الكشف عن إنشاء إمدادات الدم المشتركة في الفئران الباربايوتيك عن طريق حقن الجلوكوز في الوريد Caudal

يوفر بروتوكولنا طريقة تحقق محسنة لـ chimerism الدورة الدموية وطريقة لإعداد نموذج الباربيسيس الناجح للأبحاث الطبية الحيوية. بالمقارنة مع الأساليب القائمة للكشف عن الهين الدم في البارابيسيس التي غالبا ما تكون قاتلة أو مرهقة، بروتوكول لدينا هو آمن وبسيط، والسماح للتحقق السريع والموثوق. على الرغم من أن هذه الطريقة هي محددة للكشف عن الهين الدم في نماذج الباروبيسيس، فإنه يمكن تطبيقها على أي دراسات الطب الحيوي التي تنطوي على إجراءات غير حيوية.

الخطوة الأكثر تحديا هو حقن الجلوكوز. لذلك تأكد من ممارسة حقن الوريد الذيل قبل إجراء إجراء تجريبي، أو استخدام المثبت ذيل الماوس البصرية الوريدية. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لدواسة منعكس، ضع اثنين من 20 إلى 25 جرامًا من ماكينات C57 السوداء 6 فئران ذكور في وضعية الوبين، واستخدم ماكينة حلاقة كهربائية لحلاقة الجانب الأيسر من فأر واحد تمامًا والجانب الأيمن من الفأر الثاني من سنتيمتر واحد تقريبًا فوق الكوع إلى سنتيمتر واحد تحت الركبة.

إزالة أي شعر المتبقية مع كريم إزالة الشعر قبل إجراء شقوق الجلد الطولي في الجلد مسح كل حيوان، بدءا من 0.5 سم فوق الكوع إلى 0.5 سم تحت مفصل الركبة، وفصل بلطف الجلد من اللفافة تحت الجلد. ربط الأوليكرنون والركبة من البارابيونت مع خياطة 3-0، وخياطة الجلد الحليق مع خياطة مستمرة 5-0. ثم حقن تحت الجلد 0.5 ملليلتر من 0.9٪ كلوريد الصوديوم لمنع الجفاف، وحقن عضليا 10 ملليغرام من ترامادول لكل 25 غراما من الماوس لتخفيف الألم، في كل فأر يوميا لمدة ثلاثة أيام.

للتحقق من البناء الناجح للتداول بين النخاع بين البارابيونتس عن طريق تقلب الجلوكوز ، في اليوم العاشر بعد جراحة الباربيسيس ، قم بتأمين الفئران المانحة في المثبت الوريدي ذيل الماوس البصري ، واستخدام كرة قطنية غارقة بنسبة 70 إلى 75٪ من الإيثانول لفرك الأوردة الكواد في الجناح من ذيل بارابيونت واحد. أدخل إبرة حقنة مليلتر واحدة في الوريد السدي من سنتيمترين إلى أربعة سنتيمترات من طرف الذيل وموازاة مع الوريد قدر الإمكان، وحقن غراماً إلى غرامين لكل كيلوغرام من الجلوكوز في 100 ميكرولتر من محلول ملحي في المتبرع في فترة 10 ثوانٍ. المقبل استخدام مقص لإزالة أصابع من الحيوانات المانحة والمتلقية للسماح لجمع قطرة دم في نقاط زمنية مختلفة من الفائدة بعد الحقن.

ثم أضف قطرة من كل عينة دم إلى مركز شريط اختبار الغلوكومتر للكشف عن مستوى الجلوكوز. للتحقق من البناء الناجح للتداول من قبل ايفانز امتصاص صبغة زرقاء، حقن 200 ميكرولترات من 0.5٪ ايفانز الأزرق counterstain intraperitoneally في الماوس المانحة، وجمع الدم من كل من parabionts عن طريق ثقب القلب بعد ساعتين. فصل المصل عن طريق الطرد المركزي، ونقل المصل إلى أنبوب مخروطي لتخفيف بنسبة 1 إلى 50 في كلوريد الصوديوم 0.9٪.

ثم قياس امتصاص عينات المصل المخففة في 620 نانومتر على مقياس الطيف. في هذا التحليل التمثيلي لمستويات السكر في الدم في ستة فئران متبرعة، زاد جلوكوز الدم بشكل حاد إلى 26.5 ميكرومولار للتر الواحد بمعدل دقيقة واحدة بعد حقن 100 ميكرولتر من الجلوكوز من خلال الوريد الذيل. ثم انخفضت مستويات السكر في الدم تدريجيا إلى 13.3 ميكرولتر لكل لتر في 60 دقيقة.

في الفئران المتلقية، زاد السكر في الدم ببطء بعد الحقن، ليصل إلى مستوى الذروة الأول في 15 دقيقة. كما أشار تركيز صبغة إيفانز الزرقاء في مصل البارابيونتس إلى نجاح بناء الوهم الدورة الدموية، ويمكن ملاحظة تقاطعات الأوعية الدموية تحت الجلد بين البارابيونتس بوضوح. في البارابيونتس التي لم تثبت دق الدم 15 يوما بعد جراحة الباربيسيس، الفئران المتلقي لم تظهر زيادة مستوى السكر في الدم في غضون 60 دقيقة بعد حقن الجلوكوز في الحيوان المانح.

كما لم يكن تركيز الدم من ايفانز الأزرق في اثنين من المتلقين مرتفعة، مما يدل على أن طريقة تقلب الجلوكوز حساسة مثل طريقة ايفانز الأزرق. وعلاوة على ذلك، انخفض مستوى الأنسولين في الدم بشكل ملحوظ بعد ساعة واحدة من حقن الجلوكوز بسبب زيادة مستويات الجلوكوز بسرعة واستعادة المستويات الطبيعية من قبل ثلاث ساعات، مما يشير إلى أن آثار الجلوكوز عن طريق الحقن على استقلاب الأنسولين قابلة للاستعادة. احرص على التأكد من إدخال الإبرة مباشرة في الوريد الذيل.

بعد التأكد من الهين الدم من البارابيونتس من خلال هذه الطريقة، يمكن دراسة التغيرات الفسيولوجية في الحيوانات غير الحيوية الحية.