تصوير كهربية الدماغ بالفيديو المستمر أثناء نقص الأكسيجة -الإقفارية في فئران حديثي الولادة

الاعتلال الدماغي الإقفاري الناجم عن نقص التأكسج هو السبب الأكثر شيوعا لنوبات الصرع عند حديثي الولادة. يمكن أن يساعد نموذج الفأر هذا للنوبات الإقفارية الناقصة للأكسجين وتخطيط كهربية الدماغ بالفيديو المستمر أو مخطط كهربية الدماغ في زيادة فهمنا وتوصيف نوبات الأطفال حديثي الولادة. تسهل هذه التقنية الحصول على تسجيلات تخطيط كهربية الدماغ بالفيديو عالية الجودة في نموذج إصابات حديثي الولادة ويمكن أن تساعد في الدراسات المستقبلية لآليات نوبات الصرع والنتائج والاختبارات

وسيكون برافين واجلي إظهار الإجراء. أخصائي مختبر من مختبري. لجراحة زرع القطب.

بعد التأكد من عدم الاستجابة لمنعكس الألم في فأر اليوم التاسع بعد الولادة المخدر ، ضعي الفأر في مرحلة تجسيمية مع مخروط أنف واستخدمي الجانب الخلفي من شريط الأذن لتثبيت الرأس. قم بتعقيم منطقة الشق على الجمجمة بثلاثة مقشرات متناوبة من البيتين و 70٪ من الإيثانول واستخدم ستارة محشوفة لتغطية الفأر مع الحفاظ على منطقة الشق مرئية. افتح فروة الرأس الأمامية الخلفية من أعلى العينين قليلا ، واسحب ما يقرب من نصف سنتيمتر من الجلد.

أعد وضع الرأس على المرحلة التجسيمية بحيث يسحب الجلد للخارج لكشف الجمجمة ، واستخدم قطعة قطن لتطبيق بيروكسيد الهيدروجين. استخدم شفرة مشرط لكشط الجمجمة بعناية. وضعي قطرة 50 ميكرولتر تقريبا من المادة اللاصقة على العظم.

استخدم أداة التطبيق لنشر المادة اللاصقة على الجمجمة ووضع المادة اللاصقة تحت الأشعة فوق البنفسجية لمدة 40 ثانية. عندما يتم ضبط المادة اللاصقة ، قم بقياس الإحداثيات باستخدام بريجما المكشوفة كمرجع. واستخدم إبرة قياس 32 لإنشاء ثقوب قطب كهربائي ثنائيا في منطقة CA1 من الحصين ، بشكل ثنائي في القشرة الجدارية وفي

نظف الدم من سطح الجمجمة واستخدم الذراع التجسيمية لخفض الأقطاب الكهربائية المتصلة بموصل التجويف الأنثوي في الدماغ. ازرع كل قطب كهربائي في الدماغ وثبت الأقطاب الكهربائية في مكانها باستخدام أكريليك الأسنان. قم بلصق سماعة الرأس على الجمجمة بأكريليك أسنان إضافي.

حقن تحت الجلد خمسة ملليغرام لكل كيلوغرام من كيتوبروفين في كل جرو. عندما يتم تأمين جميع الأقطاب الكهربائية في نصف القمامة على الأقل ، أعد الجراء إلى الأم. بعد 24 ساعة من زرع القطب الكهربائي ، ضع كل في غرفة زجاجية مصنوعة خصيصا بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لتسجيل مخطط كهربية الدماغ واستخدم كابل مكبر صوت تشغيلي مرن مخصص لتوصيل الجراء بنظام مراقبة مخطط كهربية الدماغ بالفيديو.

استخدم مكبر صوت تفاضلي متعدد القنوات لرقمنة بيانات مخطط كهربية الدماغ عند 1000 هرتز بكسب كيلو واحد ومراجعة إشارة مخطط كهربية الدماغ في برنامج التحليل المناسب. ثم سجل مخطط كهربية الدماغ الأساسي قبل الإصابة لمدة 30 دقيقة ، قبل فصل لإجراء التقاضي في الشريان السباتي. بعد تسجيل بيانات خط الأساس لمخطط كهربية الدماغ ، قم بتعقيم الجلد بين الفك السفلي والترقوة على الجانب الأيسر من الرقبة باستخدام البيتين والإيثانول كما هو موضح.

وقم بعمل شق بطول سنتيمتر واحد تقريبا على الجانب الأيسر من الرقبة. ضع الجرو تحت مجهر تشريح واسحب الأنسجة والجلد تحت الجلد بعناية لكشف الشريان السباتي. ضع قطعة من خياطة الحرير المعقمة بطول خمسة سنتيمترات تحت الشريان.

تحديد العصب المبهم وفصل العصب عن الشريان وسحبه بدقة. مناورة الخيط بحيث يكون تحت الشريان فقط. بعد تحديد العصب المبهم ، افصل العصب وسحبه بدقة من الشريان واستخدم ملقطا دقيقا لربط قطعة من خياطة الحرير المعقمة بطول خمسة سنتيمترات تحت الشريان.

اربط خياطة مزدوجة معقودة حول الشريان لسد التدفق وقطع الخيط الزائد. استبدل الأنسجة تحت الجلد والجلد فوق الشريان المكشوف واستخدم Vetbond لإغلاق الشق. ثم ضع مرة أخرى على المراقبة المستمرة لمخطط كهربية الدماغ في غرفة في درجة حرارة الغرفة موضوعة على مرتبة التدفئة وقم بإجراء فحوصات موضعية لدرجة حرارة الأشعة تحت الحمراء لدرجة حرارة قلب الجرو لتجنب فتح الغرفة.

بعد السماح للجراء بالتعافي لمدة ساعة واحدة مع جزء مستمر من مراقبة الأكسجين الملهم ، اغسل الغرفة ب 60 لترا في الدقيقة من 100٪ نيتروجين و 0.415 لتر في الدقيقة من الأكسجين بنسبة 100٪. بمجرد أن يصل تشبع الأكسجين في الغرفة إلى 12٪ ، قلل تدفق النيتروجين إلى 10 لترات في الدقيقة مع الحفاظ على تدفق الأكسجين دون تغيير. قم بإجراء تعديلات صغيرة حسب الضرورة ، وحافظ على جزء الأكسجين المستوحى عند 8٪ لمدة 45 دقيقة.

بعد 45 دقيقة من التعرض لنقص الأكسجة ، أعد جزء الأكسجين الملهم إلى 21٪ واسمح للجراء بالتعافي في الغرفة مع مراقبة مخطط كهربية الدماغ لمدة ساعتين. في نهاية فترة التسجيل ، افصل الفئران عن نظام مخطط كهربية الدماغ وأعد الجراء إلى الأم. تسمح تسجيلات مخطط كهربية الدماغ بالفيديو بربط النتائج الكهربية بالسلوك على الفيديو.

غالبية الأحداث التي لوحظت في هذا النموذج سلوكيات بؤرية أحادية الجانب أو مختلطة. خلال فترة نقص الأكسجين ، تظهر مجموعة فرعية من الفئران عادة نشاط نوبة غير قهرية ، حيث تكون الجراء غير قادرة على الحركة مع نشاط نوبة مستمر على مخطط كهربية الدماغ. في هذا التحليل ، كان نشاط خط الأساس مشابها للخلفية الموصوفة سابقا في صغار الفئران P 10.

بعد التقاضي وقبل بدء نقص الأكسجة ، أظهرت مجموعة فرعية من الفئران نوبات متشنجة. بعد تحريض نقص الأكسجة ، تم تقليل سعة الخلفية على مخطط كهربية الدماغ. وظهرت رشقات نارية متقطعة من تصريفات موجة السنبلة ، تليها قمع.

أظهرت الفئران نوبات كهربائية تظهر من خلفية مكبوتة كتصريفات موجة سبايك إيقاعية تقدمت لتصبح أكثر تعقيدا وتواترا مع موجات سبايك بوليس. أثناء نقص الأكسجة ، يكون تحليل مطياف الطاقة ملحوظا لعدم التناسق بين نصفي الكرة الأرضية ونصفي الكرة الأرضية المقابلة. يظهر نصف الكرة الإقفارية نمط قمع الانفجار ، ويظهر نصف الكرة المقابل خلفية مكبوتة.

أثناء إعادة الأكسجين والتعافي ، تستمر مجموعة فرعية من الفئران في التعرض لنوبات خلال الفترة المتبقية من فترة التسجيل. يتم قمع خلفية مخطط كهربية الدماغ مقارنة بالخط الأساسي بعد نقص الأكسجة مع التعافي التدريجي الذي لوحظ خلال فترة تسجيل ما بعد نقص الأكسجة. عند العمل مع الجراء حديثي الولادة ، فإن الدقة هي المفتاح.

بالإضافة إلى ذلك ، يجب إيلاء اهتمام خاص لوضع الجراء مرة أخرى مع الأم في مجموعات بعد العمليات الجراحية. يمكن استخدام تخطيط كهربية الدماغ بالفيديو في صغار حديثي الولادة جنبا إلى جنب مع علم الأنسجة المرضية والتصوير والسلوك لفحص تأثير نوبات الصرع حديثي الولادة على جراحة الإصابات والنتائج السلوكية.