الطولية في التصوير فيفو و الكم من تطعيم جزيرة البنكرياس الإنسان والخلايا المضيفة المساهمة في غرفة العين الأمامية

إن ACE هي مشاهد تصوير مثالية. وهو يدعم تكرار ذلك على المدى الطويل في التصوير الجسمي للخلايا الجزيرة من أجل دراسة وظيفتها و قابليتها للحياة في حالة التطعيم. ويمكن أيضا أن تمتد لدراسة الجوانب الأخرى في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية في الوقت الحقيقي.

ميزة تقنية ACE تكمن في حقيقة أن نفس الجزر البنكرياس الإنسان الفردية يمكن أن يتبع noninvasively مع القرار دون الخلوية لفترة طويلة من الزمن. معدلات نجاح بيتا استبدال الخلايا العلاج مواصلة تحسين. ومع ذلك، لا يزال تقييم كفاءة تطعيم الجزر والبقاء على قيد الحياة في الجسم الحي، تحدياً.

ويمكن أن تساعد هذه الطريقة في تقييم وتحسين نتائج عمليات زرع الجزر. هذا النهج لا يقتصر على الجزر البنكرياسية فقط. كما أنها مناسبة تماما لدراسة الأنسجة المتضررة.

على سبيل المثال، في مضاعفات السكري، مثل كبيبات الكلى أو قطع الكبد، فقط على سبيل المثال لا الحصر. لبدء وضع الماوس على وضع وسادة التدفئة الدافئة في حامل الرأس ووضع على قناع الأنف. استخدام الإبهام وسببة لرفع الرأس قليلا.

ربطه مع القطع المعدنية على الجانبين. التأكد من أن قطع الأذن تصلح الرأس مباشرةً أسفل الأذنين. دون الجلد حقن حل البوبرينورفين في الجزء الخلفي من الماوس.

تراجع بلطف جفون العين ليتم زرعها باستخدام ملقط حادة. البوب العين وإصلاحها فضفاضة مع زوج من الملاقط مغطاة أنبوب البوليثين. بعد نقل الجفون إلى طبق بيتري مع برنامج تلفزيوني ، التقط ما يقرب من 20 إلى 30 جزيرة في العين.

باستخدام مستوى إبرة قياس 25 لأعلى، أدخل الطرف بعناية في القرنية وقم بعمل شق واحد. ارفع القرنية بعناية مع القنية المحملة مسبقًا بالذريات الصغيرة، وحرر الجزر ببطء في العين. تراجع ببطء في القنية وتطبيق جل العين على العين.

بعد 10 دقائق، قم بإزالة الملبسة، وعقد الجفن ووضع العين مرة أخرى إلى وضعها الطبيعي. لتصوير الجزر البشرية المزروعة مع اثنين من المجهر فوتون، ضع منصة حامل الرأس تحت المجهر وإعطاء هلام العين على العين كسائل الغمر بين القرنية والعدسة. ضع العين تحت الهدف والصورة التي زرعتها الجزر البشرية كما هو موضح في المخطوطة النص.

لإزالة الفلورة التلقائية، انتقل إلى علامة التبويب معالجة الصور، واختر حساب القناة واكتب القناة الأولى ناقص القناة الثانية. هذا يخلق قناة جديدة أربعة. إعادة تسميتها الأوعية الدموية.

كرر هذه العملية واكتب القناة الثالثة ناقص القناة الثانية لإنشاء قناة جديدة خمسة وإعادة تسميته الطماطم كلها. لتعريف جزيرة يدوياً إنشاء سطح جديد واختيار تحرير يدوياً في المعالج. احتفظ بالمؤشر في وضع التحديد وفي طريقة العرض ثلاثية الأبعاد.

وانقر على وحدة التخزين لتصور المقاطع. في علامة التبويب الرسم اختيار كفاف وانقر فوق رسم لبدء رسم ملامح حول حدود جزيرة، بدءا من موقف شريحة واحدة. ثم الانتقال إلى موضع شريحة جديدة وتكرار رسم ملامح.

الانتهاء مع الشريحة الأخيرة في الجزء العلوي من جزيرة ونهاية عن طريق النقر على إنشاء سطح علامة التبويب. الجزء التالي، والأوعية الدموية جزيرة وفلورسينسي الطماطم الجزر باستخدام قناع جزيرة. اختيار الكائن قناع جزيرة المعرفة سابقا، انتقل إلى علامة التبويب التحرير وانقر فوق علامة التبويب قناع كل، الذي يفتح نافذة جديدة.

اختيار قناة vasculature في القائمة المنسدلة اختيار القناة وتفعيل خيارات قناة مكررة قبل تطبيق قناع. ثابت داخل, خارج وتعيين voxels خارج السطح إلى 0.000 الذي يخلق قناة جديدة ستة. إعادة تسمية هذه القناة الأوعية الدموية جزيرة.

كرر الخطوات السابقة واختيار الطماطم في جميع القائمة المنسدلة اختيار القناة، لإنشاء قناة جديدة، وإعادة تسميتها، الطماطم جزيرة. ثم قم بإنشاء سطح جديد في قائمة المشهد واختر الإنشاء التلقائي في المعالج. تعيين القناة المصدر إلى الأوعية الدموية جزيرة المنشأة سابقاً واختيار الطرح الخلفية.

اختياريا استخدام المرشحات. على سبيل المثال اختيار وحدة التخزين وضبط عامل التصفية في النافذة، والتي يمكن إزالة كائنات الخدمة المحددة. إنهاء المعالج وتسمية الكائن السطحي الجديد، والأوعية الدموية جزيرة.

في الكائن خدمة الأوعية الدموية جزيرة انتقل إلى علامة التبويب التحرير وانقر فوق علامة التبويب قناع الكل، الذي يفتح نافذة جديدة. اختيار قناة الطماطم جزيرة في القائمة المنسدلة اختيار القناة وتعيين voxels خارج السطح إلى 10.000 الذي يخلق قناة جديدة. إعادة تسمية هذه القناة الطماطم الأوعية الدموية.

لشرائح الطماطم كبسولة الفلورسنت إشارة اختيار حساب القناة في علامة التبويب معالجة الصور ونوع قناة سبعة ناقص قناة ثمانية خلق قناة جديدة. إعادة تسميته كبسولة الطماطم. إنشاء سطح جديد كما هو موضح سابقا واختيار القنوات المصدر، والأوعية الدموية الطماطم جزيرة أو كبسولة الطماطم في المعالج.

ثم قم بإجراء طرح الخلفية. افتح الملف الخلفي جزيرة ثم إنشاء سطح جديد. في المعالج، اختر الإنشاء التلقائي وحدد منطقة الاهتمام.

إذا لزم الأمر، ضبط عتبة في كثافة مطلقة. يمكن النقر على الكائن السطح أو إيقاف تشغيله، لتقاطع مع كثافة القناة المقابلة. عند الانتهاء إغلاق المعالج.

وأخيراً، قم بإجراء القياس الكمي، وحدد كائن سطحي تم إنشاؤه في قائمة المشهد، ثم انتقل إلى علامة تبويب الإحصاءات. لاسترداد بيانات حجم مفصلة، اختر علامة التبويب التفصيلية وحدد قيمًا وحجمًا محددًا من القائمة المنسدلة. لاسترداد إجمالي قيمة وحدة التخزين انتقل إلى علامة التبويب التفصيلية واختر متوسط القيم.

تم استخدام هذا البروتوكول لزرع الجزر البشرية غير المسماة في الغرفة الداخلية للعين من ثمانية أسابيع أنثى الفئران المتلقي الفلورسنت الحمراء. ثم استُخدمت برامج التصوير التفاعلية لاستخراج البيانات الكمية من الصور. في التصوير الفلوري في الجسم الحي ، تعرضت الطعوم الجزيرة البشرية للخطر بسبب التداخل الكبير من الأنسجة ذات الفلور التي لم يتم ملاحظتها في ترقيع الجزر الفئرانية.

لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء، تم طرح قناة الفلوروس. ثم تم تعريف حدود جزيرة تسمى قناع الجزر والقنوات المقابلة يدويا. وأخيرا، تم استخدام تجزئة إشارة الطماطم في الأوعية الدموية الجفن وكبسولة الجفن وتقديم السطح النهائي لاستخراج البيانات الكمية.

هنا كجلسة تصوير طولية تمثيلية لنفس الكسب غير المشروع في الجزر البشرية في أسبوعين وشهرين وخمسة أشهر وثمانية أشهر بعد الزرع. يتم عرض صور MIP للبيانات الخام المسجلة في الأصل ، والصور المعالجة بعد إزالة الفلورس التلقائي والجزرية وكائنات جزيرة مجزأة. عند إجراء حقن الجفن، تأكد من تحميل الجزر بشكل مسبق في حجم صغير واستخدام أذرع خفيفة مرنة على مجهر الاستريو الخاص بك، لتسليط الضوء على مساحة غرفة العين من أجل حقن الجزر بنجاح في ACE.

بعد التصوير في الجسم الحي يمكن إصلاح العينين ومزيد من التحقيق في تلطيخ الأجسام المضادة وعلم الأنسجة التقليدية. هذه التقنية مفيدة جدا للدراسات الوظيفية من الجزر البشرية الفردية في الوقت الحقيقي وتحت الظروف الفسيولوجية، وخاصة في سياق الأوعية الدموية، ودراسة الجدوى والتمثيل الغذائي.