إنشاء وصيانة الصراصير الأمريكية الغنوتوبيوتية (Periplaneta americana)

يسهل بروتوكول توليد الصراصير الغنوتوبيوتك اختبار تأثير إزالة واستبدال مجتمع الميكروبات في الأمعاء الأصلية على صحة المضيف وتجميع الميكروبيوم. تستخدم هذه التقنية أساليب من مصادر متعددة لتشكيل سير عمل متماسك ومبسط لتوليد الصراصير الغنوتوبيوتية دون استخدام معدات مختبر متخصصة باهظة الثمن. وبالنظر إلى الأجزاء المتحركة المختلفة العديدة من هذا البروتوكول الغنوتوبيوتك، يساعد التصور الباحثين على إنشاء مرافقهم الغنوتوبيوتية الصغيرة والمنخفضة التكلفة والكبيرة على مقاعد البدلاء.

لتسهيل جمع العدد المناسب من الإناث تحمل oothecae للتجارب المخطط لها، واستخدام ملقط لنقل أنابيب من الورق المقوى التي تحتوي على الإناث gravid في خزان الأوراق المالية. إذا كان أنبوب من الورق المقوى يحتوي على حشرات متعددة بالإضافة إلى الأنثى المرقة ، هز محتويات الأنبوب في وعاء بلاستيكي إضافي محاط بهلام البترول وشجع الحشرة المستهدفة على الصعود مرة أخرى إلى أنبوب الورق المقوى وحده. عند الجمع، نقل كل أنثى gravid إلى جناح الأمومة.

مرة واحدة وقد انخفض الإناث oothecae بهم، والعودة الإناث إلى خزان الأوراق المالية واستخدام ملقط لاسترداد oothecae من القمامة. لتنظيف oothecae، ضع ما يصل إلى خمس حالات بيض في أنبوب طرد مركزي من خمسة ملليلتر يحتوي على ثلاثة ملليلترات من كبريتات دودسيل الصوديوم ودوتكس الأوثيكاي لمدة 10 ثوان. بعد غسل الثانية كما أظهرت للتو، واستخدام مسح مهمة حساسة لفرك بلطف سطح كل ootheca لإزالة أي حطام ووضع ootheca تنظيفها في قارب الوزن.

قبل التعقيم، املأ أنبوبي طرد مركزي 1.5 ملليلتر لكل ootheca بميليلتر واحد من الماء العقيم لكل أنبوب. أضف أيضا 10 ميكرولترات من محلول مخزون حمض البيرسيت 32٪ إلى 3.2 ملليلتر من الماء المقطر المزدوج في أنبوب طرد مركزي من خمسة ملليلتر في غطاء الدخان. كاب وعكس عدة مرات لخلط ووضع ما يصل إلى خمسة تنظيفها oothecae في محلول حمض البيرسيت الطازجة 0.1٪ لمدة خمس دقائق، عكس الأنبوب عدة مرات كل 60 ثانية.

حمض البيرسيت هو مؤاكس قوي العين والجلد والمهيجة التنفسية، وهو قابل للاشتعال والتآكل. ارتد دائما معدات الوقاية الشخصية المناسبة أثناء التعامل مع النفايات والتخلص منها بشكل مناسب. في نهاية الحضانة ، استخدم ملقط معقم وغطاء تدفق صفح لنقل كل ootheca إلى أنبوب الطرد المركزي الخاص به من ماء الشطف العقيم.

عكس عدة مرات لخلط قبل نقل oothecae إلى المجموعة الثانية من أنابيب من الماء شطف. بعد الشطف الثاني ، استخدم ملقط معقم لنقل oothecae إلى lants BHI الفردية. ضع الميول في حاوية ثانوية معقمة ونقل الحاوية إلى حاضنة رطبة 30 درجة مئوية لمدة أربعة إلى خمسة أسابيع حتى تفقس.

تحقق من الميول بانتظام مرة إلى مرتين في الأسبوع للنمو الفطري أو البكتيري حتى الأسبوع الرابع ، وعند هذه النقطة يجب فحص الميول يوميا. عندما تبدأ الحوريات في الفقس ، استخدم ملقط معقم وغطاء تدفق صفيحة لنقل بيليه من طعام الفئران المعقم إلى قارورة BHI معدة. وكفحص للعقم، ضع القارورة في الحاوية الثانوية في حاضنة 30 درجة مئوية لمدة 24 ساعة لتأكيد عدم وجود نمو ملوث.

إذا ظلت القارورة معقمة، هز الحوريات من الميل، والسماح لهم تقع في قارورة في غطاء محرك السيارة تدفق صفح. ثم المياه الحوريات مع 300 ميكرولتر من المياه العقيمة مرة واحدة في الأسبوع في غطاء محرك السيارة تدفق صفح. عندما يبدأ البراز حورية لتغطية الطابق المتوسط، ونقل الحوريات إلى قارورة BHI جديدة تحتوي على تشاو الفئران المعقمة وأضاف 24 ساعة مقدما، كما هو موضح.

يمكن التعرف على الإناث الحوامل عن طريق ootheca تعلق على البطن الخلفي. يفقس oothecae في المتوسط 34 يوما بعد التعقيم. في حالات التعقيم غير الناجحة ، يمكن أن يظهر النمو حول oothecae أثناء الحضانة ، مما يعرض الحالة الغنوتوبيوتية للفقس للخطر.

ثم يمكن تتبع معدل نمو الحوريات عن طريق قياس طول جسم الحشرات. تقييد طول جزء تعدد الأشكال من الحمض النووي الريبوسومي 16S من حورية متجانسة يمكن استخدامها لتأكيد الحالة الغنوتوبيوتية. يمكن تلقيح الصراصير الغنوتوبيوتية بالمجتمعات الميكروبية الاصطناعية أو الزنوبوتية.

في حين أن سير العمل هذا هو جديد ، فقد ولدت الدراسات السابقة باستخدام الصراصير الغنوبيوتية نظرة ثاقبة على تجميع ميكروبيوم الأمعاء والأدوار الميكروبية في تشكيل السلوك الاجتماعي ، وصحة الأمعاء ، ومناعة مضيفيهم الحشرات.