Name: إنشاء احتشاء بونتين الحاد في الفئران عن طريق التحفيز الكهربائي (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: تعلم بروتوكول إنشاء احتشاء بونتين الحاد في الفئران باستخدام التحفيز الكهربائي. يُمكّن هذا النموذج القابل للتكرار الباحثين من دراسة آليات السكتة الدماغية واختبار التدخلات العلاجية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

وقد حظيت هذه الدراسة بدعم مالي من المؤسسة الوطنية الصينية للعلوم (81471181 و81870933) إلى جيانغ ومؤسسة العلوم الوطنية الصينية (رقم 81601011)، مؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة جيانغسو (رقم. BK20160345) إلى J. تشو والبرنامج العلمي للجنة الصحة البلدية قوانغتشو (20191A011083) إلى تشيو Z.

تمت مراجعة البروتوكول والموافقة عليه من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات التابعة للمؤسسة التابعة للمستشفى الثانى التابع لجامعة قوانغتشو الطبية ، وهى مؤسسة معتمدة من قبل الرابطة . تم توفير الفئران من قبل مركز الحيوان في جامعة الطب الجنوبية.
1. الحيوان
<ol><li>استخدام الذكور البالغين Sprague-Dawley الفئران وزنها 250 ± 10 غرام.</li>
	<li>عند النقل، منزل الفئران لمدة أسبوع على الأقل قبل الجراحة تحت ظروف بيئية خاضعة للرقابة مع درجة حرارة محيطة من 25 درجة مئوية، والرطوبة النسبية من 65٪، و 12 ساعة / 12 ساعة دورة خفيفة / داكنة.</li>
	<li>توفير الغذاء والماء الإعلانية libitum.</li>
</ol>2. إنشاء احتشاء في الـpons
<ol><li>وزن الفئران قبل الجراحة وتقييم الأداء العصبي وفقا للاختبارات السلوكية الموضحة أدناه (القسم 3).</li>
	<li>سخني وسادة التدفئة مباشرة قبل التخدير.</li>
	<li>إرفاق الحفر الجمجمة إلى حامل على إطار stereotaxic.</li>
	<li>حقن intraperitoneally الفئران مع 50 ملغ / كغ الكيتامين و 5 ملغم / كغ xylazine. تحقق من عدم وجود استجابة إصبع إصبع.</li>
	<li>جبل الفئران على إطار stereotaxic في موقف عرضة. ضع قضبان الأذن فوق قناة الأذن لتأمين الرأس. تأكد من أن الجمجمة يتم الاحتفاظ أفقيا لتجنب أي انحراف من الحقن.</li>
	<li>الحفاظ على التخدير عن طريق ايزوفلوران (100٪ الأكسجين، 2.5٪ isoflurane) عن طريق مرفق مخروط الأنف stereotaxic للفئران مع منافذ مدخل ومنافذ مخرج. الحفاظ على درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية باستخدام وسادة التدفئة ومراقبة درجة الحرارة طوال العملية.</li>
	<li>استخدام مرهم العين لمنع تجفيف القرنية. استخدام ملقط لقرصة قليلا الكفوف لضمان عدم وجود استجابة للألم.</li>
	<li>حلق شعر الجمجمة مع ماكينة حلاقة صغيرة. تطبيق فرك الكلورهيكسيدين الجراحية بطريقة دائرية بدءا من موقع شق الجراحية وتناوب الخارج.</li>
	<li>جعل شق خط الوسط 3 سم مع مشرط من خط من canthus الجانبية الثنائية إلى 0.5 سم وراء فونتانيل الخلفي، والتي ينبغي أن تكون علامة قلم علامة الجراحية.</li>
	<li>استخدم مسحة قطنية لإزالة الدم.</li>
	<li>ضع قطعة من الشريط الجراحي وضعت على كل جانب من الجلد رفرف لفضح فروة الرأس (الشكل 1).</li>
	<li>إزالة بلطف الأنسجة الضامة من عظم الجمجمة مع مسحة القطن انخفض في 0.9٪ كلوريد. إذا لم تتم إزالتها، سوف تحصل على اشتعلت الأنسجة الضامة في الحفر.</li>
	<li>تحديد bregma. اختار النقطة المركزية من bregma كنقطة الأصل ووضع علامة عليه باستخدام غرامة تلميح قلم علامة الجراحية السوداء.</li>
	<li>ضع تمرينًا في 6.0 ملم AP، 2.0 ملم ML (يتراوح من 0.5 إلى 3.0 مم، الشكل 2A).</li>
	<li>إجراء استئصال القحف (1 ملم قطر) باستخدام الحفر التلقائي. المضي قدما بعناية، لأن هذه النقطة قريبة من الجيوب الأنفية الوريدية.</li>
	<li>إزالة الحفر من الإطار stereotaxic.</li>
	<li>ضع مسبار 22 G مع غد معزول في إطار مجسم(الشكل 3A). يجب وضع طرف المسبار 2 ملم فوق النهاية القريبة من العادم (الشكل 3A, B; الشكل 2 ب).</li>
	<li>تأكد من أن اغدغ يدخل الدماغ 7 ملم (7 ملم DV, الشكل 2B; الشكل 1C).</li>
	<li>تقدم المسبار على طول اغدغة (الشكل 1D) حتى غيض من التحقيق هو 9 مم تحت سطح الدماغ (الشكل 2D).</li>
	<li>توصيل الأقطاب الكهربائية إلى محفز كهربائي (الشكل 3C). ربط الأنود إلى التحقيق كما هو مبين في الشكل 1D. ربط الكاثود إلى الفئران (عادة إلى الأذن من الفئران).</li>
	<li>تشغيل محفز كهربائي وإعداد المعلمات التالية: عرض نبضة واحدة = 4,050 مللي ثانية; الجهد = 50 V؛ وتيار = 4 mA (الشكل 3C). أثناء التحفيز الكهربائي، سوف يظهر الجرذ يرتجف. في هذه الدراسة، لم يتم تشغيل الجهاز فئران مجموعة التحكم المستخدمة للاختبارات السلوكية، التصوير بالرنين المغناطيسي، و TTC.</li>
	<li>اترك المسبار في موضعه لمدة 5 دقائق بعد التحفيز.</li>
	<li>إزالة التحقيق من الدماغ (الشكل 1F).</li>
	<li>استخدم أسمنت العظام لتغطية استئصال القحف. السماح للأسمنت لتجف قبل الجرح خياطة.</li>
	<li>خياطة الجرح مع خيوط خياطة بولي أميد 4-0. بعد ثلاثة أو أربعة stiches، التعادل 2-1-1 عقدة جراحية قياسية.</li>
	<li>حقن الفئران مع البنسلين (0.25 مل، 80 وحدة دولية المخفف في 4 مل من المالحة) intraperitoneally لمنع العدوى.</li>
	<li>حقن الفئران تحت الجلد مع ميلوكسيكام بجرعة من 2 ملغ / كغ ثم كرر كل 24 ساعة.</li>
	<li>مراقبة الفئران كل 15 دقيقة حتى مستيقظا تماما وإعادتها إلى القفص مع وسادة التدفئة. توفير حرية الوصول إلى الطعام والماء حتى التضحية. ملاحظة: يجب أن تتبع جميع الإجراءات المبادئ الجراحية العقيمة. قبل الجراحة، ضعي فوق فرك وقناع جراحي وقفازات معقمة بعد فرك جراحي من اليدين. الحفاظ على المواد خياطة معقمة داخل الحقل العقيمة في جميع الأوقات.</li>
</ol>3. الاختبارات السلوكية
<ol><li>لونغا يسجل17<ol>
<li>ضع الفئران على سطح الطاولة.</li>
		<li>وسجل الدرجات على النحو التالي: 0 = لا يوجد عجز عصبي؛ 0 = نقص عصبي؛ 0 = نقص عصبي؛ 0 = نقص عصبي؛ 0 = نقص عصبي؛ 0 = نقص عصبي؛ 1 = الفشل في تمديد تماما forepaw contralateralral، وهو نقص عصبي بؤري معتدل؛ 2 = الدوران إلى اليسار، وهو نقص عصبي بؤري معتدل؛ 3 = السقوط إلى اليسار ، وهو عجز شديد في التنسيق ؛ 4 = لا يمشي عفوية ومستوى الاكتئاب من الوعي.</li>
	</ol>
</li>
	<li>بيردرسون النتيجة18<ol>
<li>عقد الفئران من الذيل والسماح forelimbs الوصول إلى طاولة. تسجيل الدرجات على النحو التالي: 0 = كلا الطرفين وصلت إلى الجدول; 1 = طرف واحد فقط يصل إلى الطاولة.</li>
		<li>وضع الحيوان على سطح خشن. تسجيل عشرات على النحو التالي: 0 = قبضة قوية على سطح خشنة مع مقاومة جيدة عندما دفعت; 1 = مقاومة طفيفة ينظر فقط في مخلب واحد; 2 = لا توجد مقاومة عند دفعها في اتجاه واحد.</li>
		<li>ضع الجرذ في منطقة مغلقة (18 في × 36 في) والسماح لها بالتجول بحرية. تسجيل الدرجات على النحو التالي: 0 = المشي على طول العلبة دون الدوران؛ 0 = السير على طول العلبة دون الدوران؛ 0 = السير على طول العلبة دون الدوران؛ 0 = السير على طول العلبة دون الدوران؛ 0 = السير على طول العلبة دون الدوران؛ 0 1 = المشي على طول العلبة مع الدوران؛ 2 = لا يمكن السير على طول العلبة ولكن يمكن أن دائرة; 3 = لا يمكن أن تتحرك كثيرا. استخدم مجموع درجات التقييم من كل مهمة كدرجة تقييم نهائية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>اختبار شعاع التوازن19<ol>
<li>تأكد من أن الجهاز يتكون من 3 سم و 70 سم شعاع طويل و 20 سم فوق الأرض. ضع صندوقًا مظلمًا في الطرف البعيد من الشعاع مع مدخل ضيق.</li>
		<li>وضع مولد الضوضاء البيضاء ومصدر الضوء الساطع في بداية الشعاع. واستخدمت الضوضاء والضوء لتحفيز الفئران لاجتياز شعاع ودخول مربع الهدف.</li>
		<li>إنهاء المحفزات عندما تدخل الحيوانات مربع مظلمة. تسجيل الكمون للوصول إلى مربع الهدف (في ثوان) وأداء hindlimb من الفئران عند اجتياز شعاع.</li>
		<li>تسجيل الدرجات لكل أداء على النحو التالي: 0 = أرصدة مع وضع ثابت; 1 = قبضات جانب من شعاع; 2 = العناق شعاع و1 أطراف يسقط من شعاع; 3 = العناق شعاع واثنين من أطرافه تقع من شعاع، أو يدور على شعاع بعد > 60 s; 4 = محاولات لتحقيق التوازن على شعاع ولكن يقع قبالة بعد > 40 s; 5 = محاولات لتحقيق التوازن على شعاع ولكن يقع قبالة بعد > 20 s; و 6 = يقع قبالة، أي محاولة لتحقيق التوازن أو التمسك شعاع بعد <20 s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>إزالة لاصقة اختبار somatosensory20<ol>
<li>ضع الفئران في مربع زجاج شبكي واضح والسماح لهم باستكشاف البيئة الجديدة لمدة 2 أو 3 دقائق.</li>
		<li>وضع 10 مم اللون الأخضر قطرها ملصق لاصق على السطح الداخلي لكل forelimb فوق الإبهام وعلى المعصم.</li>
		<li>ارجع الفئران إلى مربع زجاج شبكي.</li>
		<li>تسجيل الوقت للجرذ لإزالة التسمية الأولى وجميع التسميات الأخرى، على التوالي. السماح بحد أقصى 3 دقائق. وينبغي إجراء الاختبار 2x في التدريب.</li>
	</ol>
</li>
	<li>اختبار وضع الأطراف<ol>
<li>عقد الفئران في وضع أفقي ومنع الحركة.</li>
		<li>مرة واحدة الفئران يفقد الاتصال مع سطح الجدول (حركة الأطراف السلبية)، وتطبيق المحفزات اللمسية وروبروبيوبسيبي ل مخلب مع حافة الجدول.</li>
		<li>تقييم موضع مخلب (نجاح أو فشل) على حافة الجدول.</li>
		<li>تسجيل الدرجات على النحو التالي: 0 = لا موضع؛ 0 = لا يوجد موضع؛ 1= 10= 100= 100= 10= 0.5 = وضع غير مكتمل و/أو متأخر؛ 1 = الموضع الفوري والكامل.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. تأكيد فيركت بواسطة التصوير بالرنين المغناطيسي
<ol><li>إجراء التصوير بالرنين المغناطيسي 24 ساعة بعد الجراحة.</li>
	<li>تخدير الفئران بواسطة ايزوفلوران (5٪ للحث، 1٪ - 1.5٪ للصيانة).</li>
	<li>تأمين رأس الفئران في لفائف صفيف الدماغ الفئران وجنبا إلى جنب مع لفائف حجم الإرسال فقط.</li>
	<li>ضع الملف والجرذ في ماسح التصوير بالرنين المغناطيسي. تأمين الفئران داخل المهد باستخدام الأسنان والأذن القضبان.</li>
	<li>الحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية ± 0.5 درجة مئوية أثناء إجراء المسح بالرنين المغناطيسي باستخدام سترة حرارية الدائرة المغلقة.</li>
	<li>استخدم تسلسلاً تجريبياً لضمان الهندسة الصحيحة.</li>
	<li>جمع الأشعة T2-المرجح باستخدام تسلسل صدى سريع الدوران: صدى الوقت (TE) = 33 مللي ثانية; تكرار الوقت (TR) = 8000 مللي ثانية ؛ مجال الرؤية = 30 مم × 30 مم؛ مصفوفة الاستحواذ = 512 × 512؛ 50 شريحة؛ 0.4 مم سميكة.</li>
	<li>جمع أربع طلقات تدور صدى التصوير بلا تخطيط DWI بمسح: صدى الوقت = 30.5 مللي ثانية; وقت التكرار = 8000 مللي ثانية؛ المصفوفة = 96 × 96؛ مجال الرؤية = 25 مم × 25 مم؛ ثلاثة اتجاهات = x، y، z؛ القيم ب = 0 1,000 s/mm2 و 1,000 s/mm2; 50 شريحة محورية متجاورة؛ 0.4 مم سميكة.</li>
	<li>أعيدوا الفئران إلى القفص</li>
</ol>5. تأكيد infarct من قبل تلطيخ TTC
<ol><li>التضحية الفئران في نقطة زمنية وفقا للتصميم التجريبي. في هذه التجربة، ضحينا الفئران 24 ساعة بعد الجراحة.</li>
	<li>إعداد حل TTC 2٪ قبل التضحية. إضافة 0.2 مسحوق TTC 0.2 ز إلى 10 مل 0.01 م PBS (pH 7.4). نقل التخفيف إلى طبق 10 سم مغطاة ورق الفضة و اسخِر مسبقاً إلى 37 درجة مئوية في حمام مائي.</li>
	<li>تعريض الفئران إلى 5٪ isoflurane حتى فقدان الوعي. ثم، يعرض الجرذ إلى CO2 (20٪ -30٪ من حجم القفص في الدقيقة) حتى توقف التنفس، ثم الحفاظ على 2 دقيقة من التعرض CO2.</li>
	<li>استخدام العلامات التالية لتأكيد الموت: لا ارتفاع وسقوط الصدر، لا ضربات القلب واضح، وضعف لون الغشاء المخاطي، لا استجابة لقرصة إصبع قدم، تغيير اللون أو التعتيم في العينين.</li>
	<li>إجراء خلع عنق الرحم.</li>
	<li>تأمين الحيوانات عن طريق تسجيل الكفوف على منصة معقمة. إنشاء شق منتصف الخط من الترقوة إلى hypogastrium وشق الجانبي من xiphoid إلى اليسار على طول القفص الصدري. جعل قطع في الحجاب الحاجز أيضا على طول القفص الصدري وشق منتصف الصدر لفضح القلب.</li>
	<li>قم بتوصيل طرف إبرة (27 G) بمضخة ضخ تحتوي على 0.01 M PBS عند 4 درجات مئوية في البطين الأيسر. ملاحظة: تقدم الطرف على طول الحافة اليسرى من البطين لتجنب دخول الأذين. بدوره على مضخة الضخ لضمان تلميح في البطين الأيسر وقطع الأذين الأيمن. إذا كان السائل يستنزف من الأنف، فإن الطرف في الأذين ويحتاج إلى تعديل أو إعادة إدراجه.</li>
	<li>استخدام ما يقرب من 100 مل من 0.01 م PBS، والحفاظ على 4 درجة مئوية للضخ. إيقاف مضخة الضخ إلى أن يتحول الكبد إلى اللون الأبيض.</li>
	<li>قطع رأس الفئران وتشريح العقول كلها باستخدام مقص ملقط. إزالة أي ماء من سطح الدماغ مع ورقة النشاف.</li>
	<li>تخزين الدماغ كله في -80 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة (قطع أقسام الدماغ هو أسهل بعد التجميد). ملاحظة: يمكن تخطي هذه الخطوة إذا كان يمكن قطع أقسام الدماغ بشكل جيد دون تجميد.</li>
	<li>ضع الدماغ في المصفوفة مع الجانب الظهري.</li>
	<li>تحديد ثقب في سطح الدماغ كما هو مبين في الشكل 1G وإدراج شفرة الفولاذ المقاوم للصدأ 0.21 مم سميكة. عادة، أكبر منطقة احتشاء هو في الطائرة من التحقيق; وهكذا، ينبغي إدراج شفرة واحدة في هذه المنطقة.</li>
	<li>أدخل الشفرات الأخرى على فاصل زمني 2 مم.</li>
	<li>في وقت واحد إزالة ريش، في كل مرة، من المصفوفة ووضع الدماغ كله مع ريش في حل TTC في الطبق. إزالة ريش بعناية. ملاحظة: هنا، لم يتم إزالة أقسام الدماغ بسهولة من السائل لأن بعض ماطر بيا المتبقية في الأساس cranii تدخلت مع قسم. إذا بقيت أي أقسام في المصفوفة ، استخدم ملعقة صغيرة لنقلها إلى الطبق.</li>
	<li>ضع الطبق مع حل TTC وأقسام الدماغ في حمام مائي عند 37 درجة مئوية.</li>
	<li>تحقق من الطبق كل 5 دقائق وضمان عدم وجود تداخل بين المقاطع.</li>
	<li>إضافة 10 مل من 4% حل شبه شكلي إلى الطبق لإنهاء رد فعل TTC.</li>
	<li>توجيه المقاطع من الرسترالية إلى السد وأخذ الصور.</li>
</ol>6 - الإحصاءات
<ol><li>استخدم برنامج التحليل الإحصائي (على سبيل المثال، GraphPad Prism) لإجراء اختبار t-testالخاص بالطالب. ملاحظة: يتم التعبير عن كافة البيانات على أنها تعني ± SE. يتم تحديد الاختلافات بين المجموعات باختبارات t-tالخاصة بـ Student ذات الطرفين (p < 0.05 المعرّفة على أنها دلالة إحصائية).</li>
</ol>

<ol><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+local+inflammation+contributes+to+the+neuroprotective+effect+of+ginsenoside+Rb1+in+rats+with+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Suppression of local inflammation contributes to the neuroprotective effect of ginsenoside Rb1 in rats with cerebral ischemia.</a> Neuroscience. 202, 342-351 (2012).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-1906%2C+a+Novel+Regulator+of+Toll-Like+Receptor+4%2C+Ameliorates+Ischemic+Injury+after+Experimental+Stroke+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-1906, a Novel Regulator of Toll-Like Receptor 4, Ameliorates Ischemic Injury after Experimental Stroke in Mice.</a> Journal of Neuroscience. 37, 10498-10515 (2017).</li>
<li>McBride, D. W., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+Stroke+Animal+Models%3A+the+Permanent+MCAO+Model+Should+Be+the+Primary+Model%2C+Not+Transient+MCAO%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Precision Stroke Animal Models: the Permanent MCAO Model Should Be the Primary Model, Not Transient MCAO.</a> Translational Stroke Research. , (2017).</li>
<li>Liu, F., McCullough, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+model+in+rodents%3A+methods+and+potential+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+%26+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion model in rodents: methods and potential pitfalls.</a> Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2011, 464701(2011).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+with+less+damage%3A+intranasal+delivery+of+tetracycline-inducible+replication-defective+herpes+simplex+virus+type-1+vector+to+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A new approach with less damage: intranasal delivery of tetracycline-inducible replication-defective herpes simplex virus type-1 vector to brain.</a> Neuroscience. 201, 96-104 (2012).</li>
<li>Lopez, M. S., Vemuganti, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+Transient+Focal+Ischemic+Stroke+in+Rodents+by+Intraluminal+Filament+Method+of+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Modeling Transient Focal Ischemic Stroke in Rodents by Intraluminal Filament Method of Middle Cerebral Artery Occlusion.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 101-113 (2018).</li>
<li>Pais-Roldan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+assessment+of+recovery+from+coma+in+a+rat+model+of+diffuse+brainstem+tegmentum+injury%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">Multimodal assessment of recovery from coma in a rat model of diffuse brainstem tegmentum injury.</a> NeuroImage. 189, 615-630 (2019).</li>
<li>Merwick, A., Werring, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+circulation+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Posterior circulation ischaemic stroke.</a> The British Medical Journal. 348, 3175(2014).</li>
<li>Nogueira, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombectomy+6+to+24+Hours+after+Stroke+with+a+Mismatch+between+Deficit+and+Infarct%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Thrombectomy 6 to 24 Hours after Stroke with a Mismatch between Deficit and Infarct.</a> The New England Journal of Medicine. 378, 11-21 (2018).</li>
<li>Wilkinson, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+recanalization+of+basilar+artery+occlusion+in+a+previously+healthy+17-month-old+child%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurointerventional+Surgery%22%5BJournal%5D)">Late recanalization of basilar artery occlusion in a previously healthy 17-month-old child.</a> Journal of Neurointerventional Surgery. 10, 17(2018).</li>
<li>Huang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+Subtypes+and+Topographic+Locations+Associated+with+Neurological+Deterioration+in+Acute+Isolated+Pontine+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%3A+The+Official+Journal+of+National+Stroke+Association%22%5BJournal%5D)">Stroke Subtypes and Topographic Locations Associated with Neurological Deterioration in Acute Isolated Pontine Infarction.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases: The Official Journal of National Stroke Association. 25, 206-213 (2016).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-stent+restenosis+after+vertebral+artery+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">In-stent restenosis after vertebral artery stenting.</a> International Journal of Cardiology. 187, 430-433 (2015).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographic+location+of+unisolated+pontine+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurology%22%5BJournal%5D)">Topographic location of unisolated pontine infarction.</a> BMC Neurology. 19, 186(2019).</li>
<li>Banerjee, G., Stone, S. P., Werring, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+circulation+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Posterior circulation ischaemic stroke.</a> The British Medical Journal. 361, 1185(2018).</li>
<li>Wojak, J. C., DeCrescito, V., Young, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basilar+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3A+A+Journal+of+Cerebral+Circulation%22%5BJournal%5D)">Basilar artery occlusion in rats.</a> Stroke: A Journal of Cerebral Circulation. 22, 247-252 (1991).</li>
<li>Namioka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+infusion+of+mesenchymal+stem+cells+for+protection+against+brainstem+infarction+in+a+persistent+basilar+artery+occlusion+model+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Intravenous infusion of mesenchymal stem cells for protection against brainstem infarction in a persistent basilar artery occlusion model in the adult rat.</a> Journal of Neurosurgery. , 1-9 (2018).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+brain-derived+neurotrophic+factor+protects+brain+from+ischemic+insult+via+modulating+local+inflammation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intranasal brain-derived neurotrophic factor protects brain from ischemic insult via modulating local inflammation in rats.</a> Neuroscience. 172, 398-405 (2011).</li>
<li>Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessments+in+the+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experiments+in+Translational+and+Stroke%22%5BJournal%5D)">Functional assessments in the rodent stroke model.</a> Experiments in Translational and Stroke. 2, 13(2010).</li>
<li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keep+warm+and+get+success%3A+The+role+of+postischemic+temperature+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Keep warm and get success: The role of postischemic temperature in the mouse middle cerebral artery occlusion model.</a> Brain Research Bulletin. 101, 12-17 (2014).</li>
<li>Wen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+behavioural+tests+for+the+prediction+of+outcomes+in+mouse+models+of+focal+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Optimization of behavioural tests for the prediction of outcomes in mouse models of focal middle cerebral artery occlusion.</a> Brain Research. 1665, 88-94 (2017).</li>
</ol>

لا تضارب في المصالح.

توفر هذه الدراسة بروتوكولا لتوليد نموذج فئران البونتين الحاد. يمكن استخدام هذا النموذج للبحث عن التشخيص وإعادة التأهيل (بما في ذلك الألم المزمن بعد السكتة الدماغية) في مرضى السكتة الدماغية البونتين.
هناك عدة نقاط قوة لهذا الأسلوب. أولا، فإنه يوفر نموذج الفئران من احتشاء بونتين الحادة للدراسات المستقبلية. كما ذكر أعلاه، احتشاء البونتين هو نوع فرعي السكتة الدماغية الشائعة التي تلقت اهتماما أقل. وكان أحد أوجه القصور الرئيسية في أبحاث السكتة الدماغية عدم وجود نموذج احتشاء البونتين محددة. ثانيا ، ب...

منذ 1980s، وقد استخدمت على نطاق واسع في الانسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) نموذج الناجمة عن خيوط السيليكون في أبحاث السكتة الدماغية الأساسية1. كما استخدمت أساليب أخرى (أي خياطة فرع واحد من MCA2 والتشكيل البؤري المستحث ضوئياً). وقد تم استخدام هذه النماذج في نماذج السكتة الدماغية MCA، وساهمت بشكل كبير في التحقيقات في الآليات الفسيولوجية للمعالجة المرضية الكامنة والسكتة الدماغية المحتملة. على الرغم من وجود قيود على هذهالنماذجالتجريبية 3،4، وقد استخدمت هذه الأساليب العديد من المختبرات5،6. نماذج السكتة الدماغية MCA القائم على تمثل السكتة الدماغية في الدورة الدموية الأمامية; ومع ذلك، فقد حققت تقارير قليلة نماذج تحاكي السكتة الدماغية في الدورة الدموية الخلفية7.
هناك اختلافات كبيرة بين المسببات، والآليات، والمظاهر السريرية، والتكهن بين السكتات الدماغية الدورة الدموية الأمامية والخلفية8. ولذلك، لا يمكن تطبيق النتائج المستمدة من نماذج السكتة الدماغية الدورة الدموية الأمامية لسكتة الدورة الدموية الخلفية. على سبيل المثال، تم تمديد نافذة وقت إعادة الضخ للدورة الأمامية إلى 6 ساعة، مع جزء صغير من الدراسات تمتد إلى 24 ساعة استناداً إلى نتائج التصوير9. ومع ذلك، قد يكون الإطار الزمني لتداول الخلفية أطول من 24 ساعة، وفقا لتقارير سابقة10 وتجاربنا السريرية الخاصة. يجب دراسة هذه النافذة الزمنية الممدودة وإعادة الضخ وتأكيدها في النماذج التجريبية.
فيما يتعلق السكتات الدماغية الدورة الدموية الخلفية، احتشاء البونتين هو النوع الفرعي الأكثر شيوعا، وتمثل 7٪ من جميع حالات السكتة الدماغية الإقفاري11،12. وفقا لتضاريس الاحتشاء ، وتنقسم الاحشاء البونتين في الاحشاء معزولة وغير معزولة البونتين في الاحشاء13. يتم تصنيف احتشاءات البونتين المعزولة إلى ثلاثة أنواع استنادًا إلى الآليات الأساسية: مرض الشريان الكبير (LAD) ، مرض فرع الشريان الباسيلاري (BABD) ، ومرض الشريان الصغير (SAD). وقد استمدت معرفة آليات وتجليات وتكهن احتشاء البونتين من التحقيقات السريرية للحالات14. ومع ذلك ، كان نموذج القوارض يحاكي احتشاء البونتين أقل بحثًا.
في الدراسات السابقة، تم استكشاف إصابة tegmentum الدماغ المنتشر التي تنطوي على الـ pons7. حاولت إحدى المجموعات إنشاء نموذج احتشاء بونتين عن طريق ربط الشريان الباسيلاري (BA)15. مجموعة أخرى تستخدم 10-0 خياطة أحادية النايلون لligate انتقائيا أربع نقاط من مكتبة الإسكندرية القريبة بشكل انتقائي16. هذا النموذج يحاكي LAD، ولكن معظم الاحتشاء البونتين نتيجة من BABD وDD. بالإضافة إلى ذلك، فإن الربط الانتقائي لمكتبة الإسكندرية هو عملية جراحية معقدة ومعدل وفيات مرتفع.
تقدم هنا هو بروتوكول مفصل لسهلة الأداء، استنساخها بسهولة، وناجحة نموذج الفئران من احتشاء البونتين الحادة عن طريق التحفيز الكهربائي.

<table><tbody><tr><td>4-0 شفط</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>الأدوات الجراحية</td></tr><tr><td>شريط لاصق</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>الأدوات الجراحية</td></tr><tr><td>نظام التخدير الحيواني</td><td>RWD</td><td></td><td>ارتداء قناع عند استخدام النظام</td></tr><tr><td>الأسمنت العظمي</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>أداة</td></tr><tr><td>جراحية معالجة المشبك</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>الجراحية أداة</td></tr><tr><td>مقص الأنسجة العامة</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>أداة جراحية</td></tr><tr><td>IndoPhors</td><td>Guoyao من الصين</td><td></td><td>التعقيم</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD</td><td>217181101</td><td></td></tr><tr><td>جهاز صنع الآفة</td><td>شنغهاي Yuyan</td><td></td><td>صنع آفة</td></tr> نظام <tr><td>التصوير بالرنين المغناطيسي</td><td>Bruker Biospin</td><td></td><td>تأكيد الاحتشاء في الجسم الحي</td></tr><tr><td>حامل إبرة</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>أداة جراحية</td></tr><tr><td>Penicilin</td><td>Guoyao من الصين</td><td></td><td>مسبار الوقاية</td></tr> من <tr><td></td><td>العدوى Anke</td><td></td><td>بحاجة إلى بعض التعديل</td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>أداة جراحية</td></tr><tr><td>مقص</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td>أداة جراحية</td> شنغهاي Jinzhong <td></td></tr><tr><td>جهاز تجسيمي</td><td>RWD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>خياطة إبرة</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>أداة جراحية</td></tr><tr><td>الأنسجة عقد forcepts</td><td>شنغهاي Jinzhong</td><td></td><td>أداة جراحية</td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBW5177</td><td>لتأكيد الاحتشاء في المختبر</td></tr></tbody></table>

إنشاء احتشاء بونتين الحاد في الفئران عن طريق التحفيز الكهربائي

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

احتشاء بونتين هو النوع الفرعي الأكثر شيوعا في الدورة الدموية الخلفية، في حين أن هناك يفتقر إلى نموذج القوارض يحاكي احتشاء البونتين. تقدم هنا هو بروتوكول لإنشاء بنجاح نموذج الفئران من احتشاء البونتين الحادة. وتستخدم الفئران التي تزن حوالي 250 غرام، ويتم حقن مسبار مع غغم معزول في البون باستخدام جهاز ستيريو. يتم إنتاج الآفة عن طريق التحفيز الكهربائي مع نبضة واحدة. يتم استخدام نقاط Longa ، ودرجة بيردرسون ، واختبار توازن الحزمة لتقييم العجز العصبي. بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام اختبار الاستئصال المصمّم لإزالة المواد اللاصقة لتحديد وظيفة المُنَسِّيّة، ويُستخدم اختبار موضع الأطراف لتقييم اللياقة. ثم يتم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي لتقييم الاحتشاء في الجسم الحي، ويستخدم تلطيخ TTC لتأكيد احتشاء في المختبر. هنا، يتم تحديد احتشاء ناجح يقع في الأساس anterolateralالبصورة من البونات الرسترالية. في الختام، يتم وصف طريقة جديدة لإنشاء نموذج فئران احتشاء البونتين الحاد.

وخضعت ستة لبروتوكول الجراحة الموصوف أعلاه. مجموعة المراقبة كما هو مبين في الشكل 4 تتكون من ستة فئران. تم اشتقاق شرائح الدماغ الموضحة في الشكل 4 من جرذ واحد لكل مجموعة.
وأظهر المسح بالرنين المغناطيسي أن احتشاء كان موجودا في أساس البونات (الشكل 4A). منذ أن تم حقن المسبار 2 ملم إلى يسار خط الوسط ، تم تحديد مكان الاحتشاء بشكلٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍٍّيّ. هذا احتشاء يحاكي احتشاء البونتي...

هنا هو بروتوكول لإنشاء احتشاء البونتين الحاد في نموذج الفئران عن طريق التحفيز الكهربائي مع نبضة واحدة.

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

نحن نقدم بروتوكولا لإقامة احتشاء في البون من الفئران. هذا البونتين احتشاء نموذج الفئران كان بسهولة تنفيذها، استنساخها بسهولة، ونموذج ناجح للغاية. ويمكن استخدام التحفيز الكهربائي لجعل احتشاء في أي منطقة أخرى في الدماغ مثل المهاد.الناس الذين يرغبون في أداء هذا النموذج يجب أن تتعلم الحكم الذاتي pontine قبل التجربة. قبل الجراحة، قم بوزن الفئران وتقييم أدائها العصبي وفقًا للاختبارات السلوكية كما هو موضح في النص المصاحب. سخني وسادة التدفئة إلى 37 درجة مئوية مباشرة قبل التخدير وأرفق مثقاب الجمجمة بالمدرج على الإطار المجسّم.تأكيد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس في الجرذ المُقصَّر الأول، ثم قم بزأجر على إطار مجسم في موضعه المُرتَب على لوحة التدفئة. ضع قضبان الأذن فوق قناة الأذن لتأمين الرأس، مع الحرص على أن يتم الاحتفاظ بالجمجمة أفقيًا لتجنب أي انحراف للحقن. تطبيق مرهم على عيون الحيوان واستخدام ماكينة حلاقة صغيرة لإزالة الشعر من الجمجمة.استخدم علامة لرسم خط طوله ثلاثة سنتيمترات على طول خط منتصف الجمجمة من خط الكانثوس الجانبي الثنائي إلى 0.5 سنتيمتر خلف الخط الخلفي واستخدم مشرطًا لإجراء شق في منتصف الطريق على طول الخط المميز. استخدام مسحة القطن لإزالة أي دم ووضع قطعة من الشريط الجراحي على كل جانب من رفرف الجلد لفضح الجمجمة. استخدام مسحة جديدة غارقة مع كلوريد الصوديوم 0.9٪لإزالة بلطف أي نسيج ال

establishment-acute-pontine-infarction-rats-electrical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

الحث الجراحية الدماغية من تلف في الدماغ في الفئران هو نموذج يستخدم على نطاق واسع للأبحاث السكتة الدماغية. هنا علينا أن نظهر للتحريض نقص التروية الدماغية التنسيق مع انسداد الشريان الدماغي الأوسط. ويرد أيضا تصور من احتشاء الناجم عن تلطيخ النسيجي والتصوير بالرنين المغناطيسي.

التنسيق النموذجي نقص تروية الدماغ عن طريق خياطة اللف انسداد الشريان الدماغي الأوسط في الجرذ

يوضح هذا الفيديو إجراء للحث على تلف الأنسجة أو احتشاء جسر الجرذ المخدر باستخدام التحفيز الكهربائي.

إحداث احتشاء الجسر الحاد في نموذج الفئران باستخدام التحفيز الكهربائي

المصدر: Jang، S.، et al، الضربات الكهربائية في الفئران وتجزئة الحصين لفحص التغيرات الناجمة عن النوبات في بروتينات كثافة ما بعد المشبكي. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو تحريض نوبة الصدمات الكهربائية الحادة (ECS) في نموذج الفئران لدراسة المرونة العصبية الناجمة عن النوبات. يطبق الباحثون التحفيز الكهربائي عبر أقطاب مشبك الأذن ، مما يؤدي إلى فرط استثارة الخلايا العصبية والكلونوس. يساعد هذا النموذج في التحقيق في اللدونة المشبكية وآليات النوبات والتأثيرات العلاجية المرتبطة بالعلاج بالصدمات...

إحداث نوبة اشتباك كهربائي حادة في نموذج الفئران

&lt; p class = 'jove_content'&gt; تم وصف طريقة لزرع أقطاب كهربائية في النواة تحت المهاد (STN) للفئران. تم تحقيق توطين أفضل ل STN باستخدام نظام التسجيل المصغر. علاوة على ذلك ، يتم تقديم إعداد التحفيز الذي يتميز بروابط طويلة الأمد بين رأس والمحفز.

مسرى مكروي تسترشد زرع الأقطاب الكهربائية في نواة تحت المهاد الجرذان على المدى الطويل العميق تحفيز الدماغ

هنا نقدم بروتوكول لإنتاج دائم البعيدة انسداد الشريان الدماغي الأوسط في إناث الفئران المسنة مع انسداد في وقت واحد من الشرايين السباتية لتوليد عوائق القشرية الكبيرة والعجز المستمر. وتبين لنا تأكيدا لحجم الآفة باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي الهيكلي في 24 ساعة و 8 أسابيع بعد السكتة الدماغية.

أداء الدائم القاصي الأوسط الدماغي مع السباتي المشترك انسداد الشريان في الجرذان المسنين لدراسة القشرية نقص التروية ذوي الإعاقة المستديمة

ويصف هذا البروتوكول مفصلاً transcranial التحفيز الكهربائي موضع العظم الصدغي للتحقيق في الآثار القصيرة الأجل والطويلة الأجل للتحفيز الكهربائي transcranial في الانتقال بحرية الفئران.

التحفيز الكهربائي Transcranial المزمن وتسجيل إينتراكورتيكال في الفئران

نماذج الاستيلاء الحادة هامة لدراسة الآليات الكامنة وراء الأحداث صرعية. وعلاوة على ذلك، يوفر القدرة على توليد أحداث صرعية عند الطلب طريقة ذات كفاءة عالية لدراسة تسلسل الأحداث الكامنة وراء مبادرتهم. وهنا يصف لنا نماذج الاستيلاء القشرية 4-أمينوبيريديني الحاد في الماوس والأنسجة البشرية.

بدء نشاط Ictal الحادة في القوارض والأنسجة البشرية الجيل وبناء على الطلب

الغرض من هذه الدراسة هو إنشاء والتحقق من صحة نموذج الحيوانية للبحوث في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية في الدماغ عن طريق اختبار احتشاء الدماغ والوظيفة الحسية الحركية بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط/ضخ (MCAO/R) بعد 1-90 أيام في الفئران.

نموذج قبل السريرية لتقييم تعافي الدماغ بعد السكتة الدماغية الحاده في الفئران

يصف هذا العمل بروتوكولا تجريبيا لوتيرة الانفجار الأذيني عبر المريء من أجل تحريض فعال للرجفان الأذيني (AF) في الفئران. يمكن استخدام البروتوكول في الفئران ذات القلوب السليمة أو المعاد تشكيلها ، مما يسمح بدراسة الفيزيولوجيا المرضية AF ، وتحديد الأهداف العلاجية الجديدة ، وتقييم الاستراتيجيات العلاجية الجديدة.

سرعة انفجار الأذين عبر المريء لتحريض الرجفان الأذيني في الفئران

هنا ، نقدم بروتوكولا لإنشاء نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط البعيد (dMCAO) من خلال التخثير الكهربائي عبر الجمجمة في الفئران C57BL / 6J وتقييم السلوك العصبي اللاحق والسمات النسيجية.

تحريض السكتة الدماغية الحادة في الفئران باستخدام تقنية انسداد الشريان الأوسط البعيد

نماذج الفئران في الجسم الحي هي أدوات لا غنى عنها للتحقيق في الآليات المرضية والأهداف العلاجية للسكتة الدماغية الإقفارية. سيصف هذا العمل أداء تلطيخ التألق المناعي في شرائح الدماغ المصابة بالاحتشاء بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) في الفئران.

تقييم إشارات موت الخلية عن طريق التألق المناعي في نموذج الفئران للسكتة الدماغية الإقفارية

تعلم بروتوكول إنشاء احتشاء بونتين الحاد في الفئران باستخدام التحفيز الكهربائي. يُمكّن هذا النموذج القابل للتكرار الباحثين من دراسة آليات السكتة الدماغية واختبار التدخلات العلاجية.

إنشاء احتشاء بونتين الحاد في الفئران عن طريق التحفيز الكهربائي

استكشف المزيد من الفيديوهات