تحريض الصرع ما بعد الصدمة في نموذج الماوس من إصابات الدماغ المتكررة منتشر الصدمة

بروتوكولنا هو أول من يفصّل نموذج فأر للصرع اللاحق للصدمة الناجم عن إصابة خفيفة في الدماغ. استخدام خفيفة منتشرة نموذج إصابات الدماغ الرضية يحاكي جانبا هاما من أمراض إصابات الدماغ البشرية التي دائما تقريبا لديها عنصر منتشر. من أجل تطوير المؤشرات الحيوية والعلاجات ، هناك حاجة إلى إجراء أبحاث باستخدام نماذج تتكاثر بشكل مناسب جوانب من أمراض الإنسان.

نموذج إصابات الدماغ الرضية لدينا لديه أيضا القدرة على توفير نظرة ثاقبة في الآليات التي تسبب ضعف وظيفة الدماغ بعد إصابة الدماغ الرضية الخفيفة أو ارتجاج. بعد التأكد من عدم وجود استجابة ل المنع في الألم، ضع الماوس على وسادة رغوة ووضع رأس الماوس تحت أنبوب قطرة الوزن. وضع شقة 1.3 سم قطرها ملليمتر واحد سميكة 880 مليغرام الوزن الفولاذ المقاوم للصدأ القرص في وسط رأس الحيوان بين العينين والأذنين.

إزالة دبوس في أنبوب قطرة الوزن للافراج عن قضيب الوزن 100 غرام من ارتفاع 50 سم. للحث على إصابة زائفة في الفئران التحكم، وإزالة قضيب الوزن من الأنبوب لمنع الإفراج عن طريق الخطأ من دبوس أثناء انخفاض الوزن. بعد تحريض انخفاض الوزن، ضع الحيوان على ظهره على وسادة التدفئة مغطاة بمنشفة ممتصة مبطنة بولي مع مراقبة حتى إعادة شغل الوظائف الكاملة.

ثم ضع الماوس في قفص نظيف تم تدفئته على وسادة تدفئة مع هلام الانتعاش وعدد قليل من القطع تشاو مبللة لمدة 45 دقيقة. لإعداد الحقل الجراحي لزرع القطب الكهربائي EEG، ضع مستشعر درجة الحرارة على لوحة ووضع الماوس الدماغ المصاب reesthetized على ستائر معقم على أعلى وسادة التدفئة على جهاز stereotac. بعد تثبيت الرأس في مكان مع قضبان الأذن، وتطبيق مرهم التشحيم على عيون الحيوان واستخدام كريم إزالة الشعر لإزالة الشعر من فروة الرأس.

تطهير الجلد المكشوف مع ثلاث مسحات بالتناوب 20 ثانية من محلول مطهر باليود povidone الجراحية و 70٪ الإيثانول في حركة دائرية. بعد إزالة فروة الرأس، ضعي الهيموستاتات الصغيرة على حدود الجلد المفتوحة لتوسيع المنطقة المعرضة. بعد ذلك ، استخدم المشرط لإزالة الـ periosteum برفق ومسحة الجمجمة مع بيروكسيد الهيدروجين.

عندما يتم مسح الجمجمة من الأنسجة ويظهر مظهر بيضاء، وتجفيف العظام مع الشاش العقيم أو مسحة. لزرع القطب، استخدم حفر عالية السرعة مع جولة 0.5 ملليمتر فولاذي بت في 5، 000 إلى 6، 000 التناوب في الدقيقة الواحدة لخلق ستة ثقوب البور لأقطاب المسمار. عندما تم حفر جميع الثقوب، ضع الأقطاب المسمار ستة في ثقوب البور ومزيج نصف مغرفة من مسحوق الاسمنت الأسنان مع عدة قطرات من المذيبات.

استخدام ملعقة لتحريك حتى خليط الاسمنت الأسنان هو مبتذل ولكن مرنة وقاسية بما يكفي لتكون مكثفة بشكل صحيح عندما وضعت على الجمجمة الحيوان. تطبيق الاسمنت على كامل السطح المكشوف من الجمجمة وكل قطب المسمار. بعد دقيقة إلى دقيقتين، قم بتشغيل الحديد لحام ووضع جبل الرأس EEG الثلاثة في ذراع حامل مجسم.

ضع جبل الرأس فوق الجمجمة بحيث تطابق مواضع الرصاص الستة الأسلاك موقف الرصاص السلك لكل قطب برغي. خفض الجهاز بحيث جزء من بطني تقع على رأس الاسمنت الأسنان. تحريف السلك من كل الرصاص من كل من الأقطاب المسمار مع الرصاص الأسلاك المقابلة من جبل الرأس، لحام كل زوج الملتوية من الأسلاك لإجراء إشارة السليم واستخدام مقص لتقليم أي الأسلاك الزائدة.

ثني كل زوج من الأسلاك لحام يؤدي حول جبل الرأس. عندما تم عازمة جميع أزواج، وتغطي كل من الأسلاك مع الاسمنت الأسنان الطازجة ترك فقط الجزء الأسود من جبل الرأس يتعرض. إطلاق الهيموستات عقد اللوحات الجلدية وتطبيق الكلورهيكسيدين مطهر إلى المنطقة المحيطة زرع لتجنب العدوى.

ثم نقل الحيوان من الجهاز إلى توازن لقياس وزن الحيوان كمرجع للرصد في المستقبل قبل وضع الحيوان في قفص نظيف على وسادة تدفئة دافئة مع الرصد ، هلام الانتعاش ، وعدد قليل من قطع الطعام الرطب. في هذا الشكل، يتم عرض نوبة تلقائية في الماوس بعد 97 يوماً من تكرار إصابة الدماغ الرضية في الوزن المسجلة باستخدام ثلاثة جبل رأس EEG تم تكوينه كما هو موضح في بروتوكول الفيديو هذا. هنا ، يظهر نوبة كهربائية غير متشنجة تلقائية مسجلة في الماوس بعد 65 يومًا من تكرار إصابة الدماغ الرضية.

في هذا الرقم، تم تسجيل نوبة عفوية في الماوس بعد 23 يوما من تكرار انخفاض الوزن إصابات الدماغ الرضية باستخدام جبل رأس واحد EEG. تشير القوة الطيفية لنوبة نموذجية إلى أعلى كثافة لتكون في نطاق 10 إلى 40 هرتز مع ذروة عند 15 هرتز. ويبين هذا البروتوكول الجداول الزمنية لاستهلاء المضبوطات في الحيوانات بعد تكرار انخفاض الوزن إصابات الدماغ الرضية مما يدل على وقوع المضبوطات تتجمع في بعض الحيوانات، ويؤكد على أهمية الحصول على التسجيلات المستمرة بدلا من متقطعة.

وضع السليم من القرص الصلب، وزرع دقيق من الأقطاب المسمار والحام حذر من خيوط الأسلاك كلها حاسمة لنجاح تجربة طويلة الأجل. بعد مراقبة التخطيط الدماغي، يمكن أن تكون طبقات الحيوانات مع إصابة الدماغ التي تطور المضبوطات من تلك التي لا لتحليل لاحق من الاختلافات الخلوية والجزيئية والفسيولوجية. إن تقسيم الحيوانات المصابة بالصرع اللاحق للصدمة من تلك التي تُصاب بإصابة دماغية مؤلمة ولكنها لا تصاب بنوبات هو أمر بالغ الأهمية لتطوير التدخلات والعلامات البيولوجية.