البكتيريا الببتيد العرض لاختيار الانزيمات بيوتينيلاتينج رواية

يوفر هذا البروتوكول نظام عرض بكتيري فعال للغاية لعزل المتغيرات الجديدة من BirA التي تسمح بتنينيل حيوي محدد للبروتينات الأصلية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تختار متغيرات BirA باستخدام اختيار streptavidin عالي التقارب. وهذا يضمن إزالة المستنسخات غير النشطة، وبالتالي إنشاء عملية اختيار عالية الكفاءة.

لتبدأ، في محرر البلازميد، تصميم التمهيدي إلى الأمام لتشمل آخر 30 النيوكليوتيدات من تكملة عكسي من تسلسل الترميز الببتيد، وإضافة تسلسل النيوكليوتيدات ملزمة plasmid إلى نهايتها خمسة رئيس الوزراء. تصميم التمهيدي العكسي لتشمل أول 30 النيوكليوتيدات من الملحق العكسي لتسلسل ترميز الببتيد، وإضافة تسلسل النيوكليوتيدات ملزمة plasmid إلى نهايتها خمسة رئيس. ثم، لإعداد تفاعل PCR 20 ميكرولتر، إضافة الكواشف في أنبوب PCR رقيقة الجدران.