Name: عزل يمكن الاعتماد عليه من الاوعيه المجهرية للجهاز العصبي المركزي عبر خمس مجموعات فقاري (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: تعلم عزل الأوعية الدموية الدقيقة من الجهاز العصبي المركزي عبر خمس مجموعات فقارية مختلفة. تتيح هذه الطريقة المقارنة بين الأنواع الملساء والمجعدة للدماغ دون الحاجة إلى الطرد المركزي الفائق أو التفكيك الإنزيمي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم الدكتور كروز اورينجو من قبل جامعه كاليفورنيا ، ديفيس ، كليه الطب البيطري بدء الأموال.

<ol><li>Bundgaard, M., Abbott, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All+vertebrates+started+out+with+a+glial+blood-brain+barrier+4-500+million+years+ago%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">All vertebrates started out with a glial blood-brain barrier 4-500 million years ago.</a> Glia. 56, 699-708 (2008).</li>
<li>Daneman, R., Prat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7, a020412(2015).</li>
<li>Obermeier, B., Verma, A., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier.</a> Handbook of Clinical Neurology. 133, 39-59 (2016).</li>
<li>Kealy, J., Greene, C., Campbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+regulation+in+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier regulation in psychiatric disorders.</a> Neuroscience Letters. , (2018).</li>
<li>Sweeney, M. D., Kisler, K., Montagne, A., Toga, A. W., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+brain+vasculature+in+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of brain vasculature in neurodegenerative disorders.</a> Nature Neuroscience. 21, 1318-1331 (2018).</li>
<li>Sweeney, M. D., Zhao, Z., Montagne, A., Nelson, A. R., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-Brain+Barrier%3A+From+Physiology+to+Disease+and+Back%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Blood-Brain Barrier: From Physiology to Disease and Back.</a> Physiological Reviews. 99, 21-78 (2019).</li>
<li>Wilhelm, I., Nyul-Toth, A., Suciu, M., Hermenean, A., Krizbai, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Barriers%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of the blood-brain barrier.</a> Tissue Barriers. 4, e1143544(2016).</li>
<li>O'Brown, N. M., Pfau, S. J., Gu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+barriers%3A+a+comparative+look+at+the+blood-brain+barrier+across+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Bridging barriers: a comparative look at the blood-brain barrier across organisms.</a> Genes & Development. 32, 466-478 (2018).</li>
<li>Cruz-Orengo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR7+influences+leukocyte+entry+into+the+CNS+parenchyma+by+controlling+abluminal+CXCL12+abundance+during+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">CXCR7 influences leukocyte entry into the CNS parenchyma by controlling abluminal CXCL12 abundance during autoimmunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 208, 327-339 (2011).</li>
<li>Serres, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VCAM-1-targeted+magnetic+resonance+imaging+reveals+subclinical+disease+in+a+mouse+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">VCAM-1-targeted magnetic resonance imaging reveals subclinical disease in a mouse model of multiple sclerosis.</a> FASEB Journal. 25, 4415-4422 (2011).</li>
<li>Tietz, S., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+barriers%3A+Crosstalk+between+complex+tight+junctions+and+adherens+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Brain barriers: Crosstalk between complex tight junctions and adherens junctions.</a> Journal of Cell Biology. 209, 493-506 (2015).</li>
<li>Sohet, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LSR%2Fangulin-1+is+a+tricellular+tight+junction+protein+involved+in+blood-brain+barrier+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">LSR/angulin-1 is a tricellular tight junction protein involved in blood-brain barrier formation.</a> Journal of Cell Biology. 208, 703-711 (2015).</li>
<li>Cruz-Orengo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+sphingosine-1-phosphate+receptor+2+expression+underlies+female+CNS+autoimmunity+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Enhanced sphingosine-1-phosphate receptor 2 expression underlies female CNS autoimmunity susceptibility.</a> Journal of Clinical Investigation. 124, 2571-2584 (2014).</li>
<li>Dayton, J. R., Franke, M. C., Yuan, Y., Cruz-Orengo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Straightforward+method+for+singularized+and+region-specific+CNS+microvessels+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Straightforward method for singularized and region-specific CNS microvessels isolation.</a> Journal of Neuroscience Methods. 318, 17-33 (2019).</li>
<li>Smyth, L. C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+human+brain+pericytes+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Markers for human brain pericytes and smooth muscle cells.</a> Journal of Chemical Neuroanatomy. 92, 48-60 (2018).</li>
<li>Granberg, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+cortical+and+white+matter+neuroaxonal+pathology+in+early+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of cortical and white matter neuroaxonal pathology in early multiple sclerosis.</a> Brain. 140, 2912-2926 (2017).</li>
<li>Datta, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinflammation+and+its+relationship+to+changes+in+brain+volume+and+white+matter+lesions+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Neuroinflammation and its relationship to changes in brain volume and white matter lesions in multiple sclerosis.</a> Brain. 140, 2927-2938 (2017).</li>
<li>Tommasin, S., Gianni, C., De Giglio, L., Pantano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroimaging+Techniques+to+Assess+Inflammation+in+Multiple+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuroimaging Techniques to Assess Inflammation in Multiple Sclerosis.</a> Neuroscience. 403, 4-16 (2019).</li>
<li>Liebner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+morphology+of+the+blood-brain+barrier+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Functional morphology of the blood-brain barrier in health and disease.</a> Acta Neuropathologica. 135, 311-336 (2018).</li>
<li>Cornford, E., Hyman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+brain+endothelial+luminal+and+abluminal+transporters+with+immunogold+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Localization of brain endothelial luminal and abluminal transporters with immunogold electron microscopy.</a> NeuroRx. 2, 27-43 (2005).</li>
<li>Boulay, A. C., Saubamea, B., Decleves, X., Cohen-Salmon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Mouse+Brain+Vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Purification of Mouse Brain Vessels.</a> Journal of Visualized Experiments. , 53208(2015).</li>
<li>Paul, D., Cowan, A. E., Ge, S., Pachter, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+3D+analysis+of+Claudin-5+reveals+significant+endothelial+heterogeneity+among+CNS+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Novel 3D analysis of Claudin-5 reveals significant endothelial heterogeneity among CNS microvessels.</a> Microvascular Research. , (2012).</li>
<li>Munikoti, V. V., Hoang-Minh, L. B., Ormerod, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+digestion+improves+the+purity+of+harvested+cerebral+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Enzymatic digestion improves the purity of harvested cerebral microvessels.</a> Journal of Neuroscience Methods. 207, 80-85 (2012).</li>
<li>Yousif, S., Marie-Claire, C., Roux, F., Scherrmann, J. M., Decleves, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+drug+transporters+at+the+blood-brain+barrier+using+an+optimized+isolated+rat+brain+microvessel+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Expression of drug transporters at the blood-brain barrier using an optimized isolated rat brain microvessel strategy.</a> Brain Research. 1134, 1-11 (2007).</li>
<li>Bourassa, P., Tremblay, C., Schneider, J. A., Bennett, D. A., Calon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid+pathology+in+human+brain+microvessel+extracts+from+the+parietal+cortex%3A+relation+with+cerebral+amyloid+angiopathy+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid pathology in human brain microvessel extracts from the parietal cortex: relation with cerebral amyloid angiopathy and Alzheimer's disease.</a> Acta Neuropathologica. 137, 801-823 (2019).</li>
<li>Porte, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+and+transcriptomic+study+of+brain+microvessels+in+neonatal+and+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Proteomic and transcriptomic study of brain microvessels in neonatal and adult mice.</a> PLoS One. 12, e0171048(2017).</li>
</ol>

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

يتضمن BBB الخصائص الفريدة للخلايا الغشائية الوعائية المجهرية التي يقترن بها بنيه متطورة من ضيق-، ملتصقين-، "ربط المقبس"-تقاطعات ، والتصاق لويحات الحرجة ل CNS التوازن2،3،19. يتم الحث علي خصائص الخلايا البطانية والحفاظ عليها من قبل pericytes والعمليات المحيطة بالأرجل الفلكية المجاورة2،3،19. يعرض الاوعيه الدقيقة BBB القطبية (اي نمط التعبير...

دماغنا هو الجهاز الأكثر اهميه في جسمنا. لهذا السبب, الحفاظ علي التوازن الدماغ علي الرغم من العوامل الخارجية التي قد تؤدي إلى انحراف عن الحياة الطبيعية هو اولويه. وفقا لبعض العلماء ، حوالي 400-500 مليون سنه مضت1، فقاري الحيوانية وضعت ما نعرفه الآن باسم حاجز الدم في الدماغ (BBB)2،3. هذا "السياج" الواقية تمارس أكبر قدر من التاثير علي النظام العصبي المركزي (CNS) التوازن والوظائف من خلال تنظيم باحكام نقل الأيونات والجزيئات والخلايا بين الدم والخلية العصبية. عندما تتعطل BBB ، يصبح الدماغ عرضه للتعرض السام ، والعدوى ، والتهاب. ولذلك ، يرتبط الخلل الوظيفي BBB مع العديد ، ان لم يكن كل ، اضطرابات العصبية والنمو العصبي4،5،6.
وتعزي الوظيفة المتطورة لل BBB إلى الاوعيه المجهرية العصبية الفريدة التي تتوافق مع وحده الاوعيه العصبية (nvu)2،3. الخلايا البطانية عاليه التخصص ، بيريسيلات ، والقدمين النهاية استروسيتيك هي المكونات الخلوية لل nvu2،3. مصفوفة خارج الخلية المتولدة من هذه الخلايا هي أيضا ضرورية لل nvu و BBB فسيولوجيا2,3. علي الرغم من ان المكونات الخلوية والجزيئية الاساسيه لل nvu يتم الحفاظ عليها بين الفقاريات ، يتم الإبلاغ عن عدم التجانس بين الأوامر والأنواع7،8. ومع ذلك ، القيود التقنية تعيق قدرتنا علي النظر بشكل كامل في هذه الاختلافات في البيولوجيا العصبية ، الطب الحيوي ، أو البحوث الانتقالية.
وبسبب ذلك ، قمنا بتوسيع طريقه العزل المجهري الخاصة بمنطقه السفينة العصبية الخاصة لجعلها قابله للتطبيق علي العديد من الأنواع من مجموعات الفقاري الخمسة: الأسماك والبرمائيات والزواحف والطيور والثدييات. يوصف البروتوكول لاستخدامه علي الفقاريات الصغيرة والفقريات الكبيرة ، بما في ذلك الأنواع ذات الصلة الانتقالية9. بالاضافه إلى ذلك ، ونحن تشمل مناطق أخرى من الCNS لم يتم التحقيق فيها من قبل في هذا السياق ، ولكن ذات الصلة لفسيولوجيا الأعصاب ومع الآثار السريرية الهائلة: المهاد ، الغدة النخامية ، والمادة البيضاء. وأخيرا ، اختبرنا قدره هذه الطريقة العزلة كاداه موثوق بها لتحديد التغيرات في تعبير البروتين علي طول nvu و/أو BBB9،10،11. كدليل علي المفهوم ، أظهرنا كيفيه تحديد التغييرات في VCAM-1 والتعبير جام-B خلال EAE باستخدام طريقه العزل تليها المناعي.

<table><tbody><tr><td>يستخدم BP39920 10X PBS</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>في الحجب ومخفف الأجسام المضادة.</td></tr><tr><td>20٪</td><td>PFA علوم المجهر الإلكتروني</td><td>15713-S</td><td>تستخدم كمثبت (4٪ PFA)</td></tr> <tr><td>70،000 ميجاوات Dextrann</td><td>Millipore Sigma</td><td>9004-54-0</td><td>تستخدم لحل MV-2</td></tr><tr><td>Adson Corpps</td><td>Fine Science Tools (FST)</td> <td>11006-12</td><td>تستخدم لإزالة العضلات والجلد</td></tr><tr><td>ملقط Adson ، جودة الطالب</td><td>FST</td><td>91106-12</td><td>نفس النحو الوارد أعلاه ولكن أرخص</td></tr><tr><td>مصل البقر الألبومين (BSA)</td> <td>Millipore Sigma</td><td>A7906-100G</td><td>يستخدم لمحلول MV-3 ، ومنع وتخفيف الأجسام المضادة</td></tr><tr><td>Corning 100 & mu ؛ مصفاة الخلية m</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS431752-50EA</td><td></td></tr><tr><td>Corning 70 & mu ؛ مصفاة m Cell</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS431751-50EA</td><td></td></tr><tr><td>Corning Deskwork نصائح منخفضة الربط</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS4151</td><td>كما هو موضح أدناه ولكن أرخص.</td></tr><tr><td>كولتريكس بولي دي ليسين</td><td>آر آند D</td><td>3439-100-01</td><td>يستخدم لطلاء الشرائح</td></tr><tr><td>الحمار المضاد للماعز IgG-ALEXA 555</td><td>Thermo</td><td>A21432</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الحمار المضاد للفأر IgG-ALEXA 488</td><td>Thermo</td><td>A21202</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الحمار المضاد للأرانب IgG-ALEXA 488</td><td>Thermo</td><td>A21206</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الحمار المضاد للأرانب IgG-ALEXA 647</td><td>Thermo</td><td>A31573</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الحمار المضاد للفئران IgG-DyLight 650</td><td>Thermo</td><td>SA5-10029</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>اختيار الأنسجة ذات الشق</td><td>المزدوج FST</td><td>18067-11</td><td>يستخدم لإزالة السحايا والضفيرة المشيمية</td></tr><tr><td>Dumont #3c ملقط</td><td>FST</td><td>11231-20</td><td>يستخدم لمناولة أنسجة الجهاز العصبي المركزي الأكثر حساسية و / أو الصغيرة (مثل الغدة النخامية)</td></tr> <tr><td>Dumont # 7 Corpps</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td>تستخدم لتشريح الجهاز العصبي المركزي والتعامل معه</td></tr><tr><td>Dumont # 7 Fallps ، الطالب</td><td>FST</td><td>91197-00</td><td>كما هو مذكور أعلاه ولكن أرخص</td></tr><tr><td>EP Dualfilter T.I.P.S. LoRetention Tips</td><td>Eppendorf</td><td>22493008</td><td>جودة أفضل من النصائح المذكورة أعلاه (أغلى).</td></tr><tr><td>ملقط Graefe ناعم للغاية ،</td><td>FST</td><td>11151-10</td><td>مسنن يستخدم لإزالة العظام</td></tr><tr><td>مقص ناعم ،</td><td>حاد FST</td><td>14060-09</td><td>يستخدم لإزالة كيس الخنازير والمكاك الجافية</td></tr><tr><td>زجاج مدقة 1.5 مل خالط أنبوب الطرد المركزي الدقيق طاحونة الأنسجة الخالط ، حزمة من 10</td><td>Chang Bioscience Inc. (eBay)</td> <td>GP1.5_10</td><td>تستخدم في منطقة ما تحت الحمراء الصغيرة والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>الماعز المضاد ل CXCL12 ، البيوتينيل</td><td>PeproTech</td><td>500-P87BGBT</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التخفيف الموصى به: 1:20.</td></tr><tr><td>الماعز المضادة ل JAM-B</td><td>R & D</td><td>AF1074</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي لتقييم الالتهاب العصبي. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>الماعز المضاد للفأر IgG-ALEXA 488</td><td>Thermo</td><td>A11001</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الماعز المضاد للفأر IgG-ALEXA 555</td><td>Thermo</td><td>A21424</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الماعز المضادة ل PDGFR & beta ؛</td><td>R & D</td><td>AF1042</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>الماعز المضاد للأرانب IgG-ALEXA 555</td><td>Thermo</td><td>A21249</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الماعز المضاد للأرانب IgG-DyLight 488</td><td>Thermo</td><td>35552</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>الماعز المضاد للفئران IgG-DyLight 650</td><td>Thermo</td><td>SA5-10021</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>ملقط Graefe ، طرف منحني ، أسنان 1X2</td><td>FST</td><td>11054-10</td><td>يستخدم لعقد صافي مرشح النايلون وهز</td></tr><tr><td>HBSS ، 1X عازلة مع الكالسيوم والمغنيسيوم</td><td>Corning</td><td>21-022-CM</td><td>تستخدم لمحلول MV-1</td></tr><tr><td>HEPES ، 1M عازلة سائلة</td><td>Corning</td><td>25-060-CI</td><td>تستخدم لمحلول MV-1</td></tr><tr><td>Isolectin GS-IB4-Biotin-XX</td><td>ThermoFisher Scientific (Thermo)</td> <td>I21414</td><td>البروتين السكري المعزول من البقوليات Griffonia simplicifolia التي تربط بقايا D-galactosyl من glycocalysx للخلايا البطانية. تستخدم للسفن الدقيقة للجهاز العصبي المركزي للطيور والخنازير. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>مقص LaGrange ، FST مسنن</td><td></td><td>14173-12</td><td>يستخدم لتشريح الجمجمة واستئصال الصفيحة الفقرية (باستثناء الخنزير المكاك)</td></tr> <tr><td>Millicell EZ الشريحة 8 آبار وحدة</td><td>Millipore Sigma</td><td>PEZGS0816</td><td></td></tr><tr><td>Mouse anti-CLDN5</td><td>Thermo</td><td>35-2500</td><td>تستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>الفأر المضاد ل GGT1</td><td>Abcam</td><td>ab55138</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>الفأر المضاد للإنسان CD31</td><td>R & D</td><td>BBA7</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي للرئيسيات. التركيز الموصى به: 16.5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>الفأر المضاد ل NFM</td><td>Thermo</td><td>RMO-270</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>الفأر المضاد لألفا SMA</td><td>Thermo</td><td>MA5-11547</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>شبكة تصفية النايلون ، لفة</td><td>Millipore Sigma</td><td>NY6000010</td><td>أقراص صافية مرشحة مقطوعة بالليزر إلى أقراص صافية قطرها 13 مم. تستخدم لمنطقة ما تحت الحمراء الصغيرة والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>شبكات ترشيح النايلون ، 25 مم</td><td>Millipore Sigma</td><td>NY2002500</td><td>تستخدم في معظم أنسجة الجهاز العصبي المركزي للفقاريات الصغيرة ، باستثناء منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية. تستخدم لمنطقة ما تحت المهاد المكاك والخنازير والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>شبكات ترشيح النايلون ، 47 مم</td><td>Millipore Sigma</td><td>NY2004700</td><td>تستخدم لأنسجة الجهاز العصبي المركزي للمكاك والخنازير ، باستثناء منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>كاشف ProLong Gold المضاد للبهتان مع DAPI</td><td>ThermoFisher</td><td>P36935</td><td>يستخدم لتغطية الشرائح.</td></tr><tr><td>أرنب مضاد ل AQP4</td><td>Millipore Sigma</td><td>A5971</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>SAB2107967</td> <td>يستخدم الأرنب المضاد</td> ل <td>LSR Millipore Sigma</td><td>كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>أرنب مضاد ل NG2</td><td>Millipore Sigma</td><td>AB5320</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr><tr><td>أرنب مضاد ل OSP</td><td>Abcam</td><td>ab53041</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 1 & mu ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>أرنب مضاد للفيروسف-كاديرين</td><td>Abcam</td><td>ab33168</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>أرنب مضاد ل ZO-1</td><td>Thermo</td><td>61-7300</td><td>يستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr>يستخدم <tr><td>550274 الفئران المضادة ل CD31</td><td>Becton Dickinson</td><td>BD</td><td>كجسم مضاد أساسي للأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي للفئران. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>الفئران المضادة ل GFAP</td><td>Thermo</td><td>13-0300</td><td>تستخدم كجسم مضاد أساسي على الأوعية الدقيقة للجهاز العصبي المركزي من جميع العينات. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 200.</td></tr>يستخدم <tr><td>Becton Dickinson</td><td>BD</td> <td>المضاد للجرذ VCAM-1</td><td>553329 كجسم مضاد أساسي لتقييم الالتهاب العصبي. التركيز الموصى به: 5 مو ؛ جم / مل.</td></tr><tr><td>محلول Ringer المعقم ، Frog</td><td>Aldon Corporation</td><td>IS5066</td><td>يستخدم للتخدير الأمفيبي</td></tr><tr><td>Streptavidin-ALEXA 555</td><td>Thermo</td><td>S32355</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي لتسمية الأجسام المضادة الأولية الحيوية. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 500.</td></tr><tr><td>Streptavidin-ALEXA 647</td><td>Thermo</td><td>S32357</td><td>يستخدم كجسم مضاد ثانوي لتسمية الأجسام المضادة الأولية الحيوية. التخفيف الموصى به بنسبة 1: 500.</td></tr><tr><td>مقص جراحي ، حاد</td><td>FST</td><td>14002-12</td><td>يستخدم لإزالة العضلات والجلد</td></tr><tr><td>مقص جراحي ، حاد</td><td>حاد FST</td><td>14001-16</td><td>يستخدم لقطع الرأس (باستثناء الخنازير المكاك)</td></tr> <tr><td>حامل مرشح سوينكس ، 13 مم</td><td>Millipore Sigma</td><td>SX0001300</td><td>تم تعديله بواسطة القطع بالليزر. تستخدم لمنطقة ما تحت الحمراء الصغيرة والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>حامل فلتر سوينكس ، 25 مم</td><td>Millipore Sigma</td><td>SX0002500</td><td>معدل بالقطع بالليزر. تستخدم في معظم أنسجة الجهاز العصبي المركزي للفقاريات الصغيرة ، باستثناء منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية. تستخدم لمنطقة ما تحت المهاد المكاك والخنازير والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>حامل فلتر سوينكس ، 47 مم</td><td>SX0004700 Millipore Sigma</td><td></td><td>تم تعديله بواسطة القطع بالليزر. تستخدم لأنسجة الجهاز العصبي المركزي للمكاك والخنازير ، باستثناء منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>ThermoFisher</td><td>50-165-7277</td><td>يستخدم للحجب وتخفيف الأجسام المضادة.</td></tr><tr><td>Wheaton 120 Vac Overhead Stirrer</td><td>VWR (المورد DWK Life Sciences)</td> <td>62400-904 (DWK # 903475) تستخدم</td> <td>لأنسجة الجهاز العصبي المركزي للمكاك والخنازير مع طاحونة أنسجة سعة 55 مل ، باستثناء منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>مطحنة مناديل Wheaton Potter-Elvehjem مع مدقة PTFE ، 10 مل</td><td>VWR (مورد DWK Life Sciences)</td> <td>14231-384 (DWK # 357979) تستخدم</td> <td>في معظم أنسجة الجهاز العصبي المركزي للفقاريات الصغيرة ، باستثناء منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية. تستخدم لمنطقة ما تحت المهاد المكاك والخنازير والغدة النخامية.</td></tr><tr><td>طاحونة مناديل Wheaton Potter-Elvehjem مع مدقة PTFE ، 55 مل</td><td>VWR (مورد DWK Life Sciences)</td> <td>14231-372 (DWK # 357994) تستخدم</td> <td>لأنسجة الجهاز العصبي المركزي للمكاك والخنازير ، باستثناء منطقة ما تحت المهاد والغدة النخامية.</td></tr></tbody></table>

عزل يمكن الاعتماد عليه من الاوعيه المجهرية للجهاز العصبي المركزي عبر خمس مجموعات فقاري

Reliable Isolation of Central Nervous System Microvessels Across Five Vertebrate Groups

يتم اجراء عزل الاوعيه الدقيقة من الجهاز العصبي المركزي (CNS) عاده عن طريق الجمع بين الانسجه القشرية من العديد من الكائنات ، وغالبا ما تكون القوارض. هذا النهج يحد من التحقيق في خصائص حاجز الدم في الدماغ (BBB) إلى القشرة ولا يسمح للمقارنة الفردية. يركز هذا المشروع علي تطوير طريقه العزلة التي تسمح للمقارنة بين وحده الاوعيه الدموية (NVU) من المناطق العصبية المتعددة: القشرة ، المخيخ ، الفص البصري ، المهاد ، الغدة النخامية ، جذع الدماغ ، والحبل الشوكي. وعلاوة علي ذلك ، تم تكييف هذا البروتوكول ، الذي وضع أصلا لعينات murine ، بنجاح للاستخدام علي الانسجه العصبية من الأنواع الصغيرة والكبيرة فقاري التي نحن أيضا قادره علي عزل الاوعيه الدقيقة من المادة البيضاء في نصف الكره الدماغ. هذا الأسلوب ، عندما يقترن مع المناعي ، يسمح لكميه من التعبير البروتين والمقارنة الاحصائيه بين الافراد ، ونوع الانسجه ، أو العلاج. وقد أثبتنا هذا التطبيق من خلال تقييم التغيرات في تعبير البروتين خلال التهاب الدماغ المناعي الذاتي التجريبي (EAE) ، وهو نموذج murine للمرض التهابي العصبي ، والتصلب المتعدد. بالاضافه إلى ذلك ، يمكن استخدام الاوعيه المجهرية المعزولة بواسطة هذه الطريقة للتطبيقات المصب مثل qPCR ، الحمض الريبي المتسلسل ، ولطخه الغربية ، من بين أمور أخرى. علي الرغم من ان هذه ليست المحاولة الاولي لعزل الاوعيه الدقيقة CNS دون استخدام الانحلال القصبي أو التفكك الانزيمي ، فهي فريدة من نوعها في الدقة للمقارنة بين افراد واحد والمناطق العصبية المتعددة. لذلك ، فانه يسمح للتحقيق في مجموعه من الاختلافات التي قد تظل غامضه والا: أجزاء CNS (القشرة ، المخيخ ، الفص البصري ، جذع الدماغ ، المهاد ، الغدة النخامية ، والحبل الشوكي) ، ونوع الانسجه العصبية (المادة الرمادية أو البيضاء) ، والافراد ، مجموعات العلاج التجريبية ، والأنواع.

وأظهرت الاوعيه المجهرية المعزولة من murine CNS جميع المكونات الخلوية الجوهرية للوحدة العصبية2,3. باستخدام اما الصفائح الدموية الغشائية التصاق جزيء-1 (PECAM ، المعروف أيضا باسم CD31) أو ايسولكتين IB4 (بروتين سكري الذي يربط غليكوكاليكس الخلية البطانية) للخلايا البطانية ، عامل النمو المستمدة من الصفائح الدموية-β (PDGFRβ) أو الخلايا العصبية-غليال مستضد 2 (NG2) ل perسيلات و اكوابورين-4 (AQP4) للحصول علي نهاية القدم الفلكية (<strong cla...

والهدف من هذا البروتوكول هو عزل الاوعيه المجهرية من مناطق متعددة من الجهاز العصبي المركزي لفقاريات السسينسيفريك والفقريات.

Isolation of microvessels from the central nervous system (CNS) is commonly performed by combining cortical tissue from multiple animals, most often ...

هذا البروتوكول مهم لأنه يسمح للمقارنة بين الأوعية الدقيقة بين مناطق الجهاز العصبي المركزي المختلفة ، وكذلك بين الأفراد المختلفين. يمكن إكمال تقنية العزلة الدقيقة هذه في غضون يوم واحد ، وتلغي الحاجة إلى الطرد الشديد والتفكك الأنزيمي. إزالة السحايا والزفير المشيمية يمكن أن يكون صعبا.تأكد من العمل ببطء وبعناية لضمان الإزالة الكاملة لكل نسيج. لتشريح أنسجة الجهاز العصبي المركزي من عينة فقرية صغيرة لزهية الدماغ، ضع الدماغ المحاصَد في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر يحتوي على محلول MV-1 على الجليد، واستخدم ملقطًا لاسترداد الغدة النخامية من تورسيكا سيلا للجمجمة. وضع الغدة النخامية في أنبوب microcentuge 1.7 ملليلتر من MV-1 حل على الجليد، وإزالة الجلد والعضلات لفضح العمود الفقري.بعد إزالة الأطراف والقفص الصدري والأعضاء الداخلية، استخدم حقنة 10 ملليلتر مجهزة بإبرة قياس 18 لطرد العمود الفقري بمحلول MV-1 الطازج، في اتجاه من الdal إلى الروستال في جميع أنحاء الفقاري القطني. ثم ضع الحبل الشوكي في أنبوب 5 ملليلتر يحتوي على محلول MV-1 جديد. بعد ذلك ، ضع الدماغ في طبق بيتري تحت المجهر التشريحي ، وإزالة السحايا مع وخز مزدوج المحاور.تأكد من فحص الحبل الشوكي للتأكد من عدم وجود قطع من السحانيات. استخدام ملقط لفصل تحت المهاد، المخيخ، جذع الدماغ، والقشرة. عند الضرورة، استخدم ملقط والقزحية ومقص الربيع لإخراج المصابيح الشمية والمهاد، واستخدام وخز مزدوجة الشق لإزالة كل من plexus المشيمية من جميع البطينات الدماغ.لتشريح أنسجة الجهاز العصبي المركزي من عينة كبيرة من الفقاريات الفيرفلورية، استخدم مجهر تشريح ووخز مزدوج المحاور، ملقط، ومقص قزحية العين والربيع لإزالة السحايا من كل أنسجة الجهاز العصبي المركزي، مع الحرص على إزالة أي قطعة من الضفيرة المشيمية من البطينين الدماغ. من أجل تجانس أنسجة الجهاز العصبي المركزي المحصودة، يُرمّم كل منطقة من مناطق الجهاز العصبي المركزي إلى قطعة من ملليمتر إلى قطعتين داخل أطباق بيتري الفردية. لتجانس أنسجة الجهاز العصبي المركزي من عينات الفقاريات الصغيرة، استخدم ماصة نقل لإضافة ملليلتر واحد من محلول MV-1 لتعليق الأنسجة المفرومة.ثم استخدام ماصة نقل نفسه للاستغناء عن القشرة، المخيخ، جذع الدماغ، الفص البصري، وقطع الحبل الشوكي في الفردية 10 ملليلتر طاحونة الأنسجة الزجاجية، واستخدام آفة PTFE وخمس ملليلترات من حل MV-1 لطحن كل مجموعة من الأنسجة لحوالي 10 السكتات الدماغية. نقل كل ملاط الأنسجة في أنابيب مخروطية 15 ملليلتر الفردية على الجليد، واستخدام ملقط لوضع تحت المهاد والنخامية في 100 ميكرولترات من حل MV-1، في أنابيب 1.7 ملليلتر الفردية. ثم، تجانس بعناية كل الأنسجة مع ميكروبستل الزجاج.لتجانس عينة كبيرة من الفقاريات، استخدم ماصة نقل مقطعة مشطة لنقل الأنسجة المفرومة إلى طاحونة نسيج زجاجي 55 ملليلتر، واربط المطحنة بمحرك علوي. إضافة نصف حجم الموصى بها من حل MV-1 وفقا للجزء CNS محددة يجري التجانس كما هو مبين في الجدول، وتشغيل مُنَقّر علوي إلى 150 دوران تقريباً في الدقيقة. قم بتحريك الأنبوب الزجاجي لأعلى ولون لحوالي 30 ثانية قبل إيقاف مُثير الحمل لإضافة المزيد من حل MV-1 لتحقيق تجانس إضافي، حتى يتم الحصول على ملاط متجانس.ثم نقل الأنسجة المتجانسة إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر على الجليد. لتنقية microvessel، بيليه أنسجة الجهاز العصبي المركزي يتجانس عن طريق الطرد المركزي، والتخلص من supernatants. لعزلة العينة الفقارية الصغيرة، ماصة القشرة، المخيخ، جذع الدماغ، الفص البصري والكريات الحبل الشوكي، في خمسة ملليلتر من الطازجة، الجليد الباردة MV-2 حل لكل عينة، حوالي 10 مرات، قبل إضافة خمسة ملليلتر أكثر من الجليد الباردة MV-2 حل لكل أنبوب.الوجه بعناية الأنابيب لخلط، وإعادة تعليق تحت المهاد والكريات الغدة النخامية في ملليلتر واحد من حل MV-2. بالنسبة لعزلة العينة الفقارية الكبيرة، أضف 20 ملليلترًا من محلول MV-2 البارد من الجليد إلى القشرة والمخيخ وسيقان الدماغ والكريات الدقيقة للحبل الشوكي، وإعادة تعليق الكريات في مسدس أنبوبي عند 40 دوران في الدقيقة لمدة 5 دقائق. في نهاية إعادة التعليق، وفصل أنسجة الجهاز العصبي المركزي lycates عن طريق الطرد المركزي، وتدوير ببطء كل أنبوب للسماح للمابير لتمرير على طول الجدار لفصل بعناية طبقة الميلين سميكة وكثيفة على واجهة السائل من جدران أنبوب.تجاهل واجهات الميلين والسائلة، وصمة عار الجدار الداخلي لكل أنبوب مع ملعقة ملفوفة مع مسح الورق منخفضة الوبر. ثم، استخدم مسح الورق المنخفض الوبر الملتوية لامتصاص السائل الزائد، واستخدام نصائح منخفضة الربط لإعادة تعليق كل بيليه في ملليلتر واحد من حل MV-3. لmiution microvessel والترشيح، مزيج بضعة ملليلترات من حل MV-3 الطازجة لكل الطين أنسجة الجهاز العصبي المركزي، وبينما خلط لتجنب المجاميع، سلالة كل تعليق من خلال مصفاة برويت في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر الفردية.مكان واحد 20 ميكرومتر النايلون صافي مرشح على واحد حامل مرشح معدلة في منطقة CNS. نقل حامل مرشح على أنبوب مخروطي 50 ملليلتر، والرطب مرشح مع خمسة ملليلتر من الجليد الباردة MV-3 حل، والتأكد من أن المخزن المؤقت يصب أسفل حامل مرشح، في أنبوب مخروطي. نقل microvessels مائل على كل 20 ميكرومتر مرشح النايلون صافي، وشطف microvessels مع خمسة إلى 10 ملليلتر من الجليد الباردة MV-3 الحل.استخدم ملقط لنقل كل مرشح إلى القارص الفردية التي تحتوي على حل MV-3 البارد من الثلج ، وتهز كل مرشح بلطف لمدة 30 ثانية لفصل الميكروسيل. بعد نقل إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر، وجمع microvessels عن طريق الطرد المركزي، واستخدام ماصة منخفضة ملزمة لإعادة تعليق كل بيليه في ملليلتر واحد من الجليد الباردة MV-3 الحل. ثم، نقل التعليقات microvessel من عينات الفقاريات الصغيرة في أنبوب microcentuge 1.7 ملليلتر للطرد المركزي لمدة خمس دقائق في 20،000 مرات G، في أربع درجات مئوية.بالنسبة للعينات الفقارية الكبيرة، قم بنقل التعليق إلى أنابيب فردية من خمسة ملليلتر للطرد المركزي، وإضافة أربعة ملليلترات من محلول MV-3 للطرد المركزي لمدة خمس دقائق عند 2000 مرة G في أربع درجات مئوية. يمكن الكشف عن المكونات الجوهرية للوحدة العصبية الوعائية داخل microvessels ، معزولة كما هو موضح ، عن طريق الحقن المناعي لـ CD31 ، PDGFR-beta ، و aquaporin أربعة ، بما في ذلك القشرية ، cerebellar ، الغدة النخامية ، hypothalamic ، جذع الدماغ ، وmicrovess الشوكي. وبالمثل، فإن التعبير عن البروتين الملتزم-تقاطع VE-cadherin، والبروتينات تقاطع ضيق CLDN5 وZonula Occludens-1، ثلاثي الخلايا وصلة البروتين أنغولين-1، والعلامة القاعدية chemokine ligand CXCL motif 12، وغاما-غلوتاميل ترانسفيرايز-1، يمكن تصورها.وعلاوة على ذلك، فإن غالبية microvessels تخلو من التعبير عن الفعل العضلات الملساء ألفا، مما يدل على أن هذا البروتوكول العزل يستهدف انتقائي microvessels من العيار الصغير. Microvessels التي تم الحصول عليها من غيرها من الفقاريات قلط الدماغ الصغيرة ، مثل الطيور ، الكذاب ، الضفدع ، والأسماك ، وتقاسم بعض الميزات المورفولوجية ، مما يشير إلى أن هذه الطريقة مفيدة لمزيد من توصيف الاختلافات في وحدات الأعصاب بين الأنواع. ويكشف القياس الكمي للتغيرات في تعبير البروتين عن زيادة في جزيء التصاق الخلايا الوعائية واحد، وجزيء التصاق تقاطعي B على طول ميكروفيسيل الحبل الشوكي، خلال ذروة التهاب الدماغ المناعي الذاتي التجريبي.ومع ذلك ، فإن جزيء التصاق الخلايا الوعائية واحد هو أيضا زيادة كبيرة في microvessels الغدة النخامية ، وانخفاض في تحت المهاد وmicrovessels الدماغ. بالإضافة إلى ذلك ، لوحظت تغيرات في جزيء التصاق الخلايا الوعائية تعبير واحد خلال التهاب الدماغ المناعي الذاتي التجريبي المزمن في جميع أنسجة CNS ، وفي جزيء التصاق تقاطعي B التعبير في تحت المهاد والصغر النخامي. ويمكن إجراء التحليلات الكمية، مثل البقعة الغربية، والـ PCR والكيمياء المناعية، بعد هذا الإجراء للكشف عن رؤى في أنماط التعبير الجيني والبروتيني داخل حاجز الدم في الدماغ.Paraformaldehyde هو كاشف شديد السمية، وينبغي دائما أن تعالج تحت غطاء محرك الدخان في حين يرتدي معدات الوقاية الشخصية المناسبة.

reliable-isolation-central-nervous-system-microvessels-across-five

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

يوضح هذا الفيديو عزل الأوعية السليمة عن دماغ الفأر التي تشكل الحاجز الدموي الدماغي (BBB) جنبا إلى جنب مع الخلايا العصبية والخلايا الدبقية. يمكن استخدام الأوعية المعزولة كنموذج في المختبر لدراسة دورها في الحفاظ على توازن الدماغ.

عزل أوعية دماغ الفئران: بروتوكول لعزل الأوعية السليمة من عينة دماغ الفئران

يوضح هذا الفيديو عملية عزل الأوعية الدقيقة للدماغ عن الفئران التي تم قتلها رحيم. ويشمل تشريح الدماغ ، وتنظيف الأنسجة ، والهضم الميكانيكي ، يليه الطرد المركزي المتكرر لعزل الجزء النقي من الأوعية الدقيقة.

طريقة لعزل وحدات الأوعية الدموية العصبية عن دماغ الفئران

&lt; p class = 'jove_content'&gt; ترتبط الخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ (BMEC) بواسطة بروتينات وصلية محددة تشكل حاجزا شديد التنظيم يفصل بين الدم والجهاز العصبي المركزي (CNS) ، ما يسمى بالحاجز الدموي الدماغي (BBB). يتيح عزل الخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة في دماغ الفئران الأولية ، كما تمت مناقشته في هذا البروتوكول ، إجراء دراسات مفصلة في المختبر ل BBB.

عزل خلايا الدماغ الأولية الفئران الاوعية الدموية الدقيقة غشائي

يصف هذا البروتوكول التكييف المسبق المتكرر لنقص الأكسجة ، أو التعرض القصير لنقص الأكسجة الجهازي الذي يقلل من أحجام الاحتشاء واضطراب الحاجز الدموي الدماغي بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط العابر في الفئران. كما يفصل القياس الكمي المزدوج لحجم الاحتشاء واضطراب الحاجز الدموي الدماغي بعد السكتة الدماغية لتقييم فعالية حماية الأوعية الدموية العصبية.

الكمي لحماية عائية عصبية بعد المتكرر نقص الأوكسجين شروط مسبقة وعابر الأوسط الشريان الدماغي انسداد في الفئران

نصف بروتوكولا يسمح بتنقية حجرة الأوعية الدموية في دماغ الفأر. تشمل الأوعية الدماغية المعزولة الخلايا البطانية المرتبطة بتقاطعات ضيقة وتحيط بها صفيحة قاعدية مستمرة ، وحضجة ، وخلايا عضلية ملساء وعائية ، بالإضافة إلى أغشية أبطانية حول الأوعية الدموية.

تنقية ماوس سفن الدماغ

تصف هذه المخطوطة بروتوكولا بسيطا وقابلا للتكرار لعزل الشرايين داخل المخ (مجموعة من الأوعية الدموية تشمل الشرايين المتني والشرايين المخترقة والشرايين قبل الشعيرات الدموية) من الفئران ، لاستخدامها في تصوير عضل الضغط ، والتألق المناعي ، والكيمياء الحيوية ، والدراسات الجزيئية.

العزلة وكيفية تركيب الكانيولا من الشلل متني الشرايين

الشعيرات الدموية في الدماغ معزولة من أنسجة المخ البشري يمكن استخدامها كنموذج الإكلينيكية لدراسة وظيفة الحاجز تحت الظروف الفسيولوجية والفيزيولوجية المرضية. نقدم هنا، على بروتوكول أمثل لعزل الشعيرات الدموية في الدماغ من أنسجة المخ البشري الطازج.

عزل من الشعيرات الدموية الدماغية من أنسجة المخ البشري الطازج

ويرد هنا، وسيلة لعزل ميكروفيسيلس الدماغ الفئران وإعداد عينات الغشاء. هذا البروتوكول له ميزة واضحة لإنتاج ميكروفيسيل المخصب العائد مع البروتين مقبول عينات من الحيوانات الفردية. ثم يمكن استخدام عينات لتحليل البروتين قوية في البطانة ميكروفاسكولار الدماغ.

أسلوب بسيط واستنساخه تحضير عينات الغشاء من الفئران المعزولة حديثا ميكروفيسيلس الدماغ

تقدم هذه الورقة بروتوكولين محسنين لفحص الخلايا المناعية المقيمة والمشتقة من المحيط داخل الجهاز العصبي المركزي ، بما في ذلك الدماغ والحبل الشوكي والسحايا. يساعد كل من هذه البروتوكولات على التأكد من وظيفة وتكوين الخلايا التي تشغل هذه المقصورات في ظل حالة مستقرة وظروف التهابية.

عزل أنسجة الجهاز العصبي المركزي والسحايا المرتبطة به لتحليل المصب للخلايا المناعية

نقدم هنا بروتوكولا للعزل في المختبر لمجموعات الخلايا الدبقية المتعددة من الجهاز العصبي المركزي للفأر. تسمح هذه الطريقة بفصل الخلايا الدبقية الصغيرة الإقليمية ، وخلايا سلائف الخلايا قليلة التغصن ، والخلايا النجمية لدراسة الأنماط الظاهرية لكل منها في مجموعة متنوعة من أنظمة الثقافة.

تشريح وعزل الفئران الدبقية من مناطق الجهاز العصبي المركزي المتعددة

حتى الآن ، تعد بروتوكولات العزل المتزامن لجميع أنواع الخلايا الرئيسية المقيمة في الجهاز العصبي المركزي من نفس الفأر طلبا غير ملباة. يظهر البروتوكول إجراء قابلا للتطبيق في الفئران الساذجة والتجريبية لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي للتحقيق في الشبكات الخلوية المعقدة أثناء الالتهاب العصبي وتقليل أعداد الفئران المطلوبة في نفس الوقت.

العزل المتزامن لأنواع الخلايا المقيمة في الجهاز العصبي المركزي الرئيسي من الفئران المصابة بالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي للبالغين

تعلم عزل الأوعية الدموية الدقيقة من الجهاز العصبي المركزي عبر خمس مجموعات فقارية مختلفة. تتيح هذه الطريقة المقارنة بين الأنواع الملساء والمجعدة للدماغ دون الحاجة إلى الطرد المركزي الفائق أو التفكيك الإنزيمي.

عزل يمكن الاعتماد عليه من الاوعيه المجهرية للجهاز العصبي المركزي عبر خمس مجموعات فقاري

استكشف المزيد من الفيديوهات