اتخاذ الخطوة التالية: تقويم العظام العصبية هند نموذج لزرع الأطراف لتعظيم الانتعاش الوظيفي في الفئران

هذا الفيديو سوف توفر وصفا مفصلا، وكيفية إجراء الأطراف الخلفية اليمنى العظام، الفئران زرع منتصف الفخذ. يتم بتر الطرف الخلفي الأيمن للجرذين المانح على مستوى منتصف الفخذ ، ثم يتم تخزينه على الجليد. كما يتم بتر الطرف الخلفي الأيمن للجرذين على مستوى منتصف الفخذ.

ثم يتم إرفاق طرف الفئران المانحة إلى الجرذ المتلقي. سوف نُصف كيفية إعادة ربط العظام والشريان والوريد والأعصاب والعضلات وأنظمة الجلد. زرع الأطراف، وبشكل أكثر تحديدا، زرع الأوعية الدموية المركبة، VCA، لديه وعد علاجي واسع.

لكنها محدودة حاليا من قبل التقنيات، والمناعة، وضعف الانتعاش العصبي الوظيفي. يؤكد نموذجنا على التقنيات الدقيقة التي تم اختبارها من وقت لآخر، مثل أوعية الأوعية الدموية المخيط يدويًا والتفكيك العصبي. لقد قمنا بأكثر من 200 من هذه العمليات الجراحية في أكثر من عام.

على الرغم من أن هناك منحنى التعلم الأولي إلى الجراحة الدقيقة بداية، باستخدام هذا الفيديو لمعرفة طريقتنا والالتزام بهم لممارسة مكرسة، أي جراح الصغرى سوف تكون قادرة على السيطرة على هذا النموذج. أجريت جميع التجارب وفقا لدليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية التابعة للمعاهد الوطنية للصحة، المعاهد القومية للصحة، وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة نورث وسترن. تم تنفيذ الإجراءات المحددة على بروتوكول IS 00001663.

اختر فأرًا يتراوح عمره بين ثمانية أسابيع و16 أسبوعًا يزن ما بين 250 و400 جرام في وقت الجراحة. الحث التخدير العام مع 5٪ isoflurane من خلال المبخر قبل تقليم الفراء الطرف الخلفي للجرذ. باستخدام مخروط الأنف للحفاظ على التخدير بين اثنين إلى 2.5٪ وضع الفئران على لوحة التشغيل مع سخان تحتها.

تطهير الجلد بلا شعر مع 70٪ فرك الكحول وحماية المجال الجراحي مع الشاش العقيم. باستخدام المجهر الجراحي المجهري المناسب والأدوات المجهرية الموضحة هنا ، إلى جانب سهولة الوصول إلى القطبين والكهرباء الاحتكارية ، ستكون مستعدًا لبدء التشريح. استخدم مقصًا لإجراء شق ٍ طرفي وبشري حول الطرف الخلفي الأيمن.

تبدأ في تجعد الاربي فورا في نفس مستوى تقريبا مثل الرباط الاربي وتمديد الظهري الجانبي لإكمال شق المحيطي. ثم فضح الطبقة العضلية مباشرة تحت الشق ، وتشريح وكوي الأوعية الفقارية السطحية ، والتي تؤدي من الطبقة العضلية إلى رفرف الجلد القريب الذي تم إنشاؤه للتو. تعكس رفرف قريب superomedially إلى الرباط الأربية والجلد القفر رفرف إلى الركبة.

استخدام الأسلاك الداحر أو الشاش المدلفن للمساعدة في فضح الحقل. لاحظ أن التشريح الأريني للجرذ يشبه البشر؛ من الجانبي إلى الوسط يكمن العصب والشريان والوريد. تشريح العصب الفخذي، وتقسيمه بشكل حاد في الرباط الاربي القريب إلى التشعب، إذا كان ذلك ممكنا.

تراجع العصب المنقسم دون المستوى، والحفاظ عليه بأمان بعيدا عن الطريق، مغطاة تحت الشاش الرطب. تحول الانتباه إلى الشريان الفخذي والوريد استخدام أربعة سنتيمترات طويلة 7-0 ربطات العنق الحريرية لسحب أحتواك الأوعية بدلا من التعامل معها مباشرة. إيلاء اهتمام وثيق الآن سوف تحسن النتيجة الخاصة بك anastomotic النهائي.

Ligate جميع فروع الأوعية الفخذية مع 7-0 علاقات الحرير. تقسيم الفروع بين الروابط. وتشمل الفروع الشريانية والفورية التي تتطلب تقسيم الحرقف السطحي والأوعية العضلية.

الحرقف السطحي هو عادة أكبر ويبدو أن الغوص العميق كما هو الحال مع الفخذ profunda في البشر، ولكن profunda غائبة في الفئران. فروع أكثر شطرا من الأوعية الفخذية، مثل أعلى التشين والفصالج لا تتطلب عادة الانقسام. الآن ligate الشريان الفخذي مع 7-0 العلاقات الحريرية كما أقرب إلى الرباط الأربيني ممكن وتقسيم بين العلاقات.

على غرار الشريان، ligate وتقسيم الوريد الفخذ. تعكس كلا من الشريان والوريد دونية، بأمان للخروج من الطريق، مغطاة تحت الشاش الرطب جنبا إلى جنب مع العصب الفخذي غطت سابقا. تشريح مجموعات العضلات البطنية، مع الحرص على الكي أي وعاء مرئية التي تنشأ.

الاهتمام بهوس الآن سوف يقلل من فقدان الدم المتلقي أثناء إعادة بروفة لاحقاً. عميق لمجموعات العضلات البطنية، وتحديد وتقسيم حاد في العصب الوركي القريب إلى فروعه. فروع الوركية الثلاثة عادة ما تكون مرئية، التابية، و peroneal وsural.

وينبغي الحفاظ على الثلاثة في الطرف المانح. لا ينظر فرع الجلد الرابع عادة في هذا التشريح. الانتهاء من تقسيم مجموعات العضلات البطنية والعضلة الظهرية المتبقية على مستوى منتصف الفخذ مع الهباس الدقيق.

قد يكون من الضروري التراجع عن الوسيط الطرف لاستكمال تقسيم العضلات. احول عظم الفخذ في منتصف العمود باستخدام منشار دوار لاسلكي محمول. الطرف الآن خال من المتبرع.

بعد إزالة الكسب غير المشروع من الطرف من المتبرع ، قطع النهايات الحريرية المربوطة من الشريان الفخذي الجانبي للكسب غير المشروع وجذوع الوريد ، وبالتالي إعادة فتح الأوعية. إدراج angiocatheter 24 قياسا في جذع الشريان الكسب غير المشروع وتدفق الكسب غير المشروع مع 250 وحدة دولية من الهيبارين المخفف في 5 ملليلتر من المالحة الطبيعية الجليد الباردة، مع الحرص على مشاهدته يتدفق من الوريد المفتوح. ببطء، برفق دافق الكسب غير المشروع لمدة ثلاث دقائق تقريبا.

قد يؤدي التنظيف القوي الزائد إلى تلف بطانة الغدد. ضع الكسب غير المشروع في طبق ملحي مبرد متداخل في دلو ثلج حتى الزراعة. القتل الرحيم الجرذ المانح مع استئصال الصدر الثنائي.

تبدأ جراحة المتلقي على غرار جراحة المتبرع ، تخدير الجرذ ، تقليم الفراء ، مما يجعل شقًا ظرفيًا في التجعد الإربي ، مما يعكس رفرف الجلد ، وتشريح العصب الفخذي والشريان والوريد. وربط نفس الأوعية الفرعية كما سبق وصفه. ومع ذلك، خلال هذه العملية، تقسيم العصب الفخذي أكثر من distally للمتبرع، ولكن بالوكالة إلى التشعب إذا كان ذلك ممكنا.

تقسيم وتحرير الشريان الفخذي والوريد ومشابك لهم على التوالي على مستوى الرباط الإربي مع المشابك البلدغ المجهرية. مواصلة عملية جراحية كما وصف سابقا، وتقسيم عضلات تأييد البطن من الفخذ في مستوى منتصف الفخذ مع هيموسات دقيقة، في حين سحب الوسيط الطرف حسب الضرورة. تحديد وتقسيم أقرب عصب الوركي إلى نقطة الفرع، ثم نقل عظم الفخذ في منتصف رمح باستخدام المنشار الدوار.

إزالة المتلقي الحق الأصلي الطرف الخلفي والتخلص بشكل مناسب وفقا للمبادئ التوجيهية المحلية رعاية الحيوان واستخدام لجنة. من المهم جدا في هذه المرحلة إلى رفض isoflurane إلى واحد إلى 1.5٪ من خلال مخروط الأنف. الكثير من التخدير خلال هذا الجزء الأقل إيلاما من الإجراء سيؤدي إلى وفاة الفئران.

لقد حان الوقت لتتّبّي العظام معاً باستخدام المنشار الدوار المحمولة، حلق أي مخالفات من كل من المانح والمتلقي قطع الفخذ ينتهي. قطع نهاية محور إبرة 18 قياس، والتي سوف تصبح قضيب داخل عظم الفخذ intramedullary.

قبل التلاعب في العظام، ضعي كمية صغيرة من شمع العظام على الطرف الذي يقطعه المتلقي من عظم الفخذ لتقليل نزيف النخاع أثناء عملية التهجم. Coapt عظام الفخذ المانح والمتلقي باستخدام إبرة قياس 18 كقضيب داخل الullary. بعض القوة ضرورية، ولكن لا ream إما العظام بقدر ما لكسر القشرة.

حسب الحاجة، قم بإزالة الإبرة وتقليمها إلى طول غير مناسب بحيث تناسب كلتا العظمتين بسلاسة فوق الإبرة دون أن تظهر إبرة بين العظم. وضع دعم صغير مثل وسادة من الشاش أو صخرة صغيرة أو طين النمذجة تحت الطرف المانح لإبقائه بعيدا عن التوتر. إعادة تنشيط مجموعات العضلات البطنية مع 8 إلى 10 انقطاع بسيطة 5-0 الغرز البوليجلاكتين بحيث لا تدور الكسب غير المشروع حول إبرة الفخذ.

وهذا يعطي استقرار الطرف ل anastomoses. الآن تبدأ anastomoses. ري دوريا الكسب غير المشروع و الحقل الجراحي مع المالحة الجليد الباردة لأفضل التصور والحد من إصابة ريوية.

محاذاة الشرايين الفخذية المانحة والمتلقية وعظمة الشرج بطريقة نهاية إلى نهاية باستخدام خياطة النايلون 10-0 البسيطة المتقطعة، وتجنب كل من التوتر والارتجال. يتطلب الشريان ما معدله ست خياطة. على غرار الشريان، يتم استئصال الأوردة الفخذية للمتبرع والمتلقي بطريقة من النهاية إلى النهاية.

يتطلب الوريد من ستة إلى ثمانية خياطة. الرى الملحي البارد السخي ، وتقنية التعامل مع الأوعية الأذينية ، وترك ذيول طويلة لتكون بمثابة خياطة للبقاء على سحب السفينة هي أدوات مهمة للانغاءات المجهرية الفعالة. ضع كمية معتدلة من مسحوق السليلوز الهدسية على كل من أنستولوز، ثم قم بإزالة المشابك الميكروسرجية القريبة على الوريد والشريان.

فحص كل من anastomoses لباتة جيدة وتدفق. استخدام القطن مسحة العصي إلى حث بلطف الوريد وتفتيش ل hemostasis جيدة على كل من أنستوبوس. عندما يتم تأكيد كل من anastomoses مرضية, تقليم أي المتبقية طويلة البقاء ذيل خياطة لتتناسب مع الآخرين.

إعادة وضع الجرذ إلى موقف اليسار متحرر الجانب، واستخدام الكهربائية الليبرالية لتحقيق الهفوات الدقيق من أي نزيف العضلات reperfusion. يتم تحويل الانتباه إلى أنستوموز العصب مرة واحدة يتم ضمان هضم العضلات. إعادة اإيصال مجموعات العضلات الظهرية التي تقع مباشرة تحت العصب الوركي مع انقطاع بسيطة 5-0 خياطة البوليجلاكتين.

تقليم الظهر أي نهايات قطع العصب التي تظهر خشنة. إعادة تنشيط العصب الوركي مع 10-0 خياطة النايلون تسعى لدغات epineural. ثمانية إلى 10 الغرز انقطاع بسيطة عادة ما تكون كافية.

إعادة اِيعيدُ تنشيط مجموعات العضلات الظهرية المتبقية مع 5-0 خياطة بوليجلاكتين. ثم أغلق الجلد الظهري مع 4-0 البوليجلاكتين المستمر تشغيل خياطة. إعادة وضع الجرذ لوضعية الوبين ، وإعادة تنشيط العصب الفخذي مع خياطة النايلون 10-0 ، مرة أخرى ، والسعي من أجل لدغات epineural.

اثنين إلى ثلاثة خياطة انقطاع بسيطة عادة ما تكون كافية. أغلق الجلد البطني المتبقي بنفس الطريقة التي يتم بها الجلد الظهري. تجنب الذيل خياطة الزائدة، والتي يمكن أن تكون مزعجة للجرذ مستيقظا مرة واحدة.

بمجرد خروج الحيوانات من نافذة ما بعد الجراحة مباشرة ، يمكن اختبارها للتعافي العصبي. يتم استخدام اختبار Hargreaves لاختبار الإحساس الحراري. ضع الجرذ في حاوية الاختبار وسمح له بالتأقلم لمدة 20 دقيقة.

تم تأكيد نظافة زجاج الجهاز، وتأكد أن مصدر الحرارة يعمل بإصبع المحقق. قبل الاختبار، تأكد من أن الجرذ مستيقظ ويتم وضع مخلب اختباره فوق كاشف الحركة بالأشعة تحت الحمراء. نقل الطاقة الحرارية في مستوى كثافة 90.

يتم تسجيل تأخير الوقت في الحيوان تتحرك مخلبه بعيدا عن مصدر الحرارة. إذا لم يحدث أي حركة في غضون 20 ثانية، يتم إحباط الاختبار لمنع الإصابة. الحصول على خمس تجارب لكل طرف تم اختباره، باستثناء أعلى وأدنى قيمة قبل حساب متوسط وقت زمن زمن السحب لكل.

هنا يصور تصميم المنطوق في شكل الكرتون. يتم بتر الطرف الخلفي الأيمن لكل من الجرذان المانحة والمتلقية على مستوى منتصف الفخذ كما المقطع الوركي. يجب إعادة توصيل الشريان الفخذي والوريد والأعصاب، وكذلك العصب الوركي وعظم الفخذ في جراحة المتلقي.

ويمكن استخدام هذا النموذج لإظهار آثار البقاء على قيد الحياة التفاضلية من قمع المناعة واستراتيجية زرع. مع هذه التقنية، البقاء على المدى الطويل يمكن تحقيقه. ويمكن استخدام النموذج للتحقيق في الانتعاش العصبي الحسية, التي قد تكون واضحة من قبل أربعة أسابيع بعد العملية الجراحية.

يمكن أيضاً استجواب وظيفة المحرك باستخدام منصة تحليل مشية. هنا، لقد قدمنا منصة نموذج الفئران مع خصائص البقاء على قيد الحياة مواتية، والتي نستخدمها للتحقيق الانتعاش الحسية والحركية كما رأينا في الأرقام الإجراء. زرع الأطراف تحت الفئة الأوسع من VCA، زرع المكونات الوعائية لها الوعد العلاجي المطبق على نطاق واسع لم تتحقق بعد.

حواجز الطرق الرئيسية خط المناعة الحالية وتقنيات الانتعاش العصبي. تطوير تقنيات جديدة سوف تعتمد على مرونة, قوي, والنمذجة الحيوانية استنساخ. وباستخدام هذه المنصة، نأمل أن يتمكن المحققون من النهوض بأوجه متعددة لزراعة الأطراف.

شكراً لكم على المشاهدة وحظاً سعيداً في خطواتكم التالية.