أخذ العينات في الموقع واستخراج أورام المخ لتحليل الاستقلابات والدهون

تعرض المخطوطة عينات في الموقع من أورام الدماغ البشرية مع مرحلة صلبة من الميكروسكشن المتبّرد متبوعة بتشخيطها الكيميائي الحيوي نحو اكتشاف المؤشرات الحيوية.

يمكن استخدام هذا البروتوكول لإجراء استخراج من أورام الدماغ في أو بجوار خادم على استخدام الألياف الدقيقة المرحلة الصلبة. هذه التقنية تمكن من استخراج جزيئات صغيرة مباشرة من الأورام المُجَرَّحَة، وتوفر فرصة للتشخيص السريع داخل العملية عن طريق اقتران أجهزة الاستخراج مباشرة بالأجهزة التحليلية. لإعداد جهاز microextraction المرحلة الصلبة، تقليم الترميز من كل مرحلة صلبة مسبار جهاز microextraction مع وضع مختلط أو الطلاء C18 إلى طول مناسب وفقا لحجم الورم.

ونقع مسابير و50 50 محلول ماء الميثانول لمدة ساعة واحدة على الأقل قبل جمع العينة. يركز هذا البروتوكول على أورام الدماغ ولكن يمكن تنفيذ الاستراتيجية لتشخيص العديد من أنواع السرطان المختلفة. التكنولوجيا هي محمولة تماما، لذلك ليس هناك حاجة لأي أجهزة إضافية.

في أقرب وقت ممكن بعد إزالة الورم تزج ألياف التحقيق مع LCMS الصف المياه لمدة خمس ثوان قبل إدراج الألياف قدر الإمكان في عينة أنسجة الورم في الدماغ، لضمان أن تقع مرحلة الاستخراج بأكملها داخل الورم. ترك تحقيقات داخل الأنسجة بدقة 30 دقيقة للقضاء على مصادر الخطأ بسبب وجود القطع الأثرية من مصادر أخرى غير الورم العينة، ووضع ألياف التحقيق مشروطة على الطاولة لنفس الفترة من الزمن. أثناء الاستخراج، تسمية قوارير HPLC لاستخدامها في التخزين التحقيق بعد الاستخراج.

في نهاية الاستخراج، غمر الألياف في LCMS الصف المياه لمدة ثلاث ثوان لإزالة أي حطام الدم أو الخلية وإدراج كل مسبار من خلال الجزء السفلي من الحاجز من غطاء قارورة HPLC واحد لشل الألياف. ثم قم بغطاء قارورة مع الألياف غير المُشلَّولة ووضع القنينات في حاوية نقل مناسبة. عند وصول المختبر، وضعت على الفور قارورة في ناقص 30 أو ناقص 80 درجة مئوية الفريزر لمدة لا تزيد على ثلاث أو خمس سنوات على التوالي.

بمجرد جمع جميع العينات من تجربة واحدة، ضع القنينات التي تحتوي على ألياف الوضع المختلط في درجة حرارة الغرفة. وتسمية قارورة مليلتر اثنين لdorption مكان إدراج الزجاج في كل قارورة وإضافة 300 ميكرولترات من الطازجة 80 20 محلول المياه الأسيتونيتريل لكل إدراج. مغمورة تماما ترميز كل مسبار في قارورة الفردية من المذيبات desorption وتهيج قوارير لمدة 120 دقيقة في 1، 200 الثورات في الدقيقة الواحدة على دوامة.

بمجرد اكتمال desorption ، وإزالة قبعات من قوارير وتوضع جانبا 10 aliliter من كل ملف يحتوي على استخراج من الورم لإعداد عينة مراقبة الجودة. ثم أغلق القنينات بقبعات جديدة ووضع القنينات في عينة السيارات أربع درجات مئوية من مطياف الكتلة عالية الدقة. لإعداد العينات لتحليل Lipidomic مكان قارورة تحتوي على ألياف C 18 في درجة حرارة الغرفة وتسمية اثنين من المليلتر قوارير HPLC لخلل مكان الزجاج silanized إدراج في قوارير وإضافة 200 ميكرولترات من الطازجة 50 50 50 حل الميثانول isopropanol لكل إدراج.

غمر تماما كل طلاء التحقيق في المذيبات وتهيج العينات لمدة 50 دقيقة في 1، 200 الثورات في الدقيقة الواحدة على دوامة. في نهاية ذلك الوقت، وقف desorption عن طريق إزالة القبعات ومن ثم جانبا 10 ميكروليتر aliquots من كل ملف يحتوي على استخراج من الورم لإعداد عينة مراقبة الجودة وإغلاق قوارير مع قبعات جديدة. ثم، ضع القنينات في أربع درجات مئوية أخذ عينات السيارات من الطيف الكتلي الكروموغرافيا السائل عالية الدقة.

وقد تقرر أن استنساخ التحليل الفعال جيد جدا استنادا إلى التجميع المحكم لعينات مراقبة الجودة على مخطط تحليل المكونات الرئيسي. هذه البيانات الدهون للعينات التي تم جمعها من المرضى الذين يعانون من الأورام الدبقية و السحايا تسليط الضوء على قدرة عينات الورم على أن تكون مميزة وفقا لأصلها النسيجية و خبيثة. كما هو موضح مع هذه البيانات المستقلبومية، يمكن تقسيم الأورام الدبقية على أساس درجة خبيثة أو وفقا لوجود أو عدم وجود الطفرات من الفائدة.

كما يسمح التحليل الإحصائي باختيار مركبات محددة داخل المجموعات المدروسة. ومن الضروري التحكم بعناية في وقت الاستخراج والحفاظ على الظروف القابلة للتكرار لجميع العينات. بدلا من ذلك، يمكن حل العينات من الألياف مباشرة إلى السيدة دون فصل الكروماتوغرافية السماح للتحليل المستهدف من علامات محددة وتقصير الإجراء بأكمله إلى عدة دقائق.