Name: أخذ العينات وتحليل إشارات رائحة الحيوان (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 59 s
Description: اكتشف منهجيات أخذ العينات وتحليل إشارات الرائحة في الحيوانات باستخدام تقنيات GC-MS وSPME. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم الأساس الكيميائي للتواصل الحيواني.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر كيث القابضة لمساعدته في التحليلات الكيميائية في مركز روزاليند فرانكلين للعلوم، ولفرهامبتون، وبن مانتل لإنتاج الفيديو. كما أننا ممتنون للبروفيسور غلوريانو مونيتي والدكتور جوزيبي بيراكسيني وأعضاء مركز قياس الطيف الكتلي في جامعة فلورنسا، فلورنسا، وللبروفيسور لوكا كالاماي والدكتور ماركو ميشيلوزي من مختبر ARCA التابع للمجلس الوطني للمقاومة في فلورنسا، لمساعدتهم في وضع هذه المنهجية. تم دعم المشاريع البحثية التي شملت أساليب أخذ العينات والتحليل الموصوفة في المخطوطة من قبل زمالتين ماري Skłodowska-Curie Intra الأوروبية (معرفات اتفاقية المنح: 327083 ، 703611) ، ومنحة صغيرة ('الرئيسيات المخصب الحسية') من جمعية الرئيسيات في بريطانيا العظمى ، ومنحة بحثية صغيرة ('هل لدى الصيادين وجامعي الثمار حاسة شم خاصة؟') من الأكاديمية البريطانية / صندوق ليفرهولم إلى S.V. كما تلقى العمل المختبري اللازم لإعداد هذه المنهجية تمويلا من مسابقة التمويل السنوية لكلية العلوم والهندسة (ولفرهامبتون) إلى S.V.

1. جمع العينات
<ol><li>عينة الروائح التي هي واحدة من ما يلي:<ol>
<li>جمع تلقائيا صدر عن مواضيع الدراسة معتاد (على سبيل المثال، الرئيسيات حديقة الحيوان) عن طريق وضع علامات رائحة على ورقة مرشح معقمة (على سبيل المثال، إفرازات رائحة رائحة الغدة الرائحة) أو مباشرة في قوارير (مثل البول).</li>
		<li>جمع عن طريق فرك مسحات القطن المعقمة بعد تدريب مواضيع الدراسة باستخدام التدريب التعزيز الإيجابي.</li>
		<li>جمع عن طريق فرك مسحات القطن المعقمة بعد التخدير من المواضيع الدراسية.</li>
	</ol>
</li>
	<li>وضع عينات في العقيمة 10 مل المسمار توج قوارير زجاجية واضحة، وختم مع قبعات المسمار تصدرت دمج FTFE / سيليكون سيبتا. تخزينها على الفور في -20 درجة مئوية. ملاحظة: من الضروري استخدام معدات الحماية الشخصية النظيفة، مثل قفازات النتريل؛ تغييرها بشكل متكرر; تجنب ملامسة الجلد مباشرة مع العينات والقنينات. ويفضل استخدام قارورة العلامة التجارية الجديدة. ومع ذلك ، في حالة استخدام قوارير ، من الضروري تنظيف القنينات مسبقا ، ثم استخدام نفس البروتوكول.</li>
	<li>خذ الفراغات البيئية في كل مرة يتم فيها جمع علامات الرائحة. على سبيل المثال، جمع وسائط أخذ العينات (مثل ورقة التصفية أو المسحة) وقارورة مساحة الرأس المعرضة للبيئة أثناء أخذ العينات.</li>
</ol>2. إعداد العينة
<ol><li>إعداد عينات في الميدان عن طريق قطع مع شفرة مربع 10 ملم تقريبا من ورقة تصفية رائحة ملحوظ، أو رئيس مسحة، ووضعها في قارورة رأس الفضاء المسمار 10 مل تصدرت.</li>
	<li>بعد إعداد كل عينة، قم بالتخلص من النصل المستخدم لقطع وسائط أخذ العينات أو تنظيفه باستخدام مسح مناسب مضاد للبكتيريا و/أو الكحول وتجفيفه جيدا.</li>
	<li>تخزين جميع العينات في -20 درجة مئوية. ملاحظة: يفضل عند -20 درجة مئوية أو على خلاف ذلك منخفضة قدر الإمكان عمليا في الميدان.</li>
</ol>3. التحضير للتحليل
<ol><li>إزالة عينات من الثلاجة والسماح لتدفئة بشكل طبيعي لدرجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة على الأقل.</li>
	<li>إعداد الأسلوب التحليلي على GC-MS كما يلي:<ol>
<li>بالنسبة لظروف تحليل SPME، اتبع توجيهات الشركة المصنعة لحالة ألياف SPME قبل الاستخدام الأول: الألياف قبل الحالة (260 درجة مئوية لمدة 5 دقائق)، واحتضان العينة (40 درجة مئوية لمدة دقيقتين)، ووقت الاستخراج (15 دقيقة)، ووقت الامتصاص (دقيقتان)، والألياف بعد الحالة (260 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة).</li>
		<li>استخدم شروط GC التالية: العمود (HP5-MS 30 م × 0.25 مم؛ العمود 30 م × 0.25 مم؛ العمود 30 م × 0.25 مم؛ العمود 30 م × 0.25 مم؛ العمود 30 م × 25 مم؛ 0.25 ميكرومتر)، درجة حرارة المحقن (270 درجة مئوية)، معدل التدفق (1 مل/دقيقة)، وضع الحقن (بدون تقسيم)، ملف تعريف الفرن GC (45 درجة مئوية لمدة دقيقتين؛ 4 درجات مئوية/دقيقة إلى 170 درجة مئوية؛ 20 درجة مئوية/دقيقة إلى 300 درجة مئوية)، خط نقل MSD (280 درجة مئوية). ملاحظة: لتحسين بين تناسق وقت الاحتفاظ العينة الأسلوب التحليلي هو وقت الاستبقاء مؤمن).</li>
		<li>استخدم شروط MSD التالية: تأخير المذيبات (2.5 دقيقة) ونطاق المسح الضوئي (29 إلى 400amu). ملاحظة: تم استخدام نطاق من 10 إلى 400 في البروتوكولات السابقة4.</li>
	</ol>
</li>
	<li>تأكد من تشغيل إمدادات غاز التطهير لوحدة تكييف الألياف. ملاحظة: من الضروري أن يتم تثبيت تجميع SPME بشكل صحيح في العينات التلقائية ومحاذاته إلى صواني العينات التلقائي وحدة تكييف الألياف ومنفذ مدخل GC. قد يؤدي المحاذاة غير صحيحة في تلف أو إتلاف الألياف SPME.</li>
</ol>4. تحليل
<ol><li>ضع قارورة مساحة رأس فارغة (لتكون بمثابة نظام فارغ) في الموضع الأول من علبة العينات التلقائي GC-MS. ضع البيئة فارغة في الموضع الثاني من علبة العينات التلقائي. ضع العينات للتحليل في المواضع اللاحقة لعلبة العينة التلقائية.</li>
	<li>إنشاء تسلسل تحليلي لتحليل كل عينة داخل علبة العينة.<ol>
<li>في الشاشة الرئيسية MassHunter، حدد تسلسل | تسلسل التحميل.</li>
		<li>أكمل جدول التسلسل لكافة الفراغات والعينات عن طريق إدراج المعلومات المناسبة. حفظ جدول التسلسل المكتمل. ملاحظة: المعلومات الدقيقة لجدول التسلسل سوف تعتمد على المختبرات تنسيق الجدول. تتضمن المعلومات الدنيا عادة نوع العينة واسم العينة وموقع القارورة ورقمها وطريقة التحليل وموقع ملف البيانات واسمها (تخصيص اسم ملف بيانات يطابق اسم العينة يساعد على معالجة البيانات في المستقبل). يمكن إضافة عينات إضافية إلى التسلسل أثناء التحليل.</li>
	</ol>
</li>
	<li>تشغيل التسلسل عن طريق تحديد تسلسل | تشغيل تسلسل.</li>
	<li>بعد تحليل إعادة عينات إلى الثلاجة في أقرب وقت ممكن. ملاحظة: قد يكون من الممكن إعادة تحليل العينات، ولكن تجدر الإشارة إلى أن بعض المكونات المتطايرة قد تكون استخرجت تماما أثناء التحليل الأولي وبعض المركبات قد تكون خضعت للتحلل الحراري والبكتيري عند 40 درجة مئوية، وبالتالي فإن اللونية الناتجة قد لا تكون ممثلة تماما لوضع علامات الرائحة الأصلية.</li>
</ol>5. تحليل البيانات
ملاحظة: يتضمن تحليل البيانات الأولي تكامل الكروماتوجرامات للحصول على بيانات وقت الاحتفاظ ومساحة الذروة إلى جانب التحديد المؤقت للقمم باستخدام برنامج ChemStation وقواعد بيانات الطيف الكتلي NIST (المعهد الوطني للمعايير والتكنولوجيا) ، الإصدار MSD F.01.01.2317. ويمكن إجراء تحليل البيانات إما يدويا أو بطريقة شبه آلية. إذا تم استخدام الأسلوب شبه الآلي ثم أنه من المفيد في بعض الأحيان لإجراء درجة من التحليل اليدوي للبيانات للتحقق من تحديد الهوية المؤقتة.
<ol><li>افتح ملف البيانات بالنقر فوق الملف المناسب في شريط التنقل الأيسر. سيتم عرض الرسم اللوني الأيوني الكلي (TIC) في النافذة العلوية لشاشة تحليل البيانات.</li>
	<li>لدمج TIC باستخدام متكامل RTE، حدد الكروماتوجرام | دمج.</li>
	<li>ضبط معلمات التكامل بحيث تتكامل القمم التي تزيد عن 3 × ضجيج الأساس. حدد | الكروماتوجرام معلمات تكامل إشارة MS. في مربع الإخراج ضبط منطقة الذروة الحد الأدنى حسب الاقتضاء (1.0 تنتج نتائج مقبولة في الأمثلة لدينا).</li>
	<li>لتحديد القمم وإنشاء تقرير موجز، حدد تصدير التقارير | تقرير نتائج البحث في المكتبة إلى XLS. ملاحظة: يجب أن تكون المكتبات الطيفية المطلوب البحث فيها مع عدد مطابقات المكتبة التي سيتم عرضها محددة مسبقا داخل البرنامج قبل إجراء بحث في المكتبة.</li>
	<li>يحتوي تقرير جدول البيانات الناتج على بيانات تكامل لكل ذروة ومطابقة مكتبة طيفية مبدئية لتعيين الهوية. بشكل عام، يجب أن تكون مطابقة جودة المكتبة/المكتبة >80 لقبول التعريف المؤقت. حفظ جدول البيانات.</li>
	<li>تحديد الذروة مباشرة من TIC.<ol>
<li>اختر ذروة الاهتمام.</li>
		<li>إذا كانت الذروة صغيرة، قم بتكبير الصورة برسم مربع حول القمة عن طريق الضغط على زر الماوس الأيسر لأسفل، ثم قم بتمديد المربع فوق القمة وحرره.</li>
		<li>ضع خط المؤشر بحيث يكون عند أعلى نقطة في الذروة (أو بعد ذلك مباشرة).</li>
		<li>انقر نقرا مزدوجا فوق زر الماوس الأيمن وسيظهر طيف الكتلة للذروة في النافذة السفلية لشاشة تحليل البيانات.</li>
		<li>للبحث في المكتبة الطيفية، حرك المؤشر في أي مكان في النافذة الطيفية وانقر نقرا مزدوجا فوق زر الماوس الأيمن. ستظهر نتائج البحث في المكتبة في إطار جديد.</li>
		<li>لإزالة الضوضاء الخلفية من طيف من الاهتمام، انقر أولا مرتين على زر الماوس الأيمن على الذروة المعنية. ثم انقر نقرا مزدوجا فوق زر الماوس الأيمن في منطقة لا توجد فيها قمم مباشرة أمام ذروة الاهتمام. حدد | الكروماتوجرام طرح الأطياف. سيتم عرض الطيف المطروح في الإطار السفلي من شاشة تحليل البيانات وسيتم عرض '(-)' بجانب بيانات المسح الضوئي في رأس النافذة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Wyatt, T. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWyatt%2C+TD+%22Pheromones+and+Animal+Behavior%3A+Chemical+Signals+and+Signatures%22">Pheromones and Animal Behavior: Chemical Signals and Signatures</a>. , Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2014).</li>
<li>Heymann, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neglected+sense-olfaction+in+primate+behavior%2C+ecology%2C+and+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">The neglected sense-olfaction in primate behavior, ecology, and evolution.</a> American Journal of Primatology. 68 (6), 519-524 (2006).</li>
<li>Drea, C. M., Boulet, M., DelBarco-Trillo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22secret%22+in+secretions%3A+Methodological+considerations+in+deciphering+primate+olfactory+communication%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">The "secret" in secretions: Methodological considerations in deciphering primate olfactory communication.</a> American Journal of Primatology. 75 (7), 621-642 (2013).</li>
<li>Vaglio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sternal+gland+scent-marking+signals+sex%2C+age%2C+rank+and+group+identity+in+captive+mandrills%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Sternal gland scent-marking signals sex, age, rank and group identity in captive mandrills.</a> Chemical Senses. 41 (2), 177-186 (2016).</li>
<li>Marneweck, C., Jürgens, A., Shrader, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dung+odours+signal+sex%2C+age%2C+territorial+and+oestrous+state+in+white+rhinos%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+London+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Dung odours signal sex, age, territorial and oestrous state in white rhinos.</a> Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences. 284 (1846), (2016).</li>
<li>Shear, W. A., Jones, T. H., Miras, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+possible+phylogenetic+signal+in+milliped+chemical+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Systematics+and+Ecology%22%5BJournal%5D)">A possible phylogenetic signal in milliped chemical defenses.</a> Biochemical Systematics and Ecology. 35, 838-842 (2007).</li>
<li>Kimura, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volatile+substances+in+feces%2C+urine+and+urine-marked+feces+of+feral+horses%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Volatile substances in feces, urine and urine-marked feces of feral horses.</a> Canadian Journal of Animal Science. 81 (3), 411-420 (2001).</li>
<li>Vaglio, S., Minicozzi, P., Bonometti, E., Mello, G., Chiarelli, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volatile+signals+during+pregnancy%3A+a+possible+chemical+basis+for+mother-infant+recognition%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Volatile signals during pregnancy: a possible chemical basis for mother-infant recognition.</a> Journal of Chemical Ecology. 35 (1), 131-139 (2009).</li>
<li>Setchell, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+of+scent-gland+secretions+in+an+Old+World+monkey+%28Mandrillus+sphinx%29%3A+influence+of+sex%2C+male+status%2C+and+individual+identity%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Chemical composition of scent-gland secretions in an Old World monkey (Mandrillus sphinx): influence of sex, male status, and individual identity.</a> Chemical Senses. 35 (3), 205-220 (2010).</li>
<li>Setchell, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odour+signals+MHC+genotype+in+an+Old+World+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+London+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Odour signals MHC genotype in an Old World monkey.</a> Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences. 278 (1703), 274-280 (2011).</li>
<li>Pawliszyn, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPawliszyn%2C+J+%22Solid+phase+microextraction%3A+theory+and+practice%22">Solid phase microextraction: theory and practice</a>. , Wiley-VCH. New York, US. (1997).</li>
<li>Janda, E. D., Perry, K., Hankinson, E., Walker, D., Vaglio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+scent-marking+in+captive+red-ruffed+lemurs%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">Sex differences in scent-marking in captive red-ruffed lemurs.</a> American Journal of Primatology. 81 (1), 22951(2019).</li>
</ol>

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

واستخدام عينات المراقبة، سواء الضوابط البيئية التي أنشئت وقت جمع العينات أو فراغات النظام، أمر حاسم لتفسير عينات علامات الرائحة. وينبغي استبعاد أي قمم تعزى إلى بيئة أخذ العينات أو النظام الآلي من عينات علامات الرائحة بحيث لا يدرج في أي تفسير سوى ذروة الاهتمام. ويمكن لهذه الضوابط أيضا أن تلعب دورا في تقييم ورصد "صحة" الأجهزة.
يتضمن البروتوكول خطوات لحالة الألياف قبل وبعد كل عملية استخراج. يتم إجراء ذلك أسهل باستخدام العينات التلقائية ويضمن عدم وجود تلوث متقاطع من عينة إلى عينة.
<p class="jo...

لا يعرف الكثير عن التغيرات الكيميائية التي تقوم عليها الإشارات الشمية فيالحيوانات 1، أيضا بسبب التحديات المنهجية في تسجيل وتحديد ملامح الكيميائية المتطايرة من الروائح2. هناك العديد من المزالق المحتملة عند العمل مع المصفوفات الكيميائية المعقدة للغاية؛ وتشمل هذه عند أخذ العينات وتحليل عينات رائحة3.
في مركز روزاليند فرانكلين للعلوم، جامعة ولفرهامبتون، نقوم بتحليل الروائح وعلامات الرائحة لفهم كيفية استخدامها من قبل الحيوانات. نحن نجمع بين القياس شبه الليمفاوي والبيئة السلوكية والغدد الصماء وعلم الخلايا لتحسين فهمنا للدور الذي تلعبه الإشارات الشمية في الاتصالات الحيوانية.
لقد طورنا منهجية ثم حللنا الروائح والعلامات من مجموعة متنوعة من الأنواع بما في ذلك العديد من الرئيسيات غير البشرية (أي الليمور المتوج ، الليمور الأحمر ، المكاك الياباني ، الزيتون ، الشمبانزي) والثدييات الأخرى (أي القطط والأبقار). لقد جمعنا وحللنا مجموعة متنوعة من العينات، بما في ذلك البول والبراز والشعر وإفرازات رائحة الغدة الرائحة. هذه الروائح وعلامات الرائحة تتكون من خليط معقد من المركبات، وبالتالي فإن أي منهجية تستخدم لتحليلها تحتاج إلى تضمين شكل من أشكال التقنية الانفصالية. كما هو موضح، فإنها تحدث أيضا في مجموعة من المصفوفات التي تتطلب استخدام تقنيات لاستخراج مكونات الفائدة.
استخدمت الدراسات السابقة التي أجراها Vaglio وآخرون4 ومؤلفون آخرون5 استخراج مساحة الرأس الديناميكية (DHS) مع قياس الطيف الكتلي الكروماتوغرافي للغاز (GC-MS) في حين تم استخدام استخراج المذيبات المباشر6 واستخراج المذيبات المعقدة7 أيضا. وعلى وجه الخصوص، ينطوي أخذ عينات مساحة الرأس الديناميكية على تطهير مساحة الرأس بحجم معروف من الغاز الخامل يزيل في نهاية المطاف جميع المركبات المتطايرة باستثناء تلك التي تظهر تقاربا قويا لمصفوفة العينة (على سبيل المثال، المركبات القطبية في عينات مائي).
بالنسبة للمنهجية الحالية ، اعتمدنا تقنية الميكروبسترات المرحلة الصلبة (HS-SPME) إلى جانب GC-MS. على وجه الخصوص، قمنا بتطوير وتعزيز المنهجية المستخدمة بالفعل من قبل Vaglio وآخرون في مختبر GC-MS السابق8و9و10.
تقنيات استخراج المذيبات فعالة جدا لتحليل المركبات الصغيرة، شديدة التقلب (والتي يمكن أن تضيع بسهولة من عينة) لأن هذه الأساليب شل المركبات على مستقرة، ودعم المرحلة الصلبة. يستخدم HS-SPME ألياف مغلفة ببوليمر مرصع لالتقاط المركبات المتطايرة في مساحة الرأس العينة أو لاستخراج المركبات الذائبة عن طريق الغمر في سائل بيولوجي مائي11. طلاء البوليمر لا تربط المركبات بقوة، وبالتالي عن طريق التدفئة في ميناء الحقن من GC أنها يمكن إزالتها. هذه الطريقة هي أكثر قوة من تقنيات استخراج المذيبات وأيضا أكثر فعالية من DHS.
في النهج الحالي يتم احتواء العينات داخل قوارير زجاجية. يتم تسخين هذه القنينات إلى درجة حرارة 40 درجة مئوية لمحاكاة درجة حرارة جسم الحيوان من أجل تعزيز المكونات المتطايرة لعلامة الرائحة لتحتل مساحة رأس القارورة. يتم عرض ألياف SPME ، المغلفة بمواد ماصة 65 ميكرومتر من البوليديمثيلسيل أوكسان / divinylbenzene (PDMS / DVB) ، إلى بيئة مساحة الرأس ويتم امتزاز المكونات المتطايرة من العينة على الألياف. على تسخين الألياف في مدخل منفذ GC-MS، يتم desorbed المكونات المتطايرة من الألياف ومن ثم فصلها من قبل GC. يتم الحصول على أنماط تجزئة طيفية الكتلة لكل مكون باستخدام MS. بالمقارنة مع هذه الأطياف الشاملة ضد قواعد البيانات الطيفية الشاملة، يمكن أن يكون من الممكن تحديد مؤقتا مكونات علامة رائحة. من خلال استخدام العينات التلقائية ، ونحن قادرون على تحليل عينات متعددة على دفعات بطريقة متسقة.
وبالنظر إلى أن كل نوع من ألياف SPME له صلة مختلفة مع المواد الكيميائية القطبية ، وعادة ما يتم اختيار الألياف اعتمادا على القطبية و / أو الوزن الجزيئي للمركبات الكيميائية المستهدفة. وبالإضافة إلى ذلك، يتم تغيير شروط GC اعتمادا على نوع العمود GC وخصائص المركبات الكيميائية المستهدفة.
وتسمح هذه التقنية بإجراء تحليل شبه كمي للمكونات المتطايرة لعلامات الرائحة من خلال تمكين الفصل وتحديد المكونات في العينة بشكل مؤقت، يليه تحليل نسب منطقة الذروة للبحث عن الاتجاهات التي يمكن أن تدل على مكونات وسم الرائحة التي قد تشارك في الإشارة.
ويتمثل مواطن القوة الرئيسية لهذا النهج الحالي فيما يلي:
<ul style="list-style-type: square;"><li>نطاق أنواع العينة التي يمكن تحليلها.</li>
	<li>لا يلزم إعداد عينات معقدة أو استخراجها.</li>
	<li>القدرة على تحليل المكونات المتطايرة.</li>
	<li>القدرة على فصل مكونات الخليط.</li>
	<li>لتكون قادرة على تحديد المكونات المكتشفة.</li>
	<li>القدرة على تقديم معلومات شبه كمية وربما كمية عن المكونات المكتشفة.</li>
</ul>

<table><tbody><tr><td>10 مل قوارير أخذ العينات الأوتوماتيكية</td><td>Agilent</td><td>5188-5392</td><td>قوارير لولبية سعة 10 مل مع</td></tr><tr><td>أغطية قارورة 18 مم</td><td>Agilent</td><td>8010-0139</td><td>مغناطيسي مع PTFE / سيليكون الحاجز</td></tr><tr><td>التلقائي</td><td>Agilent</td><td>GC120 PAL autosampler</td><td></td></tr><tr><td>العمود الشعري</td><td>Agilent</td><td>HP5-MS</td><td>30 م × 0.25 مم ؛ 0.25 & م</td></tr><tr><td>برنامج تحليل البيانات</td><td>Agilent-ChemStation</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Gas Chromatograph</td><td>Agilent</td><td>7890B</td><td></td></tr><tr><td>مدخل الحاجز</td><td>Agilent</td><td>5182-3442</td><td>Merlin microseal</td></tr><tr><td>كاشف انتقائي للكتلة</td><td>Agilent</td><td>5977A</td><td></td></tr><tr><td>برنامج الإبلاغ</td><td></td> <td>Microsoft-Excel</td><td></td></tr> <tr><td>مكتبة الطيف</td><td>NIST</td><td>-</td><td>NIST / EPA / NIH مكتبة طيفية الكتلة</td></tr><tr><td>برنامج البحث عن المكتبة الطيفية</td> <td>NIST-MS</td> <td>Search v.2.2</td><td></td></tr> <tr><td>Splitless Inlet liner</td><td>Agilent</td><td>5190-4048</td><td></td></tr><tr><td>ألياف SPME</td><td>Agilent</td><td>SU57345U</td><td>65 & micro ؛ م ألياف PDMS / DVB</td></tr></tbody></table>

أخذ العينات وتحليل إشارات رائحة الحيوان

Sampling and Analysis of Animal Scent Signals

لقد طورنا منهجية فعالة لأخذ العينات وتحليل إشارات الرائحة ، باستخدام مساحة الرأس الصلبة المرحلة microextraction مقرونة قياس الطيف الكروماتوغرافيا الكتلية الغاز ، لفهم كيفية استخدامها في الاتصالات الحيوانية. تسمح هذه التقنية بإجراء تحليل شبه كمي للمكونات المتطايرة لإفرازات الرائحة من خلال تمكين الفصل وتحديد المكونات في العينة بشكل مؤقت ، يليه تحليل نسب منطقة الذروة للبحث عن الاتجاهات التي يمكن أن تدل على المركبات التي قد تشارك في الإشارات. نقاط القوة الرئيسية لهذا النهج الحالي هي مجموعة أنواع العينات التي يمكن تحليلها؛ عدم الحاجة إلى أي إعداد أو استخراج عينات معقدة؛ القدرة على فصل وتحليل مكونات خليط؛ تحديد المكونات المكتشفة؛ والقدرة على توفير معلومات شبه كمية وربما كمية عن المكونات المكتشفة. ويتعلق القيد الرئيسي للمنهجية بالعينات نفسها. وبما أن المكونات ذات الأهمية المحددة متقلبة، ويمكن أن تضيع بسهولة، أو تتغير تركيزاتها، فمن المهم تخزين العينات ونقلها على النحو المناسب بعد جمعها. وهذا يعني أيضا أن ظروف تخزين العينات ونقلها مكلفة نسبيا. يمكن تطبيق هذه الطريقة على مجموعة متنوعة من العينات (بما في ذلك البول والبراز والشعر وإفرازات رائحة الغدة الرائحة). تتكون هذه الروائح من خليط معقد ، يحدث في مجموعة من المصفوفات ، وبالتالي تتطلب استخدام تقنيات لفصل المكونات الفردية واستخراج المركبات ذات الأهمية البيولوجية.

بعد هذا البروتوكول، حددنا مبدئيا ما مجموعه 32 مركبا كيميائيا متطايرا من تحليل 14 علامة رائحة أنو-تناسلية تم إطلاقها تلقائيا على ورق التصفية بواسطة الليمور الأحمر(Varecia variegata rubra)وقارننا ملامح الرائحة مع ميزات signaler12. وكانت المركبات المتطايرة التي تحدث بشكل طبيعي، مثل الهيدروكربونات والتربينات والكحولات التيربين والكيتونات، موجودة ضمن هذه الملامح وشملت مركبات كان قد وجد سابقا أنها تعمل كفيرومونات جنسية وإشارات للياقة البدنية في أنواع حيوانية أخرى. يتم سرد المركبات التي تم تحديد...

لقد طورنا منهجية فعالة لأخذ العينات وتحليل إشارات الرائحة من أجل فهم كيفية استخدامها في الاتصالات الحيوانية. على وجه الخصوص ، نستخدم مساحة الرأس الصلبة المرحلة microextraction مقرونة قياس الطيف الكروماتوغرافيا كتلة الغاز لتحليل المكونات المتطايرة من الروائح الحيوانية وعلامات الرائحة.

We have developed an effective methodology for sampling and analysis of odor signals, by using headspace solid-phase microextraction coupled with gas ...

الدور الذي تلعبه رائحة في الاتصالات الحيوانية حاليا التقليل من شأنها وحتى غير مدروسة. ولا يعرف على وجه الخصوص سوى القليل جدا عن التغيرات الكيميائية التي تقوم عليها الإشارات الشمية في الحيوانات بما في ذلك البشر. ويرجع ذلك أيضا إلى التحديات المنهجية، وتسجيل وقياس المركبات الكيميائية من الروائح التي تستخدمها الحيوانات للتواصل.هناك العديد من التحديات المحتملة عند العمل مع الخلائط الكيميائية المعقدة للغاية وتشمل هذه أيضا عند أخذ العينات وتحليل عينات الرائحة. نحن نجري تحليل الروائح التي تستخدمها الحيوانات من أجل فهم كيف يمكن استخدامها من قبلهم عندما يتواصلون بين بعضهم البعض. جمعنا بين الكيمياء الخلوية والغدد الصماء الحيوية وعلم الخلايا لتحسين فهمنا للدور الذي تلعبه الرائحة في التواصل الحيواني.لمنهجيتنا الحالية في ولفرهامبتون، اعتمدنا تقنية الهيكل المجهري للمرحلة الصلبة Headspace مقرونة قياس الطيف الكتلي الكروماتوغرافيا الغازية، التي بنيت على وغير مرئي من المنهجية تستخدم في الماضي. يتم جمع عينات من الروائح في واحدة من الطرق التالية. واحد، صدر تلقائيا عينة الروائح من مواضيع الدراسة معتادة.على سبيل المثال، تجمع الرئيسيات في حديقة الحيوان إفرازات رائحة الغدة المعطرة عن طريق وضع علامات على ورق التصفية العقيم أو عينات البول مباشرة في قوارير. اثنين، بعد تدريب مواضيع الدراسة باستخدام التعزيز الإيجابي جمع إفرازات رائحة عن طريق فرك لمحة رائحة مع مسحات القطن المعقمة. ثلاثة، بعد التخدير من المواضيع الدراسة جمع إفرازات رائحة عن طريق فرك الغدد رائحة مع مسحات القطن العقيمة، عن طريق عينات في العقيمة 10 ملليلتر المسمار توج، قوارير زجاجية واضحة وختم مع قبعات المسمار تصدرت دمج P T F E قطاع السيليكون.تخزين القنينات على الفور في ناقص 20 درجة مئوية. لاحظ أنه من الضروري استخدام معدات الحماية الشخصية النظيفة مثل قفازات النتريل أثناء أخذ العينات. تغيير القفازات في كثير من الأحيان تجنب الاتصال المباشر الجلد مع العينات والقنينات.ويفضل استخدام قوارير جديدة. ومع ذلك ، في حالة استخدام القنينات ، من الضروري تنظيف القنينات مسبقا ، ثم استخدام نفس البروتوكول. خذ الفراغات البيئية في كل مرة يتم فيها جمع علامات الرائحة.القيام بذلك عن طريق تعريض ورقة تصفية غير المستخدمة أو مسحة القطن والقنينات للبيئة أثناء أخذ العينات. يتم إعداد العينات في الميدان. لرائحة ورقة تصفية ملحوظ قطع ما يقرب من 10 ملليمتر مربع من الورق ومكان في المسمار 10 ملليلتر تصدرت قارورة مساحة الرأس.لمسحة، وقطع رئيس مسحة في نهاية رمح مسحة ومكان في قارورة مساحة الرأس. بعد أن يتم إعداد كل عينة التخلص من أو تنظيف استخدام شفرة لقطع وسائل الإعلام أخذ العينات، مع مسح مضاد للبكتيريا المناسبة و أو الكحول والجافة جيدا. تخزين جميع العينات في ناقص 20 درجة مئوية.علما، ينبغي تخزين عينات في ناقص 20 درجة مئوية ومع ذلك، في مخزن الحقل في أدنى درجة حرارة ممكنة ونقلها إلى ناقص 20 درجة مئوية في أقرب فرصة. قبل التحليل إزالة عينات من الثلاجة ويسمح للمشي بشكل طبيعي لدرجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة على الأقل. إعداد الأساليب التحليلية على GCMS كما يلي لظروف تحليل SPMS اتبع توجيهات الشركة المصنعة لحالة ألياف SBME قبل الاستخدام الأول.من الضروري أن يتم تثبيت تجميع SBME بشكل صحيح في العينات التلقائية ومحاذاته إلى وحدة تكييف الألياف العينات التلقائي ومنفذ مدخل GC. محاذاة غير صحيحة يمكن أن يؤدي إلى تلف أو تدمير الألياف Sbme. تأكد من تشغيل إمدادات غاز الجثم إلى وحدة تكييف الألياف.لتحسين بين تناسق وقت الاحتفاظ بالعينة، الأسلوب التحليلي هو وقت الاحتفاظ مؤمن إضافة قوارير العينة إلى علبة العينات التلقائي وضع قارورة فارغة مساحة الرأس لتكون بمثابة نظام فارغ في الموضع الأول من علبة العينات التلقائي. ضع البيئة فارغة في الموضع الثاني ثم ضع كافة العينات المتبقية للتحليل في المواقف اللاحقة من علبة العينات التلقائي. إنشاء تسلسل تحليلي لتحليل كل عينة داخل علبة العينة.في الشاشة الرئيسية صياد الشامل، حدد تسلسل شريط القائمة ومن ثم تحميل تسلسل من القائمة المنسدلة. سيتم عرض جدول تسلسل فارغ إكمال جدول التسلسل لكافة الفراغات والعينات عن طريق إدراج المعلومات المناسبة حفظ كجدول تسلسل المكتملة. ملاحظة، المعلومات الدقيقة لجدول التسلسل سوف تعتمد على المختبرات تنسيق الجدول.تتضمن المعلومات الدنيا عادة عينة نوع نموذج الاسم وموقع الملف وطريقة تحليل الأرقام وموقع ملف البيانات وتخصيص اسم اسم ملف بيانات يطابق اسم العينة القديمة معالجة البيانات المستقبلية. يمكن إضافة عينات إضافية إلى التسلسل أثناء التحليل. قم بتشغيل التسلسل بتحديد تسلسل من شريط القوائم ثم قم بتشغيل التسلسل.بعد تحليل عاد عينات إلى الثلاجة في أقرب وقت ممكن. ملاحظة، قد يكون من الممكن إعادة العينات. ولكن تجدر الإشارة إلى أن بعض المكونات المتطايرة قد تكون استخرجت تماما أثناء التحليل الأولي وبعض المركبات قد تكون خضعت للتحلل الحراري والبكتيري عند 40 درجة مئوية.وبالتالي، فإن النتيجة في اللونية قد لا تكون ممثلة تماما لوضع علامات رائحة الأصلي. ويشمل تحليل البيانات الأولية دمج الكروماتوجرامات للحصول على بيانات وقت الاحتفاظ ومساحة الذروة إلى جانب تحديد مؤقت للقمم باستخدام برامجيات محطة كام وقواعد بيانات الطيف الكتلي المتداخل. ويمكن إجراء تحليل البيانات إما يدويا أو بطريقة شبه آلية.إذا تم استخدام الأسلوب شبه الآلي ثم أنه من المفيد في بعض الأحيان لإجراء درجة من التحليل اليدوي للبيانات للتحقق من تحديد الهوية المؤقتة. لبدء تحليل البيانات افتح ملف البيانات بالنقر فوق الملف المناسب في شريط التنقل الأيسر. سيتم عرض إجمالي لون الأيوني TIC في النافذة العلوية لشاشة تحليل البيانات.لدمج TIC باستخدام متكامل RTE، حدد أولا اللوني من شريط القوائم ثم حدد التكامل من القائمة المنسدلة يفتح مربع منبثق واختر مدمج RTE. العودة إلى القائمة اللونية والآن حدد دمج. لضبط معلمات التكامل بحيث تتكامل القمم أو إلى أكبر من ثلاثة أضعاف ضوضاء الأساس، حدد مرة أخرى اللوني من شريط القوائم ثم معلمات تكامل إشارة MS من القائمة المنسدلة.في مربع المنبثقة، ضبط منطقة الذروة الحد الأدنى حسب الاقتضاء 1.0 تنتج نتائج مقبولة في الأمثلة لدينا. لتحديد القمم وإنشاء تقرير موجز، حدد تصدير التقارير من شريط القوائم ثم تقرير نتائج البحث في المكتبة إلى XLS. ملاحظة، يجب أن تكون المكتبات الطيفية التي سيتم البحث فيها مع عدد مطابقات المكتبة التي سيتم عرضها محددة مسبقا داخل البرنامج قبل إجراء بحث في المكتبة.يحتوي تقرير جدول البيانات الناتج على بيانات تكامل لكل ذروة ومطابقة مكتبة طيفية مبدئية لتعيين الهوية. عادة ما يجب أن تكون جودة المكتبة أو تطابق المكتبة أكبر من 80 لقبول التعريف المؤقت. حفظ جدول البيانات.لتحديد الذروة مباشرة من TIC، اختر ذروة الاهتمام. إذا كانت الذروة صغيرة في التكبير عن طريق رسم مربع حول الذروة، عن طريق الضغط على زر الماوس الأيسر إلى أسفل تمتد مربع فوق الذروة والإفراج عن زر الماوس. ضع خط المؤشر بحيث يكون في أعلى نقطة من الذروة أو بعد ذلك مباشرة.انقر نقرا مزدوجا، وسوف يظهر زر الماوس الأيمن والطيف الشامل لذروة في النافذة المنخفضة من شاشة تحليل البيانات. للبحث في مكتبة طيفية، حرك المؤشر في أي مكان في النافذة الطيفية وانقر نقرا مزدوجا فوق زر الماوس الأيمن ستظهر نتائج بحث المكتبة في نافذة جديدة. لإزالة الضوضاء الخلفية من طيف من الاهتمام أولا، انقر نقرا مزدوجا فوق زر الماوس الأيمن على الذروة في السؤال ثم انقر فوق زر الماوس اليد اليمنى في منطقة مع عدم وجود قمم مباشرة أمام ذروة الاهتمام انقر على زر طرح في شريط القائمة أو حدد اللوني لشريط القائمة ومن ثم طرح الأطياف من القائمة المنسدلة.سيتم عرض الطيف المطروح في النافذة السفلية لشاشة تحليل البيانات، كما سيتم عرض شرطة بجانب بيانات المسح الضوئي في رأس النافذة. بعد هذا البروتوكول ، حددنا مؤقتا ما مجموعه 32 مركبا كيميائيا متقلبا من تحليل 14 علامة رائحة الأعضاء التناسلية التي تم إطلاقها تلقائيا على ورق التصفية بواسطة الليمور الأحمر وقارننا ملامح الرائحة مع ميزات الإشارات التي تحدث بشكل طبيعي المركبات المتطايرة مثل الهيدروكربونات والتيربينات والكحولات التوربين والكيتونات الموجودة داخل هذه الملفات وتشمل المركبات التي تم العثور عليها سابقا لتكون بمثابة هرمونات جنسية وإشارات إلى اللياقة البدنية في أنواع الحيوانات الأخرى. 10- وترد المركبات التي تم تحديدها بصورة مؤقتة في الجدول الأول.وتظهر الكروماتوجرامات التمثيلية واحدة من عنصر تحكم وواحدة من علامة رائحة ليما في الشكل الأول. وتباين عدد المكونات ووفرتها النسبية من عينة إلى عينة عبر مواضيع دراسية مختلفة. ومع ذلك، كانت ستة مركبات تحمل علامة A إلى F على الرسم اللوني موجودة في جميع العينات.وكانت هذه المركبات على التوالي الانحناءات إلى الارتفاع إلى جزيرة E واحد سداسية بارامنتا ستة بارامنتا اثنين من ثمانية صبغة واحدة اثنين من الصنوبر أربعة وبينتوديكان. وتشير نتائج هذه الدراسة إلى أن الليمور الأحمر يستخدم علامات مرسلة لنقل معلومات عن الجنس وعمر الإناث دون وسم الأعضاء التناسلية التي تلعب دورا في التواصل الاجتماعي الجنسي. وكانت النتيجة التمثيلية الأخرى بعد استخدام هذا البروتوكول دراستنا لإعلان الخصوبة من قبل الزيتون الإناث.حددنا ما مجموعه 74 مركبا متطايرا من تحليل 395 عينة رائحة مهبلية من البابون. وشملت هذه مجموعة من المركبات المتطايرة ذات الرائحة الطبيعية مثل الكيتونات والكحول والألدهيدات والتربينات والأحماض الدهنية المتطايرة والهيدروكربونات. وتظهر في الشكل الثاني مخططات لونية نموذجية تستخدم لمقارنة عينات رائحة المهبل الفارغة من القزم والإناث من البابون من الفترات الخصبة وغير الخصبة.نحن ندرس العلاقات بين ملامح رائحة المهبل والتقبل الجنسي للقرود الإناث. أظهرت نتائجنا أن الكمية الإجمالية للرائحة المهبلية تختلف مع الخصوبة مما يشير إلى أن الرائحة قد تلعب دورا في الإشارة إلى خصوبة البابون الأنثوي. وجدنا أيضا اختلافات في رائحة المهبل بين أنواع المجموعات ولكن لم نتمكن من التمييز بين آثار تكوين المجموعة ، والشوائب في سن الإناث.وهي المزايا المشتركة لأخذ العينات واستخدام نظام إدارة الشهادات. حتى باستخدام الفضاء الرأس الصلبة المرحلة الصغرى استخراج تمكن مجموعة واسعة من عينات مختلفة ليتم تحليلها باستخدام GCMS. نحن قادرون على فصل مكونات هذه العلامات المعقدة ومن ثم تحديد كل من تلك المكونات الفردية باستخدام مطياف الكتلة.وبعد ذلك ، فإن التقنية المشتركة بأكملها قوية جدا وتعطينا الكثير من المعلومات حول علامات الرائحة هذه ، والتي كانت في الماضي ستكون هناك الكثير من استخراج إعداد العينة المطلوبة لتكون قادرة على الحصول على النتائج.

sampling-and-analysis-of-animal-scent-signals

Research

JoVE Journal

Behavior

سلوك

في هذه المقالة الفيديو ، ونحن تصف طريقة جديدة تسمح للبناء التدرجات الرائحة مع هندستها مستقر وتحت السيطرة. باختصار نحن لتوضيح كيف يمكن استخدام هذه التدرجات للكشف عن العيوب الشمية (خشام الكامل والجزئي) ، ودراسة ملامح أكثر مكرا من السلوك الكيميائي.

عالية الدقة قياس سلوك رائحة يحركها يرقات ذبابة الفاكهة في

وقد أدت الأساسية ، وخصائص فريدة من نوعها حتى الآن لنظام القوارض الشم لدراسة المتزايد بين الأحياء. ثم يتم تقييم بسيطة نسبيا من وظيفتها المطلوبة أيضا. نحن هنا وصف اختبارات حساسة بالنسبة للتوصيف حساسية الماوس الشمية والتفضيل.

السلوكية اختبار الشم في الماوس الكبار

نهج المقارنة الأنواع يسمح علماء الأعصاب السلوكي لاستكشاف العوامل العصبية الحيوية المختلفة المرتبطة سلوكيات محددة تعتبر من سمات نموذج حيواني محدد. الاستفادة من الخلافات التي تحدث بشكل طبيعي في السلوك يرتبط ارتباطا وثيقا بين الأنواع ، هذه التقنية لا تتطلب تقنيات الغازية لمعالجة التعبير عن السلوك.

باستخدام المنهج المقارن الأنواع المعنية بالتحقيق في البيولوجيا العصبية للردود الأبوية

العظة حاسة الشم التوسط السلوكيات المختلفة في الحشرات، وغالبا ما تكون معقدة هي مزيج يتألف من عشرات إلى مئات من مركبات طيارة. باستخدام كروماتوغرافيا الغاز مع تسجيل متعدد القنوات في الفص antennal الحشرات، ونحن تصف طريقة لتحديد المركبات النشطة بيولوجيا.

تحديد مواد متطايرة الشم باستخدام الغاز اللوني موضوع وحدة تسجيلات (GCMR) في الفص Antennal الحشرات

علينا أن نبرهن أشكال مختلفة من هذه التقنية خارج الخلية تسجيل متعددة الوحدات لوصف رائحة استجابات في المراحل الثلاثة الأولى من مسار لحاسة الشم اللافقارية. يمكن بسهولة أن تتكيف هذه التقنيات لدراسة النشاط العصبي في نظم فرقة أخرى أيضا.

طرق تسجيل متعددة الوحدات لوصف النشاط العصبي في الجراد (<em&gt; الجراد الصحراوي أمريكانا</em&gt;) الدوائر الشم

نصف بروتوكولا لاستخدام هوائيات الحشرات في شكل مخططات كهربائية (EAGs) على الروبوتات المستقلة. يسمح تصميمنا التجريبي بتسجيلات مستقرة في غضون يوم واحد ويحل بقع الروائح الفردية حتى 10 هرتز. تتجلى كفاءة مستشعرات EAG للبحث الشمي في دفع الروبوت نحو مصدر الرائحة.

باستخدام الحشرات Electroantennogram مجسات على الحكم الذاتي الروبوتات لبحث الشم

الفئران تنتج ذخيرة مولتيسيلابيك معقدة من صوتي بالموجات فوق الصوتية (أوسفس). وتستخدم هذه أوسفز على نطاق واسع كما قراءات للاضطرابات العصبية والنفسية. يصف هذا البروتوكول بعض الممارسات التي تعلمناها وتطويرها لتحفيز باستمرار، وجمع، وتحليل الميزات الصوتية وبناء الجملة من الأغاني الماوس.

إثراء وتحليل الذكور الماوس الموجات فوق الصوتية النطق (أوسف) الأغاني

ويصف هذا البروتوكول خطوات لاستخدام البرمجيات الرواية، سوارمسايت، لتتبع الإطار حسب الإطار المواقف الهوائي وململه الحشرات من أشرطة الفيديو كاميرا ويب التقليدية باستخدام أجهزة الكمبيوتر التقليدية. البرمجيات الحرة والمفتوحة المصدر عمليات الإطارات حوالي 120 مرات أسرع من البشر وينفذ في أفضل من دقة البشرية.

سوارمسايت: تتبع في الوقت الحقيقي الحركات هوائي الحشرات ومنعكس ملحق ململه باستخدام الإعداد المشترك والأجهزة التقليدية

نظام التغلغل المتحكم به هو طريقة بسيطة ومحمولة في الميدان ومنخفضة التكلفة لتوصيل الرائحة لاختبار الشم والتدريب. هو يبنى من رائحة يُحتفظ بها على مادة مدمّس ومحتواة داخل حقيبة بوليمر نفاذية تسمح بإطلاق البخار المُعَدّيّ المُسيطر عليه بمرور الوقت.

تسيطر على رائحة تقليد نظم تغلغل لـ Olfactory التدريب والاختبار الميداني

يبحث هذا البروتوكول في العلاقة بين الدماغ والسلوك في الحصين CA1 في الفئران التي تتنقل في عمود الرائحة. نحن نقدم بروتوكولا خطوة بخطوة ، بما في ذلك الجراحة للوصول إلى تصوير الحصين ، والتدريب السلوكي ، وتسجيل المنظار المصغر GCaMP6f ومعالجة الدماغ ، والبيانات السلوكية لفك تشفير موضع الماوس من النشاط العصبي لعائد الاستثمار.

منظار صغير يسجل إشارات الكالسيوم في الحصين للفئران التي تتنقل في عمود الرائحة

يحدد هذا البروتوكول طرقا لاستخراج وقياس الاستجابات للفرمون الجنسي المتطاير في C. ايليجانس، مما يوفر أدوات لدراسة الاتصال الكيميائي ومسار الملاحة.

استخراج الفرمون الجنسي المتطاير ومقايسة الجذب الكيميائي في Caenorhabditis elegans

اكتشف منهجيات أخذ العينات وتحليل إشارات الرائحة في الحيوانات باستخدام تقنيات GC-MS وSPME. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم الأساس الكيميائي للتواصل الحيواني.

أخذ العينات وتحليل إشارات رائحة الحيوان

استكشف المزيد من الفيديوهات