تحليل مشية منخفضة التكلفة للنمط الفينومابي لنماذج الماوس من الأمراض العصبية العضلية

تحليل البصمة هو بديل منخفض التكلفة لرقمنة برامج تحليل المشي للباحثين تحديد تشوهات الحركة في الفئران. بسبب سرعته وبساطته وإمكاناته الطولية، هذه الطريقة مثالية للذهون السلوكي لنماذج الماوس بما في ذلك نماذج من الأمراض العصبية العصبية، والأمراض العصبية العضلية أو السكتة الدماغية. إثبات الإجراء سيكون فرجينيا فيرتمان، فني أبحاث من مختبري.

قبل بدء التجربة ، تتأقلم الفئران التي كانت مستيقظة تمامًا وتنبيه لمدة خمس دقائق على الأقل إلى غرفة الفحص لمدة 30 دقيقة. ضع النفق على شريط من الورق أوسع قليلاً وأطول من طول وعرض النفق. وضع علامة على الورق باستخدام معرف الماوس وتاريخ الاختبار.

إضافة بذور عباد الشمس إلى غرفة الهدف للتحفيز حسب الضرورة وscruff بحزم الماوس الأول ليتم اختبارها. باستخدام ما يقرب من 0.5 سم قطرها نصائح فرشاة مدبب، طلاء الجانب السفلي بأكمله من جميع أصابع قدم ومركز كل forepaw مع لون واحد الطلاء المياه غير قابلة للغسل على أساس المياه. معطف الكفوف الخلفية مع لون الطلاء غير تكسيني غير قابل للغسل المياه على أساس بطريقة مماثلة.

استخدم قطعة قماش رطبة نظيفة لإزالة أي طلاء يحصل عليه الماوس على أجزاء أخرى من جسمه لمنع اللطخات التي قد تتداخل مع جمع البيانات. ثم ضع الماوس في بداية النفق. السماح للماوس على المشي على طول الطريق إلى غرفة الهدف قبل استرداد الحيوان لتنظيف قدميه بلطف مع قطعة قماش مبللة بالماء.

ثم العودة إلى قفص الماوس المنزل ومسح أسفل منطقة الاختبار ونفق مع مطهر قبل اختبار الحيوان المقبل. للحصول على دقة التسجيل، اسمح لبصمات الأقدام بالجفاف تمامًا قبل اختيار الخطوات التي يتم تباعدها باستمرار مع آثار أقدام واضحة غير ملطخة. لتوليد بيانات تسجيل كافية، يجب أن يكون هناك خطوتين متتاليتين على الأقل من كل قدم.

لا تشمل آثار أقدام الأولى والأخيرة على ورقة لأنها من غير المرجح أن تمثل مشية عادية لأن الماوس كان يغير سرعة المشي. لتحديد طول خطوة كمسافة بين اثنين من آثار الأقدام المتتالية التي تم إنشاؤها بواسطة نفس القدم، استخدم قلم رصاص لرسم دائرة 2-4 ملليمتر حول منطقة القدم الأمامية من كل من آثار أقدام forelimb في خطوة واحدة واستخدام مسطرة لرسم خط بين الدوائر. تسجيل المسافة بين اثنين من يطبع من منتصف كل دائرة كما في الـ 5 أو اليسار واحد أو في الـ 1 كما هو مناسب وكرر القياس لكل من الخطوات التي يمكن تسجيلها.

ثم متوسط كل من الفردية سجلت مسافات خطوة لكل طرف متوسط درجات الفردية داخل مجموعة معا كما هو مناسب تجريبيا. لتحديد عرض خطوة كمسافة بين الأمامية اليسرى والأيمانية أو hindlimbs، رسم وقياس خط من منطقة الأمامية دائرة من hindlimb واحد يتقاطع عموديا مع خط لطول خطوة على hindlimb contralateral. كرر هذا القياس لكافة مطبوعات hindlimb التي يمكن أن يسجل ومتوسط القياسات.

لتحديد انتشار إصبع القدم كمسافة بين أصابع القدم الأولى والأخيرة على البصمة الخلفية أو الزخرفة، استخدم الفرجير لقياس المسافة بين طرف أول بصمة إصبع القدم وطرف آخر بصمة إصبع القدم. ثم كرر القياس لجميع مطبوعات hindlimb التي يمكن أن يسجل ومتوسط القياسات. مع عدد كاف من الحيوانات، وهذا الإجراء قادر على الكشف عن الاختلافات المشي بين الماوس في نفس السلالة مع مرور الوقت.

على سبيل المثال، هنا تظهر آثار تمثيلية لصور البصمة التي تم جمعها باستخدام نموذج ماوس ضمور العضلات الشوكي والبلغاري المرتبط بـ x، وهو اضطراب عصبي يؤثر على الخلايا العصبية الحركية السفلية والعضلات الهيكلية. تحليل مشية من قبل أعراض وما بعد أعراض معدلة وراثيا والقمامة ماتي السيطرة على الفئران الذكور يكشف أنه قبل ظهور المرض، الفئران المعدلة وراثيا عرض طول خطوة مماثلة، عرض خطوة وانتشار القدمين بالمقارنة مع الضوابط غير المعدلة وراثيا رفيقة القمامة الخاصة بهم. بعد ظهور المرض ومع ذلك، فإن الحيوانات المعدلة وراثيا عرض أطوال خطوة أقصر بكثير.

وكشف تحليل طولي مماثل لا توجد اختلافات في عرض خطوة في أي من العمر اختبارها. فئران ما بعد الأعراض المعدلة وراثيا لديها أيضا أضيق بكثير انتشار قدم الخلفية من العمر مطابقة ضوابط رفيقة القمامة. تطبيق سليم من الطلاء على الكفوف سوف تسفر عن أفضل النتائج.

تذكر أنه ينبغي تسجيل الخطوات التي يتم فصلها باستمرار مع آثار الأقدام غير الملطخة الواضحة. هذه التقنية حساسة بما يكفي للكشف عن التغييرات الطفيفة في خطوة. ونظرا لنهجها غير الغازية، فإنه يسمح اختبار المجموعات عبر عرضها الظاهري مدى الحياة والتدخلات العلاجية.