Name: تقييم القدرة Phagocytic العمر محددة من الكبار دروسوزيلا الهيموسيات الميلانوغاستر باستخدام في فيفو الفاتن الدمج (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-11T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: اكتشف تقييم البلعمة في خلايا الدم لذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام تقنية التصوير الفلوري. تتيح هذه الطريقة قياس الأحداث البلعمية في الخلايا الفردية ودراسة الاختلافات المرتبطة بالعمر.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقد تم دعم هذا العمل من خلال منح من المعاهد الوطنية للصحة R03 AG061484-02 وكلية UMBC للعلوم الطبيعية والرياضية بيكتون ديكنسون كلية البحوث.

<ol><li>Abhyankar, V., Kaduskar, B., Kamat, S. S., Deobagkar, D., Ratnaparkhi, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+DNA%2FRNA+methyltransferase+contributes+to+robust+host+defense+in+ageing+animals+by+regulating+sphingolipid+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Drosophila DNA/RNA methyltransferase contributes to robust host defense in ageing animals by regulating sphingolipid metabolism.</a> The Journal of Experimental Biology. 221, Pt 22 (2018).</li>
<li>DeVeale, B., Brummel, T., Seroude, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunity+and+aging%3A+the+enemy+within%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunity and aging: the enemy within.</a> Aging Cell. 3 (4), 195-208 (2004).</li>
<li>Gomez, C. R., Nomellini, V., Faunce, D. E., Kovacs, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Innate immunity and aging.</a> Experimental Gerontology. 43 (8), 718-728 (2008).</li>
<li>Panda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+innate+immunosenescence%3A+causes+and+consequences+for+immunity+in+old+age%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Human innate immunosenescence: causes and consequences for immunity in old age.</a> Trends in Immunology. 30 (7), 325-333 (2009).</li>
<li>Aw, D., Silva, A. B., Palmer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosenescence%3A+emerging+challenges+for+an+ageing+population%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunosenescence: emerging challenges for an ageing population.</a> Immunology. 120 (4), 435-446 (2007).</li>
<li>Min, K. -J., Tatar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+molecular+mechanism+of+immunosenescence+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Unraveling the molecular mechanism of immunosenescence in Drosophila.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), 2472(2018).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+fly%3A+a+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li>
<li>Banerjee, U., Girard, J. R., Goins, L. M., Spratford, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+genetic+model+for+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a genetic model for hematopoiesis.</a> Genetics. 211 (2), 367-417 (2019).</li>
<li>Rämet, M., Manfruelli, P., Pearson, A., Mathey-Prevot, B., Ezekowitz, R. A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+phagocytosis+and+identification+of+a+Drosophila+receptor+for+E.+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of phagocytosis and identification of a Drosophila receptor for E. coli.</a> Nature. 416 (6881), 644-648 (2002).</li>
<li>Garschall, K., Flatt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+immunity+and+aging+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">The interplay between immunity and aging in Drosophila.</a> F1000Research. 7, (2018).</li>
<li>Brennan, C. A., Anderson, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%3A+The+genetics+of+innate+immune+recognition+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Drosophila: The genetics of innate immune recognition and response.</a> Annual Review of Immunology. 22 (1), 457-483 (2004).</li>
<li>Rosales, C., Uribe-Querol, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+a+fundamental+process+in+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: a fundamental process in immunity.</a> BioMed Research International. 9042851, Research article (2017).</li>
<li>Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagosome+maturation%3A+going+through+the+acid+test%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Phagosome maturation: going through the acid test.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 9 (10), 781-795 (2008).</li>
<li>Stuart, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systems+biology+analysis+of+the+Drosophila+phagosome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A systems biology analysis of the Drosophila phagosome.</a> Nature. 445 (7123), 95-101 (2007).</li>
<li>Mackenzie, D. K., Bussière, L. F., Tinsley, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence+of+the+cellular+immune+response+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Gerontology%22%5BJournal%5D)">Senescence of the cellular immune response in Drosophila melanogaster.</a> Experimental Gerontology. 46 (11), 853-859 (2011).</li>
<li>Horn, L., Leips, J., Starz-Gaiano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+ability+declines+with+age+in+adult+Drosophila+hemocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Phagocytic ability declines with age in adult Drosophila hemocytes.</a> Aging Cell. 13 (4), 719-728 (2014).</li>
<li>Elrod-Erickson, M., Mishra, S., Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+cellular+and+humoral+immune+responses+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Interactions between the cellular and humoral immune responses in Drosophila.</a> Current Biology. 10 (13), 781-784 (2000).</li>
<li>Garg, A., Wu, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Rab14+mediates+phagocytosis+in+the+immune+response+to+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Drosophila Rab14 mediates phagocytosis in the immune response to Staphylococcus aureus.</a> Cellular Microbiology. 16 (2), 296-310 (2014).</li>
<li>Bloomington Drosophila Stock Center: Indiana University Bloomington. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://bdsc.indiana.edu/innformation/recipes/molassesfood.html">https://bdsc.indiana.edu/innformation/recipes/molassesfood.html</a> (2019).</li>
<li>Fellous, S., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Larval+food+quality+affects+adult+%28but+not+larval%29+immune+gene+expression+independent+of+effects+on+general+condition%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Ecology%22%5BJournal%5D)">Larval food quality affects adult (but not larval) immune gene expression independent of effects on general condition.</a> Molecular Ecology. 19 (7), 1462-1468 (2010).</li>
<li>Kurucz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemese%2C+a+hemocyte-specific+transmembrane+protein%2C+affects+the+cellular+immune+response+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Hemese, a hemocyte-specific transmembrane protein, affects the cellular immune response in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (5), 2622-2627 (2003).</li>
<li>Goto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+haemocyte-specific+protein%2C+hemolectin%2C+similar+to+human+von+Willebrand+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">A Drosophila haemocyte-specific protein, hemolectin, similar to human von Willebrand factor.</a> Biochemical Journal. 359, Pt 1 99-108 (2001).</li>
<li>Cevik, D., Acker, M., Michalski, C., Jacobs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericardin%2C+a+Drosophila+collagen%2C+facilitates+accumulation+of+hemocytes+at+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Pericardin, a Drosophila collagen, facilitates accumulation of hemocytes at the heart.</a> Developmental Biology. 454 (1), 52-65 (2019).</li>
<li>Ghosh, S., Mandal, S., Mandal, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+proliferation+of+adult+hemocytes+in+Drosophila+by+BrdU+incorporation+and+PH3+expression+in+response+to+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Wellcome+Open+Research%22%5BJournal%5D)">Detecting proliferation of adult hemocytes in Drosophila by BrdU incorporation and PH3 expression in response to bacterial infection.</a> Wellcome Open Research. 3, (2018).</li>
<li>Hao, Y., Yu, S., Luo, F., Jin, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jumu+is+required+for+circulating+hemocyte+differentiation+and+phagocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">Jumu is required for circulating hemocyte differentiation and phagocytosis in Drosophila.</a> Cell Communication and Signaling. 16 (1), 95(2018).</li>
<li>Petraki, S., Alexander, B., Brückner, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+blood+cell+populations+of+the+Drosophila+melanogaster+larva%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assaying blood cell populations of the Drosophila melanogaster larva.</a> Journal of Visualized Experiments. (105), (2015).</li>
<li>Gyoergy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tools+allowing+independent+visualization+and+genetic+manipulation+of+Drosophila+melanogaster+macrophages+and+surrounding+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22G3%3A+Genes%2C+Genomes%2C+Genetics%22%5BJournal%5D)">Tools allowing independent visualization and genetic manipulation of Drosophila melanogaster macrophages and surrounding Tissues.</a> G3: Genes, Genomes, Genetics. 8 (3), 845-857 (2018).</li>
<li>Bosch, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+cells+of+adult+Drosophila+do+not+expand%2C+but+control+survival+after+bacterial+infection+by+induction+of+Drosocin+around+their+reservoir+at+the+respiratory+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22BioRxiv%22%5BJournal%5D)">Blood cells of adult Drosophila do not expand, but control survival after bacterial infection by induction of Drosocin around their reservoir at the respiratory epithelia.</a> BioRxiv. 578864, (2019).</li>
</ol>

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

البروتوكول الموصوف هنا هو وسيلة موثوقة لتحديد الجوانب المختلفة للزنابية، في ظل ظروف تجريبية خاضعة للرقابة. نلاحظ أننا قد اختبرت فقط هذا الإجراء مع الغرام الجزيئات البكتيرية السلبية والنتائج قد تختلف إذا تم استخدام الغرام الجزيئات البكتيرية إيجابية. في الواقع، سيكون من المثير للاهتمام مقارنة الاستجابات البلعوية لكل من البكتيريا السلبية والغرام إيجابية غرام في ظروف تجريبية مختلفة. استخدام نانو حاقن يسمح لمراقبة دقيقة على أحجام الحقن، وضمان حقن كل ذبابة مع نفس حجم الجسيمات. أحد القيود على البروتوكول يأتي من عدم الاتساق في تحضيرات الجسيمات. سوف تتراكم الجسيمات بمجرد تجميدها، لذلك يمكن أن تؤثر الاختلافات الصغيرة في أحجام التخفيف، أو عدم وجود دوامة، على تركيز الجسيمات بين التجارب. لتقليل الاختلافات المحتملة في تركيزات الجسيمات بين الأعمار ، من المفيد حقن الذباب القديم لمدة 1 و 5 أسابيع في نفس اليوم ، باستخدام نفس إبرة وحل الجسيمات. عيب آخر محتمل هو أنه أثناء التشريح، يمكن بسهولة أن تتلف السفينة الظهرية و /أو بشرة إذا لم يتم التعامل مع الدبابيس بشكل صحيح. لتجنب تعطيل السفينة الظهرية، تقليل عدد الدبابيس المستخدمة في التشريح. ميزة لهذا الأسلوب تشريح هو أن جميع التثبيت, غسل وتلطيخ الخطوات يمكن أن يؤديها في لوحة تشريح. لأن بشرة يتم تثبيتها إلى أسفل، وهذا يمنع البشرة من فقدان بين الخطوات.
بالمقارنة مع الأساليب القائمة18،19،25،26،27،28،29، البروتوكول الموصوف له مزاياه وحدوده. من خلال تشريح السفينة الظهرية ، ونحن قادرون على تصور وقياس عدد الهيموسيات الفردية في هذا الموقع. وهذا يجعل من الممكن الكشف عن الاختلافات الدقيقة في النشاط البلعمي بين المجموعات التجريبية. طرق أخرى تصور الجزيئات المسمى fluorescently بجمع hemocytes باستخدام النزف / كشط المقايسة19,25,26,27, أو من خلال بشرة بطنية سليمة18,19,28,29; ومع ذلك، لا يمكن تقييم الهيموسيات الفردية عند تصورها من خلال بشرة الظهر. ميزة هذا البروتوكول، بالمقارنة مع طريقة التسييل / كشط هو أن طريقتنا يسمح لنا لتقييم فقط تلك الهيموسيات المرتبطة بالأوعية الظهرية، ولا حساب ل الخلايا المتداولة أو تلك على طول جدار الجسم، والتي قد تكون مختلفة وظيفيا. تشريح السفينة الظهرية يزيل أيضا الحاجة إلى تضمين جولة ثانية من الحقن مع quencher fluorescence، مثل Trypan الأزرق19،26. وذلك لأن أي جزيئات غير ملزمة أو غارقة في خلية سيتم غسلها أثناء خطوات الغسيل. وعلى العكس من ذلك، قد يكون من الأسهل تنفيذ طرق بديلة لأنها لا تتطلب تشريح. في حين أن تشريح السفينة الظهرية من السهل تعلمها ، فإن هذه الخطوة تضيف مستوى من التعقيد قد لا يكون ممكنًا في بعض التصاميم التجريبية.
على الرغم من أن الاستخدام الموصوف لهذا في فحص البلعوم في الجسم الحي هو تقييم وقياس الأحداث البلعومية بين مختلف الأعمار ، فإن هذا البروتوكول قابل للتكيف للغاية ويمكن استخدامه لتحليل جوانب مختلفة من البلعوم بين النمط الجيني أو الجنس أو نوع الأنسجة. مع البلعوم يجري أهمية مركزية بالنسبة لمعظم الحيوانات متعددة الخلايا، فهم كيف تنخفض هذه العملية مع التقدم في السن يمكن أن يؤدي إلى علاجات علاجية أفضل للسكان الشيخوخة. يوفر هذا النهج إمكانات طويلة الأجل لتوضيح جوانب التغيرات المرتبطة بالعمر في الاستجابة المناعية ، مع التركيز بشكل خاص على البلعميات.

نظام المناعة الفطرية، الذي يتكون من الحواجز الفيزيائية والكيميائية للعدوى، فضلا عن المكونات الخلوية، هو التطوري المحفوظة عبر الكائنات متعددة الخلايا1،2. كما خط الدفاع الأول، الجهاز المناعي الفطرية تلعب دورا حاسما في مكافحة مسببات الأمراض الغازية في جميع الحيوانات1،2،3. تتضمن مكونات الاستجابة المناعية الفطرية مجموعة واسعة من أنواع الخلايا التي تصنف على أساس أنها تفتقر إلى التحديد والذاكرة المناعية2،3،4. في البشر، وتشمل هذه الأنواع الخلية monocytes البلعوية و الضامة، العدلات، وخلايا القاتل الطبيعي السام للخلايا4،5. في حين أن وجود نظام المناعة الوظيفي أمر ضروري للبقاء على قيد الحياة المضيف، فمن الواضح أن وظيفة الخلايا المناعية تنخفض مع التقدم في السن، وهي ظاهرة تعرف باسم المناعة5،6. يمكن أن تساعد القدرة على تقييم التغيرات المرتبطة بالعمر في الاستجابة المناعية ، بما في ذلك الجوانب المختلفة لعملية البلعمة ، في فهمنا للمناعة. الإجراء الذي يصفه هنا يوفر نهجا فعالا وقابلا للتكرار لتقييم وقياس الأحداث البلعمية بواسطة الهيموسيات في Drosophila الميلانوغاستر.
Drosophila هو نموذج مثالي لدراسة الاستجابة المناعية لأسباب عديدة. فمن ناحية، هناك مجموعة واسعة من الأدوات الجينية المتاحة التي تجعل من الممكن بسهولة التلاعب التعبير الجيني بطريقة تعتمد على الأنسجة7. وتشمل هذه الأدوات مجموعة من المسوخ، ومخزونات تدخل الجيش الملكي النيبالي، ومخزونات GAL4/UAS، ولوحة Drosophila المرجعية الجينية التي تحتوي على 205 خطوط مختلفة من نوعها يتم فهرسة تسلسل الجينوم بأكملها8. دورة الحياة القصيرة للدروصوفيا والعدد الكبير من الأفراد المنتجة تسمح للباحثين لاختبار عدة أفراد في بيئة خاضعة للرقابة، في فترة قصيرة من الزمن. وهذا يحسن إلى حد كبير القدرة على تحديد الاختلافات الدقيقة في الاستجابات المناعية للعدوى بين الأنماط الجينية، بين الجنسين أو عبر الأعمار. الأهم من ذلك، يتم حفظ العديد من المكونات الوراثية ووظائف الاستجابة المناعية الفطرية، بما في ذلك البلعميات، تطوريا بين دروسوفيليا والثدييات1،2.
في Drosophila ، تتم عملية البلعوم الذي يلي العدوى بواسطة الهيموسيات البلعائية تسمى البلازما ، والتي تعادل الضامة الثديية9. Hemocytes ضرورية لل التعرف على مجموعة واسعة من الجسيمات وتطهير مسببات الأمراض الميكروبية9،10،11،12،13. هذه الخلايا تعبر عن مجموعة متنوعة من المستقبلات التي يجب أن تميز النفس عن غير الذات، والشروع في الأحداث إشارة اللازمة لتنفيذ عملية البلعومات10،11،12،13،14،15. مرة واحدة في الجسيمات ملزمة، ويبدأ في أن تكون داخلية من خلال إعادة تنظيم الهيكل الكيسي actin وإعادة عرض غشاء البلازما لتوسيع حول الجسيمات، وتشكيل كوب البلعومات11،12،13،14. خلال هذه العملية، مجموعة أخرى من الإشارات تخبر الخلية إلى استيعاب الجسيمات أكثر عن طريق إغلاق كوب البلعوم، وتشكيل غشاء ملزمة phagosome11،12،13،14،15. ثم يخضع الفطووم لعملية نضوج، مع ربطه ببروتينات مختلفة، وصهره مع الليسومات، وتشكيل الفطوسومات الحمضية11،12،13،14،15. عند هذه النقطة، يمكن أن تكون الجسيمات بكفاءة تحلل والقضاء11،,12،,13،,14،,15. وقد كشفت الدراسات Drosophila أن الذباب الأكبر سنا (4 أسابيع من العمر) لديها انخفاض القدرة على إزالة العدوى مقارنة مع الذباب الأصغر سنا (1-1- العمر) ، على الأرجح يرجع ذلك ، على الأقل جزئيا ، إلى انخفاض في بعض جوانب البلعمة16،17.
تستخدم الطريقة الموصوفة هنا جسيمات إشريكية القولونية المنفصلة التي تحمل علامات الفلورسنت، وتحمل أحدهما الفلوروفور القياسي والأخرى حساسة للغلاف الحراري، لتقييم جانبين مختلفين من البلعمرة: الغمر الأولي للجسيمات، وتدهور الجسيمات في الفوماضات. في هذا الفحص ، يمكن ملاحظة الفلورو-الجسيمات عندما تكون الجسيمات مقيدة ومغمرة بالهيموسيات ، في حين أن الجسيمات الحساسة درجة الحموضة فلورية فقط في ظروف درجة الحموضة المنخفضة للphagosome. ويمكن بعد ذلك أن يلاحظ أحداث الفلورسنت في الهيموسيات التي تُحل على طول السفينة الظهرية. نحن نركز على الهيموسيت المترجمة إلى السفينة الظهرية، والتي توفر معلما التشريحية لتحديد موقع الهيموسيات التي من المعروف أنها تساهم في إزالة البكتيريا، وعزلها باستمرار. ومع ذلك، الهيموسيات في أجزاء أخرى من الجسم والهيموليكف هي أيضا مهمة لإزالة. على الرغم من أننا لم تدرس هذه الخلية السكان, يمكن أن يكون الإجراء العام لدينا تنطبق على المقايسات البلعوية من هذه الخلايا كذلك. ميزة واحدة من نهجنا هو أننا يمكن قياس الأحداث البلعمية داخل هافورسيات الفردية، مما يسمح لنا للكشف عن الاختلاف الدقيق في العمليات البلعوية. دراسات أخرى تصور الأحداث الفلورية من خلالبشرة 18،19 لا تأخذ في الاعتبار الاختلافات في أعداد الهيموسيات الحالية ، والتي من المهم بشكل خاص أن تنظر في حالتنا حيث من المتوقع أن تتغير تعدادات الهيموسيات الكلية مع سن17.

<table><tbody><tr><td>0.10 مم دبابيس الحشرات</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>26002-10</td><td>هنا: يتم قطع المسامير إلى نصفين ، وتستخدم النهاية الحادة</td></tr><tr><td>1 مل محاقن معقمة</td><td>Becton Dickinson</td><td>309602</td><td>مملوءة بالزيت المعدني لتحميل الإبرة</td></tr><tr><td>15٪ مصل الأبقار الجنينية (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td>لوسائط التشريح</td></tr><tr><td>16٪ علوم المجهر الإلكتروني Paraformaldehyde</td><td></td><td>15710</td><td>درجة EM ، 4٪ تعمل ، مخففة في 1X PBS</td></tr><tr><td>1x محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)</td> <td>Sigma</td><td>P3813</td><td></td></tr><tr><td>3 مل Trasnfer Pipet</td><td></td><td>Falcon 357524</td><td></td></tr><tr><td>3.5 "شعيرات دموية زجاجية</td><td>Drummond</td><td>3-000-203-G / X</td><td>1.14mm OD × 3.5 "طول × 0.53" معرف</td></tr><tr><td>35x10 مم أطباق بتري</td><td>Becton Dickinson</td><td>351008</td><td>تستخدم كلوحة تشريح ، مملوءة في منتصف الطريق Sylgard</td></tr><tr><td>6x البنسلين / الستربتومايسين</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>لوسائط التشريح</td></tr><tr><td>70٪ Glycerol</td><td>Sigma</td><td>G9012</td><td></td></tr><tr><td>خلاط دوامة تناظرية</td><td>VWR</td><td>58816-121</td><td></td></tr><tr><td>ملقط بيولوجي ، Dumont No. 5</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4 '، 6-diamidino-2-phenylindole)</td> Life <td>Technologies</td><td>D1306</td><td>مخفف 1: 1000 في 1x PBST</td></tr><tr><td>ذبابة الفاكهة سلالة</td><td></td><td></td><td>ث [*] ؛ P{w[+mC]=He-GAL4.Z}85, P{w[+mC]=UAS-GFP.nls} 8</td></tr><tr><td>الإشريكية القولونية (سلالة K-12) الجسيمات الحيوية&trade;, Alexa Fluor&trade; 594 Conjugate</td><td>Life Technologies</td><td>E23370</td><td></td></tr><tr><td>الشرائح الزجاجية</td><td>Premiere</td><td>D17026102</td><td></td></tr><tr><td>حل تصوير الخلايا الحية</td><td>Life Technologies</td><td>A14291DJ</td><td>المخزن المؤقت المفضل لتحضير الجسيمات والتخفيفات</td></tr><tr><td>الزيوت المعدنية</td><td>Mpbio</td><td>حاقن نانولتر أوتوماتيكي 194836</td><td></td></tr><tr><td>Nanoject II</td><td>Drummond</td><td>3-000-204</td><td></td></tr><tr><td>قوارير بوليسترين ضيقة سوبر السائبة ذبابة الفاكهة</td><td>Genesee</td><td>32-116SB</td><td>الحجم: 25 × 95 مم</td></tr><tr><td>خلاط الجوز</td><td>فيشر Scientific</td><td>88-861-043</td><td>السرعة المستخدمة: 20 دورة في الدقيقة</td></tr><tr><td>pHrodo & trade ؛ الإشريكية القولونية الحمراءالجسيمات الحيوية &التجارة; مترافق لتقنيات البلعمة</td><td>الحياة</td><td>P35361</td><td></td></tr> وسائط <tr><td>زراعة خلايا ذبابة الفاكهة من شنايدر (1x)</td> <td>Gibco</td><td>21720-024</td><td>وسائط التشريح ، دمج: شنايدر ، FBS ، والقلم / البكتيريا ؛ فلتر تعقيم</td></tr><tr><td>أزيد الصوديوم</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td>2 ملم (أو 20٪) مقص</td></tr><tr><td>زنبركي</td> يعمل <td>أدوات العلوم</td><td>الدقيقة 15000-00</td><td></td></tr><tr><td>سيلجارد 184 علوم المجهر الإلكتروني المطاط الصناعي من</td><td></td><td>السيليكون 24236-10</td><td>التحضير وفقا للبروتوكول المقدم</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P1379</td><td>ل PBS + 0.1٪ بين المراهقين</td></tr><tr><td>مجتذب الماصة العمودي موديل 700C</td><td>ديفيد كوبف أدوات</td><td>812368</td><td>سخان: 55؟ الملف اللولبي: 45</td></tr><tr><td>Zeiss AxioImager.Z1 مجهر الفلورسنت</td><td>Zeiss</td><td></td><td>هنا: نظام التداخل الهيكلي Apotome مع برنامج التصوير Zeiss Zen</td></tr></tbody></table>

تقييم القدرة phagocytic العمر محددة من الكبار دروسوزيلا الهيموسيات الميلانوغاستر باستخدام في فيفو الفاتن الدمج

Assessing the Age-Specific Phagocytic Ability of Adult Drosophila melanogaster Hemocytes using an In Vivo Phagocytosis Assay

البلعوم هو وظيفة أساسية من الاستجابة المناعية الفطرية. يتم تنفيذ هذه العملية من قبل الهيموسيات البلعومية التي تتمثل وظيفتها الأساسية في التعرف على مجموعة واسعة من الجسيمات وتدمير مسببات الأمراض الميكروبية. مع تقدم الكائنات الحية في العمر ، تبدأ هذه العملية في الانخفاض ، ومع ذلك لا يعرف سوى القليل عن الآليات الأساسية أو الأساس الوراثي للمناعة. هنا ، يتم استخدام حقنة مقرها في فحص البلعوم الحوي لتقييم التغيرات ذات الصلة بالعمر في جوانب مختلفة من البلعوم ، مثل الربط ، والابتلاع ، وتدهور الجسيمات الداخلية ، من خلال تحديد كمي الأحداث البلعوية في الهيموسيات في Drosophila الكبار Drosophila melanogaster أصبح نموذجًا مثاليًا للتحقيق في التغيرات المرتبطة بالعمر في وظيفة المناعة الفطرية لأسباب عديدة. لأحد، يتم حفظ العديد من المكونات الوراثية ووظائف الاستجابة المناعية الفطرية، بما في ذلك البلعميات، تطوريا بين دروسوفيليا والثدييات. وبسبب ذلك، من المرجح أن تكون النتائج التي يتم الحصول عليها من استخدام هذا البروتوكول ذات صلة على نطاق واسع بفهم التغيرات المرتبطة بالعمر في وظائف المناعة في مجموعة متنوعة من الكائنات الحية. بالإضافة إلى ذلك، نلاحظ أن هذه الطريقة توفر تقديرات كمية من قدرة البلعومات الهيموسية، والتي يمكن أن تكون مفيدة لمجموعة متنوعة من المواضيع البحثية، ويجب أن لا تقتصر على دراسات الشيخوخة.

لتوضيح طرق الحقن الموصوفة ، يظهر الشكل 1A موقع الحقن على Drosophila melanogaster ، وكذلك كيف تسمح صبغة الطعام بتأكيد بصري على أن الذبابة تم حقنها (الشكل 1B). إضافة صبغة الطعام يساعد أيضا في التعرف على إبرة انسداد. يمكن إجراء الحقن في البطن، ولكن الحفاظ على موقع الحقن متسقة عبر التجارب. سيساعد هذا على تقليل الاختلافات المحتملة بين كل تجربة.
لتصور الجسيمات المسمى الفلورسنت داخل hemocytes المقيم على طول السفينة الظهرية، قمنا بتشريح السفينة الظهرية وتعلق بشرة البطن. الرسم 2A-F يحدد طرق التشريح.
لتقييم قدرة الشباب والذان على تنفيذ البلعوم على العمر، يتم تصور الخلايا الدموية على طول الوعاء الظهري باستخدام مجهر فلوري. لضمان أن يتم عد الخلايا فقط على طول السفينة الظهرية، الأجسام المضادة أو الجينات الموسومة GFP لعلامات معينة من خلايا الدم أو الكولاجين محددة القلب، مثل Hemese وهيموليكتين، أو بيريكاردين (الشكل 3)، على التوالي، يمكن استخدامها22،23،24. الفلورسنت المسمى E. الجسيمات القولونية هي 1 ملم في الطول، في حين أن الهيموسيات هي 10 ملم في قطر17. فقط تلك الأحداث الفلورسنت الموجودة داخل قطر 10 مم التي تركز على نواة DAPI إيجابية يتم عدها (الشكل 4). لقياس الأحداث الفلورية ، يتم استخدام برنامج ImageJ (الشكل 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig1.jpg"> الشكل 1: موقع الحقن والتحقق البصري. (أ) الجانب الجانبي من الصدر مثقوب بإبرة من الشعر الشعري المسحوب. (B) يتم التحقق بصريا من الحقن عن طريق إضافة صبغة الغذاء الأخضر إلى حل الجسيمات. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig2.jpg"> الشكل 2: تشريح السفينة الظهرية. (A) يتم وضع دبابيس في الصدر والبطن الخلفي (السهام السوداء). (B-C) يتم إجراء شقين أفقيين (السهام الخضراء) في الطرف الخلفي من البطن (B) ، والنهاية الأمامية (C). (د)يتم إجراء شق عمودي (السهم الأخضر) أسفل منتصف البطن، وربط التخفيضات الأفقية اثنين. (E) دبابيس اختيارية (*) تستخدم في وضع مفتوح في تجويف البطن ، مما يعرض الأنسجة الداخلية. (F) تتم إزالة الأنسجة الداخلية (المحاصيل والأمعاء والرحم والمبايض والأجسام الدهنية) ، مما يعرض الوعاء الظهري. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig3.jpg"> الشكل 3: عرض فينترال لوعاء ظهري تشريحي من أنثى عمرها 5 أسابيع حقنت بالجسيمات الحساسة من مادة حُكْرَسَرَسَرَسَسِس، ملطخة بالأجسام المضادة الموجهة ضد بيريكاردين (A). خط أبيض منقط الخطوط العريضة الجانب الجانبي من السفينة الظهرية، مع السهم يشير نحو المنطقة الأمامية. (B) صورة موسعة من (A):مجموعات من الهيموسيات (السهم الأزرق) التي كانت البكتيريا المهينة بنشاط ، داخل الغرفة الأبهري الأولى للسفينة الظهرية. (C) صورة مكبرة من (A) تحدد المصفوفة خارج الخلية (ECM) مثل البروتين الكولاجين ، بيريكاردين (السهم الأخضر) ، الذي يحمل السفينة الظهرية في مكان24. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig4.jpg"> الشكل 4: تشريح الأوعية الظهرية والهيموسيات المرتبطة بها من ذبابة أنثى حقنها مع الجسيمات الحساسة الرقم الH، أو جزيئات الفلورو. (A) الأوعية الظهرية والهيموسيات المرتبطة بها مع الجسيمات القولونية ذات العلامات الحساسة ذات العلامات الـ (الأحمر) ذات العلامات الهستيرية (E) (أحمر) ، أو (E) جسيمات الإشريكية القولونية (الحمراء) ، معزولة عن ذبابة عمرها أسبوع واحد ، بعد تعافيها لمدة 60 دقيقة (B ، F) مكبرة من (A) و (E)(مربع أبيض ) ، على التوالي ، تظهر اثنين من الهيمواج الفردية مع أحداث يمكن عدها. (C) الأوعية الظهرية والهيموسيات المرتبطة بها مع الجزيئات E. coli ذات العلامات الحساسة ذات العلامات الـHH المُتلعومة (الحمراء)، أو (G)الفلورو المسمى E. جسيمات القولونية (الحمراء)، معزولة عن ذبابة عمرها 5 أسابيع، بعد تعافيها لمدة 60 دقيقة (D،H)مكبرة من (C)و (G) (مربع أبيض)، على التوالي، تظهر اثنين من الهيماتولي الفردية مع أحداث يمكن عدها. خط أبيض منقط الخطوط العريضة الجانب الجانبي من السفينة الظهرية، مع السهم يشير نحو المنطقة الأمامية. نوى ملونة مع DAPI (الأزرق). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60983/60983fig5.jpg"> الشكل 5: قياس الأحداث البلعائية في نطاق خلايا الدم 10 مم باستخدام عداد الخلايا في ImageJ. (A) بعد فتح صورة (صور) في ImageJ، يمكن استخدام أداة "إشعار عداد الخلية" لتتبع الأحداث البلعمية في الخلية. (B)ستقوم هذه الأداة بتعيين لون مختلف لكل خلية يتم اختيارها ليتم عدها، مع مطابقة كل نقطة لحدث الفلورسنت داخل تلك الخلية. الضغط على 'alt+y' سيعرض جدولاً يعرض عدد الأحداث التي تم حسابها لكل خلية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60983/60983fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

يصف هذا البروتوكول في مقايسة في الجسم الحي من البلعوم تستخدم لتقييم وقياس قدرة الشباب والمسنين Drosophila الهيموسيات الميلانوغاستر على البكتيريا البلعمية.

تقييم القدرة Phagocytic العمر محددة من الكبار دروسوزيلا الهيموسيات الميلانوغاستر باستخدام في فيفو الفاتن الدمج

Phagocytosis is an essential function of the innate immune response. This process is carried out by phagocytic hemocytes whose primary function is to ...

يوفر بروتوكولنا نهجًا فعالًا وقابلًا للتكرار لتقييم وقياس الأحداث البلعوية في الدمى. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أننا نستطيع قياس الأحداث البلمائية داخل هافوسيسات الفردية التي تسمح لنا بالكشف عن الاختلافات في العمليات البلعومية بين الأنماط الجينية في الذباب الفردي. يمكن أن يكون إجراء التشريح تحديًا ، لذلك عند تنفيذ هذه التقنية لأول مرة ، يمارس التشريح قدر الإمكان قبل إجراء الإجراء الكامل.تبدأ من خلال إعداد الإبر الزجاجية للحقن. ملء حقنة ملليمتر واحد مع النفط المعدني، وإرفاق إبرة تحت الجلد قياس 30 المقدمة مع نانو حاقن. أدخل إبرة قياس 30 في الطرف الحاد من إبرة شعرية سحبت وملء مع النفط المعدني.إزالة ببطء إبرة قياس 30 التأكد من أن يتم تشكيل أي فقاعات الهواء. إزالة كوليت ووضع خاتم O مختومة مع المسافة البادئة التي تواجه لأعلى. وضع أكبر O-حلقة على المكبس المعدنية، ثم إعادة ربط كوليت دون تشديد.أدخل المكبس المعدني في الطرف الحاد من إبرة الزجاج المملوءة بالزيت وادفعها برفق إلى أسفل لإدخالها في حلقة O الأكبر. ثم تشديد كوليت حتى آمنة. بعد ملء الإبرة بالفلور أو الجسيمات الحساسة للحم ، قم بحقن الذباب في الصفيحة الصدرية.الحقن ناجح إذا كانت الصبغة الخضراء تسير في الذبابة. وضع الذباب حقن في قارورة الغذاء الجديد مشيرا إلى الوقت الذي تم حقن الذبابة الأولى والأخيرة. وضع القارورة على جانبها حتى جميع الذباب قد تعافى لمنعهم من الحصول على عالقا في الغذاء.توجيه الجانب البطني ذبابة حتى تحت تشريح stereomicroscope. ثم أدخل دبوس حشرة في الصدر وآخر من خلال الطرف الخلفي من البطن بالقرب من الأعضاء التناسلية. مرة واحدة وقد تم تثبيت جميع الذباب، واستخدام pipet نقل لإضافة وسائل الإعلام تشريح ما يكفي لتغطية الذباب.إزالة الرأس مع مقص بشرة، وجعل شق أفقي مباشرة فوق دبوس الخلفي في البطن، ثم آخر في الطرف الأمامي من البطن. إجراء شق عمودي يربط بين الشقين الأفقيين الذي سيفتح تجويف البطن. استخدام ملقط لإزالة الأعضاء الداخلية والأنسجة، والتأكد من تجنب السفينة الظهرية.إذا لزم الأمر، استخدم دبابيس إضافية لتأمين نهايات قطع من بشرة. ثم إزالة الصدر مع مقص بشرة. تجاهل وسائل الإعلام تشريح واستبدالها مع ملليلتر واحد من 4٪ PFA، وحماية تشريح من الضوء قدر الإمكان.إصلاح التشريح لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في حين هزاز في 20 دورة في الدقيقة. ثم إزالة المثبت وإضافة ملليلتر واحد من 1X PBST. إذا رغبت في ذلك، وصمة عار تشريح مع الأجسام المضادة.بعد تركيب البشرة على شريحة المجهر، استخدم ملقط لتوجيه الجانب البطني لهم حتى، وتأكد من أن السفينة الظهرية مرئية. تم تقييم الذباب الصغير والذان لقدرة محددة على العمر على إجراء البلعمة عن طريق التصوير الفلوري لأوعية الدم على طول السفينة الظهرية. تم استخدام جسم مضاد ضد الميضور لضمان أن الخلايا فقط على طول السفينة الظهرية تم عدها.وبما أن جزيئات الإشريكية القولونية المسماة بالفلورسنت هي ميكرومتر واحد في الطول والهيموسيات هي 10 ميكرومتر في القطر، تم حساب الأحداث الفلورية فقط داخل قطر 10 ميكرومتر تركزت على نواة إيجابية DAPI. ثم تم استخدام برنامج ImageJ لتحديد الأحداث. عند محاولة هذا الإجراء، من المهم تصور أن الذبابة قد تم حقنها بالفعل وتذكر أن التوقيت أمر بالغ الأهمية.إن استكمال الحقن والتشريح في الوقت المناسب سيساعد على تقليل الخطأ التجريبي والاختلافات المحتملة في معدل البلعوم. هذه التقنية سوف تسمح للباحثين لاستكشاف مجموعة متنوعة من المواضيع البحثية بما في ذلك الأسئلة المتعلقة المناعة الخلوية, مجموعات مختلفة من خلايا الدم أو التمييز بين البلعم الدم من إنتاج AMP خلال استجابة مناعية ناجحة.

assessing-age-specific-phagocytic-ability-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

hemocytes ذبابة الفاكهة تفريق أكثر من مجمل الجنين النامية. هذا البروتوكول يوضح كيفية تحميل الصور وهذه الهجرات استخدام الاجنة مع hemocytes fluorescently المسمى.

يعيش تصوير ذبابة الفاكهة السوداء البطن هجرات كرية دموية الجنينية

ذبابة الفاكهة هيموليمف بمثابة دم وسوائل خلالي ، ينتشر في جميع أنحاء الجسم خلال مراحل اليرقة والبالغين. يصف هذا الفيديو بروتوكولا لجمع اليرقات من أجل تحديد الخلايا المنتشرة.

اضطراب البشرة: طريقة لجمع الهيموليمف من ذبابة الفاكهة يرقات

يوضح هذا الفيديو تقنية تلطيخ مناعي لتصور ابتلاع الخلايا المبرمج في الخلايا الجنينية المتجانسة ذبابة الفاكهة السوداء. توفر هذه الطريقة نظرة ثاقبة على فسيولوجيا الخلايا من خلال تحديد مدى ابتلاع الخلايا المبرمجة.

مقايسة البلعمة: تقنية تلغيم مناعي لتصور ابتلاع الخلايا المبرمج في الخلايا الجنينية ذبابة الفاكهة السوداء

يوضح هذا الفيديو فحصا في الجسم الحي مصمما لقياس البلعمة البكتيرية في ذبابة الفاكهة البالغة. بعد حقن البكتيريا المصنفة بالفلورسنت في بطن الذباب البالغ ، تنخرط الخلايا الدموية المرتبطة بالوعاء الظهري في البلعمة. يعمل إدخال صبغة التريبان الزرقاء على إخماد التألق المنبعث من البكتيريا خارج الخلية وغير البلعمة. تعزز عملية التبريد هذه التعرف على البكتيريا البلعمة عند ملاحظتها تحت المجهر الفلوري.

اختبار In Vivo لتحديد كمية البلعمة البكتيرية في ذبابة الفاكهة البالغة

ذبابة الفاكهة ، أو خلايا الدم ، تدور بين المواقع المقيمة والدورة الدموية.  في اليرقة ، تتمركز الخلايا الدموية المقيمة (اللاطئة) في البيئات الدقيقة الاستقرائية ، والجيوب المكونة للدم ، بينما تتحرك الخلايا الدموية المنتشرة بحرية في الهيموليمف. الهدف من هذا البروتوكول هو العزل الموحد والقياس الكمي لهذين المجموعتين ، المتمايزتين سلوكيا ولكنهما متداخلتان.

يعاير بالسكان خلية الدم لل<em&gt; ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em&gt; اليرقة

ذبابة الفاكهة والنظم المكونة للدم الثدييات تشترك في العديد من السمات المشتركة، مما يجعل ذبابة الفاكهة نموذجا جذابا الجيني لدراسة تكون الدم. نحن هنا لشرح تشريح والتركيب من الجهاز المكونة للدم اليرقات كبيرا لالمناعية. وصفنا أيضا أساليب لفحص مختلف الأجزاء المكونة للدم اليرقات بما في ذلك تعميم hemocytes وخلايا الكريستال اطئة.

طرق لفحص الليمفاوية الغدة وHemocytes في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

نحن هنا وصف مقايسة البلعمة باستخدام الخلايا الجنينية فرقت من ذبابة الفاكهة . أنها تمكننا من تحديد بسهولة ودقة في مستويات البلعمة في الجسم الحي ، وتحديد جزيئات جديدة مطلوبة للبلعمة من الخلايا أبوبتوتيك.

البلعمة فحص الخلايا الخلوية في ذبابة الفاكهة الأجنة

هذا الأسلوب يوضح كيفية تصور غزو العوامل الممرضة في خلايا الحشرات مع نماذج ثلاثية الأبعاد (3D). هيموسيتيس من اليرقات المورفولوجية مصابات بمسببات الأمراض الفيروسية أو البكتيرية، أما فيفو السابقين أو في الجسم الحي. هيموسيتيس المصابة ثم الثابتة والملون للتصوير بالمجهر [كنفوكل] والتعمير الخلوية 3D اللاحقة.

استخراج هيموسيتيس من اليرقات melanogaster المورفولوجية للعدوى الميكروبية والتحليل

ويصف هذا البروتوكول مقايسة المجراة في البلعمه في الكبار melanogaster المورفولوجية التحديد الكمي للاعتراف بلعمية وتخليصها من العدوى الميكروبية.

تقييم الاستجابة المناعية الخلوية ذبابة الفاكهة، melanogaster المورفولوجية، استخدام "في فيفو البلعمه بالانزيم"

تم تصميم هذا البروتوكول لتقييم صلاحية دروسوفيلا في كل مرحلة من مراحل النمو، من الجنين إلى الكبار. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد ومقارنة صلاحية مختلف الأنماط الجينية أو ظروف النمو.

طريقة مباشرة وبسيطة لتقييم قدرة دروسوفيلا ميلانوغاسترعلى البقاء من الجنين إلى الكبار

اكتشف تقييم البلعمة في خلايا الدم لذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster باستخدام تقنية التصوير الفلوري. تتيح هذه الطريقة قياس الأحداث البلعمية في الخلايا الفردية ودراسة الاختلافات المرتبطة بالعمر.

تقييم القدرة Phagocytic العمر محددة من الكبار دروسوزيلا الهيموسيات الميلانوغاستر باستخدام في فيفو الفاتن الدمج

استكشف المزيد من الفيديوهات