إنشاء احتشاء بونتين الحاد في الفئران عن طريق التحفيز الكهربائي

نحن نقدم بروتوكولا لإقامة احتشاء في البون من الفئران. هذا البونتين احتشاء نموذج الفئران كان بسهولة تنفيذها، استنساخها بسهولة، ونموذج ناجح للغاية. ويمكن استخدام التحفيز الكهربائي لجعل احتشاء في أي منطقة أخرى في الدماغ مثل المهاد.

الناس الذين يرغبون في أداء هذا النموذج يجب أن تتعلم الحكم الذاتي pontine قبل التجربة. قبل الجراحة، قم بوزن الفئران وتقييم أدائها العصبي وفقًا للاختبارات السلوكية كما هو موضح في النص المصاحب. سخني وسادة التدفئة إلى 37 درجة مئوية مباشرة قبل التخدير وأرفق مثقاب الجمجمة بالمدرج على الإطار المجسّم.

تأكيد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في الجرذ المُقصَّر الأول، ثم قم بزأجر على إطار مجسم في موضعه المُرتَب على لوحة التدفئة. ضع قضبان الأذن فوق قناة الأذن لتأمين الرأس، مع الحرص على أن يتم الاحتفاظ بالجمجمة أفقيًا لتجنب أي انحراف للحقن. تطبيق مرهم على عيون الحيوان واستخدام ماكينة حلاقة صغيرة لإزالة الشعر من الجمجمة.

استخدم علامة لرسم خط طوله ثلاثة سنتيمترات على طول خط منتصف الجمجمة من خط الكانثوس الجانبي الثنائي إلى 0.5 سنتيمتر خلف الخط الخلفي واستخدم مشرطًا لإجراء شق في منتصف الطريق على طول الخط المميز. استخدام مسحة القطن لإزالة أي دم ووضع قطعة من الشريط الجراحي على كل جانب من رفرف الجلد لفضح الجمجمة. استخدام مسحة جديدة غارقة مع كلوريد الصوديوم 0.9٪لإزالة بلطف أي نسيج الضام من الجمجمة وتحديد موقع البريغما.

استخدام غرامة تلميح القلم علامة للإشارة إلى نقطة مركزية من bregma كنقطة الأصل، ووضع الحفر في الأمامي الأمامي ستة ملليمترات، اثنين ملليمترات متوسطة الجانب. استخدام الحفر لتنفيذ بعناية على استئصال القحف قطرها ملليمتر واحد. بعد ذلك، استبدلت الحفر بمسبار قياس 22 مع غاد معزول مع طرف وضع اثنين ملليمتر فوق الطرف القريب من العماد.

أدخل الأوراق سبعة ملليمترات في الدماغ وتقدم المسبار على طول الغدغ حتى يكون الجزء العلوي من المسبار تسعة ملليمترات تحت سطح الدماغ. قم بتوصيل الأقطاب الكهربائية بمحفز كهربائي وتوصيل الأنود بالمسبار. ثم الاتصال إلى الكاثود إلى أذن الجرذ.

بعد ذلك، قم بتشغيل المحفز الكهربائي وتعيين عرض النبضة المفردة إلى 4، 050 مللي ثانية، والجهد إلى 50 فولت والتيار إلى أربعة ملليمبير. اترك المسبار في موضعه لمدة خمس دقائق بعد التحفيز قبل إزالة الجهاز من الدماغ. غطي استئصال القحف بأسمنت العظام واسمح للأسمنت بالجفاف قبل استخدام خيوط خياطة البولي أميد 4.0 لإغلاق الجرح.

بعد ثلاث أو أربع غرز، التعادل 2-1-1 عقدة جراحية قياسية. ثم حقن داخل الصفاق الفأر مع 250 ميكرولترات من البنسلين ومراقبة الفئران كل 15 دقيقة حتى مستيقظا تماما قبل إعادة الحيوان إلى قفصه. وفي هذا التحليل، خضعت ستة لعملية جراحية كما هو موضح، وعُوللت ستة كضوابط.

تم اشتقاق شرائح الدماغ في هذه الصور من فأر واحد لكل مجموعة. كشف التصوير بالرنين المغناطيسي أن الاحتشاء كان موجودا في أساس البون يحاكي الاحشاءات anterolateralالاشتي في المرضى البشر. بسبب استخدام غمد معزول ، لم يلاحظ احتشاء في القشرة أو المخيخ أو منتصف الفقر.

كما كشفت الصور الموزونة الانتشارية عن احتشاء البونتين الحاد. تم استخدام تلطيخ TTC لتأكيد احتشاء 24 ساعة بعد الجراحة. كما هو متوقع، كان حجم الاحتشاء أعلى بكثير في مجموعة الجراحة مقارنة بمجموعة التحكم.

تم قياس الدرجات السلوكية قبل وبعد الجراحة. بالمقارنة مع مجموعة التحكم، الجرذان مع احتشاء البونتين حلقت إلى اليسار. ولوحظت اختلافات كبيرة في لونغا، بيردرسون، ووضع الأطراف، وتوازن شعاع، وإزالة المواد اللاصقة somatosensory درجات الاختبار بين التشدق مع احتشاء بونتين وفئران المجموعة السيطرة.

أي منطقة محددة في الدماغ سوف تدمر بواسطة التحفيز الكهربائي