تكنولوجيا الخلية المغلفة لتسليم البيولوجيا إلى العين الماوس

هذه التقنية هي طريقة يمكن الاعتماد عليها لتقديم أي محتوى مثل الأدوية أو البروتينات أو الخلايا إلى مواقع محددة في الأنسجة أو الحيوانات. يمكنك تتبع التسليم وضبط الإفراج عن محتويات لتتناسب مع التجربة التي تريدها. ويمكن استخدامه لعلاج العديد من الأمراض من التئام الجروح إلى أمراض العين والقلب.

والميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي القدرة على تقديم الخلايا العلاجية باستخدام الكبسولات الدقيقة الجينات إلى المواقع المستهدفة دون التسبب في أي ردود فعل مناعية والحفاظ على استمرار تسليم علاجات جديدة سرية لفترة أطول من الزمن. تبدأ باستزراع خلايا شبكية العين الظهارية وفقا لاتجاهات المخطوطات. مرور الخلايا عندما تصل إلى 70 إلى 80٪ التقاء باستخدام إجراءات زراعة الأنسجة القياسية.

لتغليف الخلايا، خلط الصوديوم alginate مع المياه ديونيد لتركيز النهائي من 2٪ الوزن لحجم وتنقية الخليط عن طريق الترشيح مع 0.2 ميكرومتر معقم حقنة فلتر. Trypsinize، الطرد المركزي، وغسل الخلايا مع 10 ملليمتر HEPES محلول ملحي المخزنة. استخدم مقياس الدم لحساب الخلايا وضبط تركيز الخلايا النهائي إلى مليون لكل ملليلتر من محلول ألجينات.

قم بتحميل 300 ميكرولتر ألتقتبس من خليط ألجينات وخلايا في حقنة من ثلاثة ملليلتر وإرفاقها بمضخة حقنة. إعداد حمام التبلور وفقا لاتجاهات المخطوطة ووضعها في منبر عقيم 50 ملليلتر تحت طرف الحقنة في إبرة سبعة ملليمترات لحمام الرش مسافة. ضبط الجهد إلى ثمانية كيلوفولت ومعدل التدفق إلى 30 ملليمترا في الساعة لإنتاج microcapsules التي هي حوالي 150 ميكرومتر في الحجم.

توصيل مقطع الأرض الأسود إلى السلك النحاسي الذي هو في منتصف الطريق مغمورة في حمام الغيلينغ وربط مقطع من سلك الأنود الأحمر إلى الإبرة. يستغرق حوالي 30 دقيقة لإعداد الخلايا المغلفة من كل دفعة ملليلتر واحدة من خليط alginate وخلايا. عندما شكلت، وغسل microcapsules مع محلول الغسيل مرتين واحتضان لهم مع 10٪ FBS تكمل وسائل الاعلام DMEM في حاضنة مرطبة في 37 درجة مئوية و 5٪ CO2.

بعد حضانة لمدة 24 ساعة، قم بإعداد عينة 500 ميكرولتر من الكبسولات الدقيقة للتلوين عن طريق غسلها مرتين في محلول الغسيل. استخدام مجموعة من مواد فحص حية / الميت لطخة لهم لقابلية البقاء. لضمان أن الحجم الدقيق مناسب الحجم، وتمييع لهم في وسائل الإعلام خالية من المصل.

pirate بعناية لهم مع 2.5 حقنة هاملتون ميكروليتر. إخراج ببطء قطرات ميكرولتر واحد على شريحة المجهر وتحديد سلامة microcapsules باستخدام مجهر برايتفيلد تستقيم. في الماوس تخدير مناسب، وتطبيق مواد التشحيم العين للحفاظ على رطوبة العين واستخدام 26 قياس 3/8 بوصة إبرة حقنة مشطوفة لإنشاء ثقب العين الأولية فقط تحت limbus.

تأكد من الاقتراب من العين من اتجاه الأنف بزاوية 45 درجة مع الحفاظ على رأس مشط للأعلى لتجنب ثقب العدسة. بعد ذلك، تأكد من إدخال طرف الإبرة بأكملها في العين لتوليد ثقب الدليل، ولكن يجب الحرص على عدم السفر بعيدا جدا وثقب الشبكية الصدغية. بمجرد اكتمال هذا، تراجع ببطء الإبرة.

داخل micromanipulator، ضع 27 تلميح 27 حادة قياس 2.5 حقنة هاملتون ميكرولترر التي تم شغلها مع حل كبسولة وخط الإبرة مع ثقب دليل الأولية. عقد رأس الحيوان في وضع مستقر والمناورة عمدا الإبرة نحو العين. لضمان وضع إبرة صحيحة داخل الزجاجي، أدخل الحقنة حتى يمكن تصور طرف الإبرة خلف العدسة.

ثم حقن حل كبسولة ببطء على مدى 25 إلى 30 ثانية. وبمجرد الانتهاء، تراجع تدريجيا حقنة تلميح حادة من أجل تقليل الإصابة في العين. إذا لزم الأمر، قم بضبط حجم الكبسولة عن طريق ضبط معدل الجهد والتدفق وفقًا لاتجاهات المخطوطة.

تم تأكيد تغليف الخلايا في alginate مع التصوير برايتفيلد ومجايسة حية / DEAD أظهرت أن 90٪ من الخلايا كانت قابلة للحياة بعد التغليف. تم ضمان صلاحية الخلايا على المدى الطويل عن طريق حل الكبسولات في سترات الصوديوم وإعادة الطلاء. تم إجراء الحقن داخل الجسم تحت الفحص البصري الذي سمح للتصور من كبسولات في الزجاجي.

عند محاولة هذا الإجراء، لا تستخدم برنامج تلفزيوني لأي خطوات الغسيل لأن برنامج تلفزيوني يذوب شكلت الكبسولات الدقيقة alginate. بعد تطويره، يستخدم مختبرنا كنظام توصيل لعلاج أشكال قصور القلب وارتفاع ضغط الدم. وتعتبر هذه التقنية أداة واعدة لعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية والعصبية المختلفة في المستقبل.