فبراير 22, 2020
أحد الجوانب الأساسية لتقييم رفاهية الحيوانات في الأسر هو السؤال عما إذا كانت الحيوانات لديها ما تريد. هنا ، نقدم بروتوكولًا لتحديد تفضيل السكن في سمك الحمار الوحشي(Danio rerio)فيما يتعلق بوجود / عدم الإثراء البيئي والوصول إلى تدفق المياه.
وهذا البروتوكول يعطينا فهما أفضل لما تريده الأسماك، من خلال النظر في الخيارات التي تتخذها فيما يتعلق بتفضيلات الموائل، وهو أمر أساسي لرفاهها. ويمكن بسهولة تكييف هذا البروتوكول للنظر في مجموعة متنوعة من العوامل البيئية المختلفة، بما في ذلك الحصى مقابل الركيزة الرملية، والنباتات الحية مقابل البلاستيك، أو حتى عبر أنواع مائية مختلفة. لإقامة جهاز تفضيل، واستخدام خزان تجريبي مصنوع من البلاستيك الأبيض مبهمة، وتقسيمها إلى أربع مناطق مع الجدران المصنوعة من الاكريليك، ثابتة في مكان مع تسرب السيليكون.
وضع مواد التخصيب المناسبة في كل منطقة وفقاً لبارامترات الموئل المحددة التي سيتم اختبارها. على سبيل المثال، تشمل ركائز رملية مقابل ركائز صخرية، والنباتات الاصطناعية مقابل الملاجئ، أو تدفق المياه مقابل النباتات الاصطناعية. إذا كان تدفق المياه لاستخدامها كمعلمة الفائدة، ووضع مضخات صغيرة لتوريد الطائرات من المياه في الخزان وتعيين المضخات في سرعة محددة، بحيث أنها توفر تدفق مستمر وموجه من المياه على أساس الأنواع ذات الاهتمام الإيكولوجية وتاريخ الحياة.
في وسط الخزان التجريبي، يكون الساحة المركزية حيث سيتم تسليم الطعام. وينبغي أن يكون الوصول إلى الساحة المركزية من كل منطقة من خلال فتحة صغيرة في الجدران الفاصلة التي هي كبيرة بما يكفي، لأنواع الفائدة، للتنقل بين المناطق دون عوائق، ولكن صغيرة بما يكفي للحد من أي الإشارات البصرية الأسماك قد تواجه من مناطق أخرى. وضع مرشح حيوي وسخان في كل ركن من أركان الخزان خارج المنطقة التجريبية، حتى لا تعكر صفو تدفق المياه وضمان درجة حرارة المياه ثابتة عبر جميع المناطق.
قم بإعداد أي خزانات تجريبية إضافية كما تمليها المساحة ، مما يضمن أن جميع الدبابات المتماثلة لديها شروط موحدة. ضع الكاميرات على حوامل، مباشرة فوق كل خزان تجريبي، بحيث تكون جميع المناطق مرئية. بعد التأكد من أن بطاقات الذاكرة لديها مساحة كافية للتسجيل، تعيين إضاءة الغرفة على دورة تدريجية لمدة 12 ساعة، الضوء / الظلام، لمحاكاة شروق الشمس وغروبها.
وحدد درجة حرارة الماء إلى 25، زائد أو ناقص درجة مئوية واحدة. الحفاظ على الأسماك في خزانات المنزل عندما لا يتم اختبارها. في يوم التجربة، استخدم شباكين لالتقاط جميع الأسماك الاختبارية بسرعة من خزاناتها المنزلية، ووضعها في الساحة المركزية للدبابات التجريبية في غضون 30 ثانية من الالتقاط.
في الأيام الأولى إلى الرابعة، ستقضي الأسماك بعض الوقت في التأقلم واستكشاف المناطق المختلفة. لا تقم بجمع البيانات في هذه الأيام. أثناء عملية التأقلم، إجراء اختبارات منتظمة لجودة المياه، واستبدال المياه إذا تم الكشف عن أي مشاكل.
لإطعام الأسماك، استخدم حلقة طعام عائمة، تعلق على جدار الساحة المركزية على سطح الماء، لتوصيل أغذية السمك التقشر إلى الأسماك. بعد 30 دقيقة من الوصول إلى libitum الإعلان، استخدم شبكة تراجع لإزالة بقايا الطعام من الخزان. في الأيام من خمسة إلى سبعة، قم بتشغيل الكاميرات، وسجل سلوكيات الأسماك لمدة ساعتين بعد كل تغذية مقررة في الصباح وبعد الظهر.
في اليوم الثامن، استخدم شبكة الإنخفاض لنقل جميع الأسماك إلى خزاناتها المنزلية. اعتمادا على كمية المياه مستنقع المتاحة، استبدال ما لا يقل عن ثلث المياه، في خزان تجريبي، مع المياه مستنقع العذبة للحد من أي آثار هرمونات الإجهاد على الأسماك والتكاثر اللاحقة. ثم، قم بإعداد الصهاريج التجريبية وفقا لجدول تناوب المنطقة لذلك الأسبوع، وتبدأ عملية الاختبار مع دفعة جديدة من الأسماك.
في نهاية كل يوم تسجيل، قم بتنزيل مقاطع الفيديو على جهاز كمبيوتر. واستخدام برامج الفيديو لحساب يدويا عدد الأسماك في كل منطقة، على فترات خمس دقائق، في كل فترة تسجيل ساعتين. لتحليل تفضيلات الموائل، حساب متوسط عدد الأسماك لكل منطقة لكل خزان متماثل.
للحصول على درجة تفضيل لاستخدام البنية، احسب مؤشر Jacobs'preference باستخدام الصيغة كما هو مبين. النظر في الأسماك التي دخلت في منطقة، عندما يعبر الجسم كله للأسماك من خلال فتح بين المناطق. لتحديد ما إذا كانت هناك أي تغييرات في معدل تبديل الأسماك بين المناطق ، خلال فترة المراقبة ، حساب عدد المرات التي تدخل فيها الأسماك كل منطقة من الساحة المركزية ، مقسومًا على إجمالي عدد الأسماك في الدقائق الخمس الأولى والأخيرة من كل فترة مراقبة.
وحساب بداية والانتهاء يعني معدل التبديل لكل خزان النسخ المتماثل. باستخدام البرامج الإحصائية، إجراء التحليل الإحصائي ذات الصلة، مثل ANOVA ذات اتجاه واحد، مع مؤشر تفضيل كمتغير تابع والمنطقة كمتغير تنبؤ، واختبار t المقترنة على معدل التبديل المتوسط للبدء والتشطيب لكل خزان. لمقارنة كل منطقة مع منطقة أخرى، تطبيق اختبار Multi-comparison multi في Toey بعد المخصص.
في هذه التجربة التمثيلية، أظهرت أسماك الحمار الوحشي أعلى تفضيل لمنطقة الإثراء والتدفق، وتجنبت منطقتي التدفق فقط والسهل، حيث قضى المزيد من الوقت في الساحة المركزية. وبالإضافة إلى ذلك، انتقلت أسماك الحمار الوحشي بين مناطق الموائل المختلفة في كثير من الأحيان في بداية فترة المراقبة أكثر مما كانت عليه في نهاية المطاف. ومن الأهمية بمكان أن يتم الحفاظ على ظروف موحدة، مثل الضوضاء الخارجية، أو الحركة، وكيمياء المياه، أو مستويات الضوء عبر خزانات التكاثر.
ويمتد اختبار التفضيل إلى محاولة فهم الكيفية التي تؤثر بها الجوانب المختلفة للإثراء البيئي على قرارات الفرد. ولكن أيضا مفيد لدراسات الإثراء البيئي المقارنة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
يوفر هذا البروتوكول رؤى حول تفضيلات موطن أسماك الزرد (Danio rerio)، مع التركيز على رفاهيتها في الأسر. من خلال تقييم اختياراتهم فيما يتعلق بالإغناء البيئي وتدفق المياه، يمكن للباحثين فهم احتياجاتهم بشكل أفضل.
Assessing habitat preference in aquatic models supports target validation by revealing biologically relevant environmental conditions that influence behavior and physiology. This method enables mechanistic de-risking in preclinical models by identifying enrichment factors that reduce stress-induced variability. Standardized preference testing improves translational continuity between discovery and preclinical stages through reproducible, welfare-informed model systems.
The method integrates into discovery biology workflows by informing housing standards that reduce noise in phenotypic screening and improve data reliability across replicate studies.