لوحة LC-MS/MS المعتمدة لقياس 11 دواءً مقاومًا للأدوية في عينات الشعر الصغيرة

إن التزام المريض أمر صعب للغاية، ويمكن أن يختلف استقلاب الدواء من شخص لآخر، لذا فإن القياس الموضوعي لمستويات الأدوية قد يثبت أهميته في منع ظهور المقاومة أثناء علاج السل. إذا كان من الممكن تحديد مدى الالتزام بشكل أكثر دقة وسهولة، يمكن لمقدمي الرعاية الصحية وضع خطة علاج من شأنها الحد من تطور مقاومة الأدوية. لقد قمنا بتطوير أول لوحة قياس الطيف الشامل التحليلية المتعددة لعدة أدوية للسل داخل عينات شعر صغيرة في مقايسة واحدة.

يتطلب لدينا لوحة متعددة الأدوية عينة واحدة فقط اثنين مليغرام لكل مريض ويستخدم لا استخراج مرحلة صلبة أو تصفية الخطوة لمنع أي فقدان حجم العينة. ويمكن أن تؤدي القياسات الموضوعية للتعرض للمخدرات التي تم قياسها في وقت مبكر من دورة العلاج إلى تنبيه الأطباء إلى المشاكل المتعلقة بالعقاقير الفردية في نظام العلاج. يجب أن تسحق عينات الشعر في يوم التحليل لقياس مستوى تركيز الدواء بدقة.

للحصول على عينات الشعر، بعد الحصول على موافقة خطية مستنيرة، والحصول على المواد جاهزة بما في ذلك تسمية رقيقة، واثنين من التسميات المشاركين، وزوج من مقص، وقطعة تكشفت من رقائق الألومنيوم، منسح الكحول وكيس من البلاستيك. امسح شفرات المقص مع مسح الكحول. اذهب إلى الجزء الخلفي من الرأس ورفع الجزء العلوي من الشعر باستخدام مقطع الشعر إذا رغبت في ذلك.

جمع 30 خصلة من الشعر من الجزء الخلفي من الرأس وعزل القش مع يدك. تأخذ مقص إلى أسفل إلى فروة الرأس وقطع القش من الشعر. ضع بعناية القش من الشعر على رقائق الألومنيوم.

وضع التسمية رقيقة على نهاية قعر من القش الشعر، تسجيل ذلك بشكل آمن إلى رقائق الألومنيوم. نهاية هو أبعد الجانب من فروة الرأس. أضعاف على قطعة من رقائق الألومنيوم على رأس القش الشعر ووضع علامة المشارك على رأس رقائق الألومنيوم.

وضع مطوية على قطعة من رقائق الألومنيوم في كيس من البلاستيك ووضع علامة مشارك آخر على رأس كيس من البلاستيك. لاستخراج المخدرات من عينات الشعر، تزن من أصل اثنين ملليغرام من كل عينة الشعر في أنابيب حبة المسمى بشكل فردي واثنين من ملليغرام من عينة الشعر فارغة في كل من أنابيب حبة إضافية 16. بعد وزنها، ضع كل أنابيب الخرز في مطحنة خرزة التجانس وتجانس العينات بسرعة 6.95 متر في الثانية لمدة دورتين 30 ثانية مع فترة راحة 15 ثانية بين كل دورة.

بعد التجانس الثاني، إضافة 500 ميكرولترات من المزيج القياسية الداخلية المناسبة لكل عينة وإضافة 500 ميكرولترات من الميثانول إلى أنبوب فارغ مصفوفة. ارتفاع أنابيب منحنى المعايرة مع حجم مناسب من مزيج القياسية المرجعية وفقا للجدول ووضع جميع الأنابيب في حمام مائي 37 درجة مع اهتزاز لطيف لمدة ساعتين. في نهاية الحضانة، نقل سوبرناتر من كل أنبوب خرزة إلى أنابيب جديدة تسمى microcentuge وإضافة 500 ميكرولترات من الميثانول إلى أنابيب الخرز.

دوامة أنابيب الخرز ونقل غسل الميثانول إلى أنابيب microcentsrifuge المقابلة. الطرد المركزي العينات ونقل بعناية عظمى في أنابيب جديدة دون إزعاج الكريات الشعر. يتبخر السائل في الأنابيب لجفاف في 32 درجة مئوية وإعادة تشكيل العينات مع 200 ميكرولترات من ارتفاع ضغط السائل الكروماتوغرافيا الصف المياه مع 1٪ حمض فليك.

بعد الدوامة، نقل العينات السائلة إلى قنينات العنبر مع إدراج 250 ميكرولتر. بالنسبة لقياس الطيف الكتلي المترادف للكروماتوغرافيا السائلة، قم أولاً بتركيب عمود من 2 إلى 100 ملليمتر بحجم جسيمات 2.5 ميكرومتر وحجم مسام 100 انغستروم مع حبات الفينول ذات الربط القطبي ذات نهاية القطبية المصنوعة بالكامل من السيليكا المسامية في المقصورة. تأكد من أن العمود يحتوي أيضاً على خرطوشة حماية مستحسنة من الشركة المصنعة.

نسخ ولصق المعلومات المركبة المضمنة في انتقالات أسلوب LCMS TB TB. csv في مربع في إطار المواصفات الشامل. في جدول البيانات، قم بإنشاء تسلسل دفعي لمنحنى المعايرة، وضوابط الجودة، وعينات المرضى، ومنحنى المعايرة، وضوابط الجودة، وعينات المرضى، ومنحنى المعايرة، وضوابط الجودة.

إضافة حقن فارغة المذيبات في بداية ونهاية المدى وكذلك قبل وبعد منحنى المعايرة، وضوابط الجودة وعينات المريض. ثم ضع ما لا يقل عن ثمانية حقن فارغة المذيبات في الحقن في منحنى المعايرة وقارورة مراقبة الجودة العالية لتقليل نقل التحليل. عند اكتمال الدفعات، افتح برنامج الكمية.

قم بالتمرير خلال الانتقالات للتأكد من دقة وقت الاحتفاظ المحدد تلقائيًا والتحقق من تعيين تجانس الغاوسي إلى 1.5. بعد ذلك، انقر فوق يعرض منحنى المعايرة والتراجع وتعيين نوع الانتظار إلى واحد على x. انقر فوق موافق والتحقق من صحة منحنى المعايرة ونماذج مراقبة الجودة لضمان تشغيل الدفعة بنجاح.

بالنسبة لكل تحليل مرجعي كمي، يجب أن يكون لدى ثلثي نقاط المعايرة على الأقل دقة في حدود 80-120٪ من التحقق من أن قيمة R المعروضة فوق منحنى المعايرة أكبر من 0.975. إذا تم استيفاء جميع الشروط المذكورة أعلاه، فقد مرت الدفعة ويمكن تحديد العينات كمياً. انقر فوق تحرير في شريط الأدوات وانقر فوق نسخ جدول كامل.

ثم لصق الجدول في جدول واستخدام متوسط التركيز المحسوب للحقن العينتين لتحديد التركيز المبلغ عنه لكل عينة. هنا هو موضح على سبيل المثال من الكروماتوغرام مع مستويات مؤكدة من جميع اختبار 11 أدوية السل المقاوم للأدوية. في هذه الأرقام، يمكن ملاحظة الكروماتوجرامات الأيون المستخرجة لدواء واحد معين في أحد المعايرات.

وتستخدم التحولات الكمية وتصفيات للتأكد من نوعيا وجود المخدرات كما أن النسبة بين منطقة كمي ومنطقة مؤهل لا يزال الثابت عبر العينات. كما يتم رصد المعيار الداخلي لضمان تطبيع كل عينة حقن. في هذا التحليل، تم تقييم عينة مريحة من 15 عينة شعر بين مجموع عدد من السكان الدراسة من 96 مريضاً يتناولون أدوية السل المقاوم للأدوية في ظروف العلاج الملاحظة مباشرة من كيب الغربية، جنوب أفريقيا لتحديد المستويات التمثيلية لأدوية السل المقاومة للأدوية عبر أدنى وأعلى المستويات لكل تحليل.

في حالة عدم وجود مرحلة صلبة استخراج أو تصفية الخطوة، والعناية عند نقل افر في أنابيب التبخر. أي شيء نقل إلى الأنابيب يمكن أن ينتهي حقنها في العمود. كما الدوار من رابتور حبة يمكن أن تطير قبالة إذا لم مشدود بإحكام أو مؤمن، تأكد من مضاعفة فحص الدوار قبل التشغيل.

وعلى النقيض من مضادات الفيروسات القهقرية في مجال فيروس نقص المناعة البشرية، فإن العلاقة بين الأدوية السلية الدوائية والالتزام والنتائج السريرية لا تزال غير مدروسة إلى حد كبير. لقد افترضنا أن بعض أدوية السل لا تتراكم بشكل جيد في الشعر. استهداف الأيض من هذه الأدوية قد توفر فهما أفضل لتمسك المريض.