نموذج لإصابة الرئة الحادة المحدودة ذاتياً عن طريق الغرس من جانب واحد داخل الشعب الهوائية

الطريقة الانتقائية داخل الشعب الهوائية كبيرة لأنها توفر للمحققين نموذجًا قابلًا للاستنساخ وغير هاش لدراسة إصابات الرئة الحادة ، وهو سبب رئيسي لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة في البشر. ميزة تقنية انتقائية داخل الشعب الهوائية هو توطين الاستجابة الالتهابية للرئة اليسرى التي تقدم الرئة اليمنى كتحكم غير مصاب وتقليل الضائقة الحيوانية. إثبات هذا الإجراء سيكون الكسندر تافاريس، وهو فني وطالب ما قبل التخرج في مختبرنا.

لإعداد 0.1 حمض الهيدروكلوريك العادي، إضافة 11 ملليلتر من الماء المقطر مزدوجة إلى زجاجة العنبر، تليها الإضافة البطيئة من ملليلتر واحد من 37٪ 12 حمض عادي. بعد ذلك، إضافة ببطء أربعة ملليلتر من مخزون واحد حمض العمل العادي في 35 ملليلتر مزدوجة الماء المقطر في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. ثم استخدم مسبارًا إلكترونيًا للربيع الأسي لقياس الأسى للرصيد 0.1 من محلول الأسهم العادي ، مع المعايرة على رقم هيدروكسيد الصوديوم أو محلول الأسهم الحمضية عند الحاجة إلى حجم نهائي قدره 40 ملليلتر.

قبل البدء في الإجراء ، فلتر من ملليلتر إلى 2 من محلول الحمض من خلال فلتر 0.22 ميكرولتر معقمة في أنبوب ميكروسنتروجي معقم وتأكيد عدم الاستجابة لاعكاس الألم في الماوس المُجَنَّق. باستخدام المقصات الكهربائية في السكتات الدماغية نزولا بطيئة بلطف حلق المنطقة الجراحية على السطح البطني للماوس تحت الذقن في منطقة عنق الرحم من الحلق. إزالة أي الشعر فضفاض، ومسحة الجلد المكشوف مع ثلاثة حل متتالية 10٪povidone-اليود و 70٪ مسحات الكحول isopropyl.

عندما تم تمهيد الجلد، ضع الماوس في موقف الوثنيين على لوحة جراحية نظيفة، وتغطية الحيوان مع ستائر الجراحية العقيمة. جعل فتحة طولية 0.5 سنتيمتر في الجلد فوق القصبة الهوائية والغدد اللعابية، واستخدام ملقط مسننة قليلاً لسحب الجلد بعناية. فصل بلطف الغدد اللعابية لفضح عضلات القصبة الهوائية واستخدام ملقط مسننة قليلاً لدفع بلطف بعيداً العضلات شبه التراتشي.

ندف بعيدا اللفافة المحيطة القصبة الهوائية حتى يتم عرض حلقات cartilaginous تماما من القصبة الهوائية، واستخدام ملقط مسننة منحنية تماما للعمل بعيدا النسيج الضام بين retrotrachea و retrofascia. الشريحة المنحنية تماما ملقط مسننة وراء القصبة الهوائية ورفع القصبة الهوائية. مرة واحدة غيض من ملقط وراء القصبة الهوائية، فهم قطعة 10 إلى 15 سنتيمترا من 4-0 خياطة الحرير مضفر مع نصائح من ملقط وسحب خياطة وراء القصبة الهوائية بحيث يكون هناك طول حتى على جانبي.

قد يتم تشغيل اللوحة الجراحية لتقريب المنطقة الجراحية من اليد المهيمنة للخطوات التالية. ثم سحب بلطف نهايات خياطة نحو الأمامي من الماوس، وعقد نهايات في مكان. لتكبيل القصبات الرئيسية اليسرى، وفضح إبرة قياس 24 من قبل 3/4 بوصة angiocatheter وإدراج الجانب شطبة إبرة تصل إلى المنطقة الداخلية من القصبة الهوائية بين حلقات القصبة الهوائية الأولى والثانية.

عندما يمكن تصور طرف إبرة داخل تجويف القصبة الهوائية، والإفراج عن خياطة وتقدم قنية على الإبرة في القصبة الهوائية الصيد نحو الجانب الخلفي الأيسر من الماوس. عندما واجهت المقاومة، سحب الإبرة. مرة واحدة في مكان كانولا، فهم بحزم منفذ الحقن لمنع القسطرة من التحول وتأمين طرف P-200 ميكرويبيت داخل الميناء.

ثم غرس 50 ميكرولترات من محلول حمض طبيعي 0.1 المصفاة في القسطرة، تليها وحدة تخزين متساوية من الهواء. تتطلب هذه الخطوة تلاعب دقيق بالقنية، في حين أن مجرى الهواء قد عرقل، وينبغي إكمالها بسرعة وسلاسة لاستعادة تدفق الهواء السليم وتقليل تلف مجرى الهواء. سحب بسرعة القسطرة وإمالة المجلس الجراحي في زاوية 60 درجة.

بعد 30 ثانية، وضع شقة المجلس الجراحية، وإزالة الغرز من وراء القصبة الهوائية. ثم استخدم خياطة حريرية مضفرة مغلفة بالشمع 4-0 لإغلاق شق الجلد مع غرزتين إلى ثلاث غرز. إصابة الرئة الحادة الناتجة عن غرس حمض داخل الشعب الهوائية ينطوي على الرئة اليسرى بأكملها.

في الواقع ، بعد إعطاء الوريد ايفانز صبغة زرقاء وثقب الرئة ، يتم الكشف عن الصبغة فقط داخل الرئة اليسرى. يتم زيادة القياس الكمي للصبغة البذخ في الرئة اليسرى بشكل كبير بالنسبة إلى تقطير انتقائي صوري. تتراكم العدلات الخلالية في الرئة اليسرى بعد 24 ساعة من تقطير الحمض على النقيض من الرئة اليمنى التي لوحظ فيها عدد قليل من العدلات الخلالية.

تكشف أنسجة الرئة عن إصابة الأنسجة والالتهاب في الجهاز والمستويات الخلوية مع التهاب نضح بعد 24 ساعة من الإصابة كما تتميز بإصابة الوذمة السنخية والإصابة العدلية داخل الرئة اليسرى. لاحظ أن عدم وجود إصابة كبيرة أو تدفق الكريات البيض في الرئة اليمنى السيطرة غير المصابة. 72 ساعة بعد الإصابة يتم تقليل الوذمة والتسلل الخلوي بشكل كبير تمثل مرحلة نضح حل.

كما تقييمها من قبل تدفق قياس الخلايا, يزيد العدلات السنخية في الرئة اليسرى 24 ساعة بعد الإصابة الأولية, وانخفاض كبير في 48 و 72 ساعة. من المهم تصور القسطرة في القصبة الهوائية قبل التقدم. زاوية القنية نحو القصبات الرئيسية اليسرى أثناء الإدراج واتبع غرس الحمض مع 50 ميكرولترات من الهواء.

يمكن إجراء تحليل سائل Bronchoalveolar ، وطب أنسجة الرئة ، وحرف الخلايا المناعية عن طريق استئصال الخلايا المتدفقة ، وتصوير الماوس الحي ، واختبار الوظائف الرئوية لتقييم الالتهاب والقرار. وقد سمح تطوير هذا النموذج الذاتي المحدود للإصابة الرئوية الحادة للباحثين بتقديم مساهمات كبيرة في مجال بيولوجيا القرار. تذكر أن حمض الهيدروكلوريك المركزة أمر خطير وأنه ينبغي التعامل معها في غطاء محرك السيارة الكيميائية ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة.