تقييم نضج البويضة البشرية وتطبيقها السريري

في الممارسة السريرية، العرفي أن نفترض أن كل بويضة عرض جسم قطبي جاهز للتخصيب. يكشف تصوير الحياة لنضج البويضة البشرية أن الجسم القطبي يصبح مرئيًا جيدًا قبل أن يتم تجميع مغزل metaphase II ثنائي القطب ، مما يخلق خطر حقن الحيوانات المنوية في وقت غير مناسب. يتيح المجهر الضوئي المستقطب تصورًا غير جراحي للمغزل الميوتيك في البويضات البشرية ، ويمكن استخدامه بأمان في IFV لتقييم نضج البويضة قبل حقن الحيوانات المنوية intracytoplasmic.

تحسين توقيت الحقن المجهري مهم بشكل خاص في سوء التكهن بدورات التلقيح الاصطناعي، مع وجود عدد قليل من البويضات المتاحة للتخصيب. هذا الإجراء السريري هو تقنية إضافية لعلاج التلقيح الاصطناعي القياسي ، ويجب أن يكون مقدمًا من قبل موظفين ذوي خبرة ، وفقًا للممارسات المختبرية الجيدة. 35 إلى 36 ساعة بعد حقن gonadotropin المشيمية الإنسان، وجمع مجمعات cumulus-بويضية استرداد في ثاني أكسيد الكربون مستقلة التعامل المتوسطة.

إكوليزيرات البويضات لمدة 10 إلى 15 دقيقة في حاضنة مستقلة عن ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية. يعرض البويضات لمحلول هيالورونيداسي عالي، مخفف في التعامل مع الوسيط. بعد 30 ثانية، استخدم ماصة 200 ميكرولتر لإزالة خلايا الكامولو-الهالة ميكانيكيا.

تقييم عدد وحالة النمو للبويضات المضحى وفقا لوجود أو عدم وجود نواة والجسم القطبي الأول. ضع مرحلة الفينول الجرثومية ، وبويضات المرحلة 1 و metaphase II في قطرات فردية من متوسط الثقافة المستقلة عن ثاني أكسيد الكربون ، مغطاة بالزيت المعدني. ثم، ضع البويضات عند 37 درجة مئوية، 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 6٪ من الأكسجين مع الرطوبة لمدة 3 إلى 4 ساعات.

لإعداد لوحات زراعة لزراعة الجنين، إضافة الحجم المناسب من الثقافة قبل التوازن الآبار المتوسطة إلى الفردية من لوحة ثقافة بالحجم المناسب. غطي القطرات بالزيت المعدني المُعدّل، وتسمّي الطبق بمعرّف فريد، وضعه في مُعدّل يعتمد على ثاني أكسيد الكربون لمدة 20 دقيقة على الأقل. لإعداد طبق ICSI، أضف 5 قطرات ميكروليتر من وسيط المناولة مسبقًا لكل بويضة عرض للجسم القطبي، وقطيرة إضافية واحدة لغسل الإبر إلى طبق بلاستيكي نظيف.

إضافة قطرات إضافية من حل PVP لشل حركة الحيوانات المنوية قبل حقن الحيوانات المنوية intracytoplasmic، وتراكب قطرات مع النفط المعدني قبل warmed. تأكد من تسمية الطبق. ثم ضع طبق حقن الحيوانات المنوية في حاضنة مستقلة عن ثاني أكسيد الكربون لمدة 20 دقيقة على الأقل.

في حين أن اللوحة هي خياطة، إضافة 5 قطرات ميكرولتر من معالجة ما قبل الدافئة المتوسطة لكل بويضة عرض الجسم القطبي إلى طبق ثقافة الزجاج القاع. تراكب جميع قطرات مع الزيوت المعدنية ساخنة مسبقا. تأكد من تسمية الطبق.

ثم ضع الطبق في حاضنة مستقلة عن ثاني أكسيد الكربون لمدة 20 دقيقة على الأقل. في حين أن اللوحات هي الإكويسيبرات، والتبديل على مرحلة ساخنة على المجهر المقلوب وتناسب عقد معقمة وإبر حقن الحيوانات المنوية في أصحاب الحقن الدقيق. جلب الإبر في التركيز، واختيار الهدف المناسب، مع الحرص على أن المكثف هو في موقف حقل مشرق.

أدخل فلتر التداخل الأخضر، ثم قم بتعيين شريط تمرير تحليل البلورات السائل إلى موضع العمل. تعيين مصراع الكاميرا إلى ما يقرب من 50٪ وضبط المستقطب الدائري لتقليل الضوضاء الخلفية. لإعداد الكمبيوتر لفحص المجهر الضوئي المستقطب، قم بتشغيل برنامج التصوير، وحدد الفيديو، مصدر الفيديو، و polarAIDE في قائمة الفيديو.

ثم، التبديل إلى بث الفيديو عن طريق الذهاب إلى صفحة الفيديو وحدد الرمز لتنشيط تحليل المغزل وزونا. لتحديد نضج كل بويضة، نقل جميع البويضات إلى قطرات فردية على طبق الزجاج القاع المعدة، ووضع الطبق كشف تحت المجهر المقلوب المعدة. جلب البويضة الأولى في التركيز، ومراقبة الكشف عن صورة بويضة birefringence، كما هو الكمبيوتر المجهزة وعرضها في الوقت الحقيقي على شاشة الكمبيوتر.

استخدام القابضة والحيوانات المنوية حقن الإبر لتحويل البويضة حتى الجسم القطبي هو في موقف 12 00 والتركيز على الجسم القطبي. إذا لم يكن bir المغزل مرئيًا بوضوح من النظرة الأولى في محيط PB ، فالمس قليلاً pellucida ولبرفق حول كل محور لضمان محاذاة الضوء المستقطب مع ألياف المغزل الصفيفة. بعد تحديد جميع البويضات الإيجابية المغزل, نقل البويضات إلى قطرات الفردية داخل طبق ICSI المعدة, وإخضاع البويضات لحقن الحيوانات المنوية intracytoplasmic وفقا للبروتوكولات القياسية.

إذا كان البويضات لا تظهر إشارة المغزل metaphase الثاني للكشف، ضع طبق المجهر الخفيف المستقطب في الحاضنة المستقلة عن ثاني أكسيد الكربون لمدة 2 إلى 3 ساعات. قبل إعادة التشكيل الفحص المجهري الضوئي المستقطب كما هو موضح ، بعد الحقن ، قم بنقل البويضات إلى لوحات زراعة الأجنة المعدة لثقافتها حتى يتم الوصول إلى مرحلة الكيسة الأرومية. الحرص على التأكد من أن يتم تنفيذ كل من micromanipulation من البويضة البشرية في بيئة التحكم، في 37 درجة، في درجة مئوية متوسطة الثقافة المثلى.

التصوير المغزل يسمح التمييز من البويضات ناضجة تماما القبض في المرحلة metaphase الثاني، من تلك التي تمر بمرحلة انتقالية النضج الهامة. في البويضات التي تأخرت تطورًا في الجسم القطبي في المختبر ، قد لا يعكس غياب إشارة المغزل metaphase II بالضرورة اضطرابًا خلويًا ، ولكنه قد يشير إلى تطور البويضة من البويضة I إلى مرحلة metaphase II. وجود المغزل الميوتيك هو علامة إيجابية على الكفاءة التنموية للبيض.

إن تأجيل الحقن المجهري يوفر البويضات المتأخرة بشكل إنمائي مع وقت إضافي لإكمال عملية النضج وتجميع مغزل metaphase II قبل الحقن. باستخدام هذا النهج، حتى البويضات غير الناضجة التي يتم التخلص منها بشكل روتيني يمكن استخدامها سريريا، ويؤدي إلى الحمل الناجح.