إصابة الدماغ الناجمة عن الليزر في القشرة الحركية للفئران

البروتوكول المعروض هنا يظهر تقنية لخلق نموذج القوارض من إصابات الدماغ. الطريقة الموصوفة هنا تستخدم تشعيع الليزر وتستهدف القشرة الحركية.

يوفر بروتوكولنا منهجية جديدة لخلق إصابات الدماغ الرضية في الفئران باستخدام الإشعاع بالليزر لخلق تأثير التركيز في القشرة الحركية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي التغير المنخفض في المنطقة الزراعية ، وانخفاض معدلات الوفيات ، والبساطة النسبية للإجراء الذي لا يتطلب معالجات الخبراء. سوف يكون إثبات الإجراء ديمتري ناتانيل، باحث من مختبرنا.

لأداء إصابة الدماغ الناجمة عن الليزر، تعيين أول 20، 300 إلى 350 غرام فئران داولي سبراغ في مجموعة الليزر و 20 إلى مجموعة مراقبة الشام التي تديرها. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لردود الفعل الانسحاب، وضع فأر واحد على درجة حرارة المستقيم ينظم وسادة التدفئة واستخدام آلة الحلاقة لإزالة ما يكفي من الشعر من موقع الإصابة مع ما يقرب من سنتيمتر خالية من الشعر الهامش حول الشق. تطهير الجلد المكشوف مع الإيثانول 70٪ ووضع الفئران في موقف عرضة في حامل الرأس stereotaxic.

جعل شق ثلاثة سنتيمترات للسماح انعكاس الجانبي لفروة الرأس لفضح المنطقة بين bregma و لامدا. عقد ليزر Nd:YAG مع الطول الموجي الذروة من 1064 نانومتر على مسافة ملليمترين من الجمجمة، وإدارة 50 جول مرات 10 نقطة مع مدة نبض ثانية واحدة للمنطقة المكشوفة من الجمجمة فوق نصف الكرة الأيمن. بعد أن يتم تسليم إصابة الليزر ، قم بإزالة الجرذ من الجهاز وإغلاق فروة الرأس مع 3-0 خياطة جراحية حريرية.

ثم، ضع الجرذ في قفصه مع المراقبة حتى إعادة شغل كامل. بعد 24 ساعة من الإجراء، استخدم نظام تسجيل 43 نقطة لتقييم درجة الخطورة العصبية. اختبار الحيوانات لعجز عصبي، اضطرابات السلوك، مهمة موازنة شعاع، وردود الفعل، وتعيين درجات أعلى لإعاقات أكثر شدة.

بعد التقييم، حصاد العقول من كل التجريبية والسيطرة وفقا للبروتوكولات القياسية. لتقييم حجم الحفارة في الدماغ، قسم الأدمغة المحصودة إلى ست شرائح إكليلية سميكة من مليمترين واحتضان كل شريحة في 0.05٪ TTC لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. بعد تلطيخ، مسح هذه الشرائح مع الماسح الضوئي مع 1600 في 1600 نقطة لكل بوصة القرار.

يتم تعريف المناطق غير المطّع من شرائح الدماغ الثابتة على أنها مُهدَّدة. لتقييم حدوث كسر حاجز الدماغ في الدم، بعد 24 ساعة من حمل إصابة الليزر التي تسببها حقنة مع صبغة زرقاء 2٪ إيفانز مخففة في أربعة ملليلتر لكل كيلوغرام من محلول ملحي وتسليم الحل عن طريق الوريد إلى الفئران المصابة والسيطرة على الفئران عبر الوريد الذيل المُعَبَّل. السماح للمحلول بالتدوير لمدة ساعة واحدة قبل استخدام الدبابيس الجراحية والمقص لفتح صدر الحيوان الأول.

اثقب القلب المكشوف بـ 0.9٪ من الملح المُبرّد عبر البطين الأيسر عند 110 ملليمتر من الزئبق من الضغط حتى يُلاحظ سائل غزير عديم اللون من الأذين الأيمن. بعد ذلك، حصاد الدماغ والحصول على شرائح المداهم السدي اثنين ملليمتر. فصل شرائح الدماغ الأيسر من شرائح الدماغ الأيمن للسماح بتقييم نصفي الكرة الأرضية المصابين وغير المصابين بشكل منفصل، و وزن العينات.

التجانس العينات باستخدام هاون وحشرات واحتضان عينات الأنسجة في 50٪ حمض ثلاثي الكلور لمدة 24 ساعة. في اليوم التالي، الطرد المركزي العينات أنسجة المخ المتجانسة لمدة 20 دقيقة في 10،000 مرة G ودرجة حرارة الغرفة، وخلط ملليلتر واحد من عظمى مع 1.5 ملليلتر من 96٪ الإيثانول في واحد إلى ثلاثة. ثم، استخدم كاشف الفلورسينس في 620 نانومتر الإثارة والطول الموجي للانبعاثات 680 نانومتر لتقييم كسر حاجز الدماغ في الدم.

كما لوحظ من خلال التحليل النسيجي، يمكن استخدام تلطيخ الأزرق إيفانز للكشف عن وقوع إصابات الدماغ في الليزر والحيوانات نموذج MCAO. في هذا التحليل التمثيلي لم تسجل أي وفيات أو نزيف تحت العنكبوتي في مجموعات التحكم أو التجريبية، وكان لدى مجموعة MCAO معدل 20٪ من كل من الوفيات والبواسير تحت العنكبوتية. وكانت التغيرات النسبية في درجة حرارة الجسم في الفئران من كلتا المجموعتين متشابهة أيضا، على الرغم من وجود اختلاف في التباين بين المجموعتين.

وكانت درجات الخطورة العصبية أسوأ بكثير في كل من الليزر وMCAO نماذج مقارنة مع مجموعة التحكم التي تديرها الشام. تسبب الليزر الناجم عن إصابة الدماغ أيضا زيادة كبيرة في حجم المزارع في نصف الكرة الأرضية المستهدف مقارنة مع مجموعة التحكم التي تديرها الشام. ومع ذلك، كان حجم الفارة من نموذج الليزر أصغر مقارنة بالحيوانات التي أصيبت من تقنية MCAO.

لم يلاحظ أي فرق في وذمة الدماغ بين نموذج إصابة الدماغ الناجم عن الليزر ومجموعة التحكم التي تعمل بها الشام. ومع ذلك، كان هناك فرق كبير في وذمة الدماغ بين نموذج الليزر والمجموعات المصابة MCAO. بالمقارنة مع مجموعة التحكم التي تديرها الشام ، تسببت إصابة الدماغ الناجمة عن الليزر وتقنيات MCAO في زيادة كبيرة في كسر حاجز الدماغ في الدم في نصفي الكرة الأرضية غير المصابين والهدف.

أثناء محاولة هذا النموذج، تذكر أن تستهدف بدقة منطقة القشرة الحركية وتوحيد الطاقة، وعدد النقاط التي يجري تشعيع، والوقت المعرض الكلي. بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء عدد كبير من الاختبارات السلوكية، مثل المشي شعاع، Froedert، وغيرها من التقييمات.