تحديد المنظمين رواية نتح النبات من خلال فحص التصوير الحراري على نطاق واسع في Helianthus Annuus

يستخدم هذا البروتوكول التصوير الحراري لتحديد المركبات الجديدة القادرة على تنظيم تحّل النبات. هذه التقنية متعددة الاستخدامات فيما يتعلق بأنواع النباتات التي يمكن اختبارها ، وطبيعة المركب ، ونوع التصوير. لاقامة النباتات للزراعة ، أولا إضافة طبقة سميكة أربعة سنتيمترات من الفرميكوليت غرامة إلى معيار 10 من 20 بوصة الصواني النباتية مع عدم وجود ثقوب ومكان أصحاب البذور اثنين من سنتيمترات بعيدا في الصواني.

ملء أصحاب البذور مع vermiculite ووضع واحد بذور عباد الشمس وأشار إلى نهاية أسفل في كل حامل بحيث نصف البذور لا تزال مكشوفة. عندما تم مطلي جميع البذور، وتغطي لهم مع اثنين من سنتيمترين إضافية من الفرميكوليت الجميلة والضباب مع الماء من فوق. بعد ساعة واحدة، تغطية الصواني مع الأغطية ووضع النباتات في غرفة النمو في الدفيئة.

لإقامة نظام الزراعة المائية، وملء حاوية الحجم المناسب مناسبة لزراعة النباتات المائية مع الماء المقطر وإضافة الأسمدة الزراعة المائية العامة كما هو مبين من قبل الشركة المصنعة. ثم استخدام الهواء ومضخات المياه لتهيّف الحل المائية الناتجة مع حركة مستمرة. لإعداد العوامات المائية، وقطع ورقة من اثنين سم سميكة رغوة البوليسترين الموسعة لأبعاد الحاوية واستخدام أداة حرق الخشب لجعل 1-2 ثقوب قطرها سنتيمتر في الرغوة.

ثم ضع العوامات في نظام الزراعة المائية. بعد خمسة أيام من الزراعة، اسحب الشتلات بلطف من الفرميكوليت. ضع الشتلات على الفور في حاوية من الماء لمدة 30 دقيقة لإزالة الفيرميكوليت الزائد وتليين البيركرب المتبقي.

عندما تكون الجذور الأولية الناشئة مرئية، قم بإزالة البيرتار باليد حسب الضرورة. نقل الشتلات داخل أصحاب البذور إلى العوامات رغوة البوليسترين المعدة في نظام الزراعة المائية. تنمو النباتات في الزراعة المائية لمدة يومين.

السماح للمواد الكيميائية من مكتبة مجمع صغير ذوبان في درجة حرارة الغرفة. تسمية ستة capless اثنين من المليلتر microtubes لعلاج التحكم السلبي، وثلاثة أنابيب لعلاج ABA، والنهائي 60 أنابيب لتحليل آثار المواد الكيميائية 20 من الفائدة في ثلاث ية. إضافة 10 ميكرولترات من كل مادة كيميائية في كل من أنابيب الاختبار، 10 ميكرولترات من 10 ملليمترات ABA وكبريتيثيل أكسيد في أنابيب ABA الثلاثة، و 10 ميكرولترات من سلفوكسيد ثنائي الفينيل في أنابيب التحكم الستة.

ثم مزيج بعناية 990 ميكرولترات من 10 ملليمولار MES هيدروكسيد البوتاسيوم في كل أنبوب. ضع الأنابيب في رف أنبوب مع التحكم الإيجابي والسلبي والأنابيب التجريبية الموزعة بالتساوي داخل الرف لحساب التحيز المتصلة بالموضع. لإعداد كاميرا التصوير الحراري، قم أولاً بتركيب الكاميرا على حامل نسخة وتوصيل جميع الكابلات بجهاز كمبيوتر محمول.

قم بتشغيل الكاميرا قبل تشغيل الكمبيوتر المحمول وافتح برنامج تحليل التصوير الحراري. لضبط معلمات التسجيل، قم بلفة الماوس فوق الزر تسجيل للسماح بتحديد رمز مفتاح الوجع ضمن إعدادات السجل وتحديد وضع السجل المناسب والخيارات. لمعالجة الشتلات، رفع بعناية حامل البذور وتراجع بسرعة الجذر في الطبق الضحلة التي تحتوي على الماء.

قطع الجذر الأساسي لكل شتلة تحت الماء 0.8 إلى سنتيمتر واحد تحت الطرف الأكثر القاعدية من حامل البذور لمنع الفرد وإدراج النبات قطع حديثا في أنبوب واحد من المواد الكيميائية. عندما تم نقل جميع الشتلات، ضع النباتات تحت كاميرا التصوير الحراري وتأكد من أن جميع النباتات تقع ضمن مجال رؤية الكاميرا. لتركيز الكاميرا على سطح الـ cotyledons، اضغط على Control Alt A وانقر فوق تسجيل فيلم.

سيتم فتح نافذة جديدة تؤكد التسجيل. بعد ساعة إلى ساعتين، أوقف التسجيل. لتحليل البيانات، افتح ملفات seq الصحيحة ثم أوقف الفيلم مؤقتًا.

انقر فوق إضافة منطقة مؤشر قياس من الفائدة ثلاثة ثلاثة بكسل رمز وتحريك الماوس فوق وسط كوتيليدون من المصنع الأول. انقر على اليسار على الصورة لتسمية كوتيليدون. تسمية كوتيليدون الثاني من النبات الأول في نفس الطريقة.

عندما تم تسمية كافة النباتات مع اثنين من المؤشرات، انقر فوق مناطق تحرير رمز الفائدة وانقر بزر الماوس الأيمن اضغط على الاستمرار والتمرير لتحديد كافة المناطق ذات الاهتمام. بعد ذلك ، لفة الماوس فوق رمز عارض الإحصاء وتحديد مؤامرة الزمنية. سيتم فتح نافذة جديدة.

تشغيل الفيلم، سيتم تعبئة الرسم البياني مع البيانات. ثم في نافذة الرسم البياني، انقر فوق السهم المزدوج لفتح قائمة جديدة وانقر فوق أيقونة حفظ لحفظ البيانات. استخدام صبغة حمراء اريثروسين باء يدل على قدرة المواد الكيميائية التي يمكن استيعابها بشكل واضح من خلال قطع الجذر في كوتيليدونز من شتلة عباد الشمس في غضون 10 دقائق.

عندما يتم التعامل مع النباتات مع ABA، يتم الكشف عن زيادة في درجة حرارة الأوراق في كوتيليدونس عباد الشمس في غضون 30 دقيقة التي ترتبط مع الانخفاض في فتحة الفم واتلومول. بالإضافة إلى ذلك ، لوحظ ارتفاع درجة الحرارة الورقية بعد 15 دقيقة من العلاج مع 10 ميكرومولار ABA و 20 دقيقة بعد العلاج مع خمسة ابا ميكرومولار مما يدل على أن قياس درجة حرارة الأوراق عن طريق التصوير الحراري هو وكيل جيد لقياس فتحة الفم والتسخير. في هذه التجربة التمثيلية، يسمح العلاج الإحصائي القياسي القائم على النقاط بتحديد المواد الكيميائية التي تعزز إغلاق أو فتح الفم.

لقياس آثار المركبات على النتح، من المهم أن تنمو النباتات في ظل الظروف المثلى للضوء والرطوبة ودرجة الحرارة. يمكن تطبيق هذا البروتوكول على معظم dicots. ويمكن أيضا أن تستخدم لتقييم تأثير المركبات الجديدة على أداء التمثيل الضوئي، على سبيل المثال عن طريق قياس فلورية الكلورو.