نموذج الإصابة بالتبريد لدراسة احتشاء عضلة القلب في الماوس

هذه الطريقة يمكن الاعتماد عليها لدراسة توليد احتشاء عضلة القلب ومنصة ممتازة لاستخدامها في التحقيق في استرداد القلب بعد، على سبيل المثال، زرع الخلايا الجذعية. الميزة الرئيسية لهذا الإجراء هو أنه يمكن استخدامه لتوليد أحجام موحدة في المزارع بطريقة سريعة وسهلة، واستنساخ. يمكن اختبار التدخلات التجريبية الجديدة، مثل الأدوية، أو الاستراتيجيات القائمة على الأنسجة، في هذا النموذج.

واختبار بنجاح أن الخيارات يمكن تأكيدها في نماذج الحيوانات الكبيرة. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لاعكاس الألم في تخدير 27 غرام ، 14 أسبوع فأرة قديمة ، استخدم أداة تشذيب الشعر لإزالة فراء الصدر والرقبة من الحيوان ووضع الفأر في وضعية سوبين على وسادة ساخنة. الشريط الخلفي و forelimbs في موقف انتشار النسر واستخدام التتابع povidone اليود و 80 ٪ من الإيثانول الدعك لتطهير الجلد المكشوفة.

إجراء شق الجلد في منتصف الخط من الثلث السفلي من القص إلى الذقن، واستخدام ملقط منحنية لفصل العضلات حول الرقبة بعناية لفضح القصبة الهوائية. استخدام مقص صغير لأداء القصبة الهوائية بين حلقات الغضروف الثاني والثالث. وتعيين جهاز التنفس الصناعي على تردد التهوية من 110 في الدقيقة مع حجم المد والجزر من 0.5 ملليلتر.

ثم، إدراج البلاستيك، 20 القنب قياس متصلة بجهاز التنفس الصناعي في القصبة الهوائية. بعد ذلك، استخدم الكيوتي لفصل عضلة الصدرية اليمنى عن أصلها القصي بين الأضلاع الثالثة والسابعة. واستخدم مقص ربيعي جانبي الزاوية لقطع الضلع الرابع إلى ستة أضلاع أقرب ما يكون إلى القص.

تشريح النسيج الضام الكامن للحصول على رؤية واضحة في تجويف الصدر، الكي الشريان الثديي لوقف النزيف حسب الضرورة. إدراج مصغرة الذهب بقعة مُناقع لنشر الأضلاع والحفاظ على تجويف الصدر مفتوحة. واستخدام ملقط حادة لفتح الم pericardium لفضح القلب.

استخدم قضيبًا حادًا لرفع القلب من تجويف الصدر وتقليل توتر المناورة لتقليل فتحة الصدر والحفاظ على القلب من السقوط مرة أخرى في تجويف البطن. قبل تبريد بروتروب بارد قطره ثلاثة ملليمترات لمدة 10 ثوانٍ، وتطبيق البروبي على جدار البطين الأيسر الداخلي لمدة 10 ثوانٍ لتوليد بطيني أيسر، و cryoinjury. فصل cryoprobe من الجدار البطيني الأيسر مع مياه الري المالحة درجة حرارة الغرفة وإعادة reenlarge الصدر فتح مع الدارف.

استخدم قضيب لتعود بلطف القلب إلى تجويف الصدر وإزالة الداخر. استخدم خياطة 6-0 لتوصيل القص مع عقدة واحدة. واستخدم خياطة 6-0 لإغلاق تجويف الصدر.

استخدام حقنة 10 ملليلتر لإخلاء أي هواء المتبقية من الصدر قبل ربط عقدة وتكييف الجلد في حافة السد قبل استخدام خياطة 5-0 تشغيل لإغلاق الأنسجة إلى نقطة فتح القصبة الهوائية. بعد الحد من ايزوفلوران ومكاسب الحيوان التنفس العفوي إزالة القسطرة القصبة الهوائية وإغلاق شق القصبة الهوائية مع واحد 8-0 خياطه. استبدل عضلات الرقبة البطنية إلى وضعها التشريحي فوق القصبة الهوائية وأكمل خياطة الجلد.

ثم، إضافة metamizole إلى مياه الشرب لمسكنات الألم لمدة ثلاثة أيام مع رصد الحيوانات اليومية لمدة ثمانية أسابيع. في القلب المبردة يكشف تخطيط صدى القلب انخفاض كبير في كسر القذف وتغير المنطقة الكسرية ، مع ضعف وظيفي لوحظ من اليوم السابع بعد الجراحة حتى نقطة النهاية التجريبية في 56 يومًا. كما تم تقييمها من خلال تحليل حلقة حجم الضغط، cryoinfraction يؤدي إلى ضعف وظيفة البطين الأيسر الذي ينعكس على انخفاض في حجم السكتة الدماغية، والعمل السكتة الدماغية، والإخراج القلبي، ومدى ضبط الطاقة القصوى قبل الحمل.

السابق vivo رسم الخرائط البصرية للفلورسنت الجهد الحساسة قلوب المُسَجوغة يُظهر انسداد التوصيل الكهربائي على حدود الإصابة، مما يشير إلى فك كهربائي محلي. التلطيخ النسيجي مع ثلاثي اللون ماسون يكشف تشكيل الأنسجة الليفية عبر الطبيعة في موقع الإصابة. يمكن حساب حجم infarct عن طريق قياس منطقة ندبة هبة أو طول ندبة خط الوسط.

بالإضافة إلى ذلك، التلطيخ المناعي ضد علامة cardiomyocyte والكولاجين-I تأكيد وجود إعادة عرض ليفي وفقدان عضلة القلب في موقع الإصابة. من المهم الحفاظ على نفس مدة الاتصال للمعالجة بالتبريد لكل حيث أن المدة المختلفة قد تؤدي إلى أحجام غير متغايرة. مرة واحدة يتقن هذه التقنية يمكن أن يؤديها في 20 دقيقة إذا تم تنفيذها بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو يجب أن يكون لديك فهم جيد كيفية تنفيذ نموذج cryoinjury. حظا سعيدا مع تجاربك.