكريات البيضاء وشركائها الخلوية.

القائم على التدفق الصفحي فحوصات للتحقيق في تجنيد الكريات البيض على خلايا الأوعية الدموية مثقف والصفائح الدموية ملتصقة

هنا هو بروتوكول لإلحاق CD47 الببتيد (pepCD47) إلى الدعامات المعدنية باستخدام الكيمياء polybisphosphonate. وظيفية من الدعامات المعدنية باستخدام pepCD47 يمنع المرفق وتفعيل الخلايا الالتهابية وبالتالي تحسين التوافق الحيوي.

التخفيف من مرفق الخلايا المنقولة بالدم إلى يزرع المعادن من خلال CD47-المشتقة الببتيد تجميد

تصف هذه الطريقة تنقية التدفق الخلوي ل MEP و MKp من عظام الفخذ والساق وعظام الحوض.

عزل السلف ميغاكاريوسيت الماوس

يصف هذا البروتوكول بالتفصيل جميع الخطوات التي ينطوي عليها الحصول على السلف المشتق من اللوكوفلتر CD34+ hematopoietic وتمايزها في المختبر ونضجها في الخلايا الضخمة الحاملة للصفيحات التي تكون قادرة على إطلاق الصفائح الدموية في وسط الثقافة. هذا الإجراء مفيد للتحليل المتعمق للآليات الخلوية والجزيئية التي تتحكم في الخلايا الضخمة.

Leukodepletion مرشحات المشتقة CD34 + الخلايا كمصدر الخلية لدراسة التمايز Megakaryocyte وتشكيل الصفائح الدموية

تم ربط تكوين الصفائح الدموية المخثرة بزيادة خطر تجلط الدم. يتم تقديم بروتوكول دقيق لعزل الصفائح الدموية المغسولة عن دم الإنسان ، يهدف إلى تحديد التعرض للفوسفاتيديل سيرين وإطلاق الحويصلات الدقيقة ، وهي سمات مميزة للصفائح الدموية المخثرة.

توصيف الصفائح الدموية المخثرة عن طريق قياس التعرض للفوسفاتيديل سيرين وإطلاق الحويصلات الدقيقة من الصفائح الدموية البشرية المنقاة

يعتبر استقلاب الصفائح الدموية ذا أهمية ، لا سيما فيما يتعلق بدور فرط الصفائح الدموية ونقص النشاط في النزيف واضطرابات التخثر. يعد عزل الصفائح الدموية من البلازما ضروريا لبعض فحوصات التمثيل الغذائي. معروضة هنا هي طريقة لعزل المستقلبات داخل الخلايا من الصفائح الدموية المغسولة.

تحضير الصفائح الدموية البشرية المغسولة لدراسات التدفق الأيضي الكمي

تعلم تنقية الصفائح الدموية من دم الفئران باستخدام تقنية الطرد المركزي على تدرج iohexol. تتيح هذه الطريقة دراسة وظائف الصفائح وتفعيلها باستخدام التدفق الخلوي والمجهر.

تنقيه الصفائح الدموية من الدم الفار

استكشف المزيد من الفيديوهات