توصيل الأجسام المضادة إلى الدماغ باستخدام الموجات فوق الصوتية المركزة

يمتص الدماغ جزءا صغيرا فقط من الأجسام المضادة العلاجية. باستخدام طريقتنا ، يتم توصيل الأجسام المضادة إلى الدماغ عن طريق فتح الحاجز الدموي الدماغي بشكل عابر. تسمح لنا هذه التقنية بتوصيل الأجسام المضادة إلى دماغ الفأر بطريقة غير جراحية.

لإجراء مراقبة جودة الفقاعات الدقيقة باستخدام عداد الخلايا ، قم بإزالة محلول الفقاعات الدقيقة من المدمج واستخدم إبرة قياس 19 لاختراق حاجز قارورة محلول الفقاعات الصغيرة. استخدم حقنة سعة مليلتر واحد مزودة بإبرة قياس 19 لتخفيف 100 ميكرولتر من الفقاعات الدقيقة في خمسة ملليلتر من محلول التدفق المصفى وماصة 100 ميكرولتر من محلول الفقاعات الدقيقة المخفف في 10 ملليلتر من محلول التدفق المصفى في كوفيت. قم بتثبيت الكوفيت في مكانه على منصة عداد الخلايا وتأكد من استخدام فتحة 30 ميكرون للحصول على العينة.

في البرنامج، قم بتحميل طريقة التشغيل القياسية وحدد تحرير طريقة التشغيل القياسية والتركيز. أدخل 5 ، 000 مرة للتخفيف وانقر فوق تطبيق وموافق. انقر فوق تحرير المعلومات لتحديد اسم ملف مناسب. حدد معاينة وتحقق من أن تركيز عينة الفقاعة الصغيرة أقل من 10٪حدد البدء وموافق لبدء الحصول على العينة.

بعد القياس ، اشطف فتحة عداد الخلية بمحلول تدفق مفلتر. قم بتسخين كوفيت محلول الفقاعات الدقيقة المخفف لمدة 30 ثانية في حمام مائي. قم بقياس حل الفقاعات الصغيرة الصوتية كما هو موضح وانقر فوق تحرير المعلومات لتسمية البيانات على أنها فارغة.

بعد قياس الفراغ ، اطرح القراءة النهائية من القراءة الأولية لاستبعاد أي جزيئات ليست فقاعات دقيقة. لتسمية الأقسام بجسم مضاد IgG مضاد للفلورسنت مضاد للفأر ، قم بتسمية ملليغرام واحد من الجسم المضاد IgG للفأر بدقيق Alexa 647 في محلول بيكربونات الصوديوم 0.1 مولار وفقا لتعليمات الشركة المصنعة لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة ، قم بتحميل محلول الأجسام المضادة المسمى بالفلورسنت على عمود دوران وتنقية الجسم المضاد عن طريق الطرد المركزي.

ثم استخدم مقياس الطيف الضوئي لقياس تركيز البروتين. لإعداد نظام الموجات فوق الصوتية للمسح الضوئي المركز ، أضف مساحة خمسة ملليمترات إلى بلعة الماء لوضع تركيز الموجات فوق الصوتية على بعد تسعة ملليمترات أسفل قاع بلعة الماء. املأ بلعة الماء بحوالي 300 مل من الماء منزوع الأيونات منزوع الغازات وضع المصفوفة الحلقية في بلعة الماء المملوءة.

استخدم مرآة الأسنان للتحقق من عدم وجود فقاعات هواء على السطح وتشغيل برنامج التطبيق. في قائمة شكل الموجة ، حدد تعيين دورة عمل شكل الموجة واضبط تردد تكرار النبضة على 10 هرتز ، ودورة العمل على 10٪ ، والتركيز على 80 ملم ، والتردد المركزي إلى ميغاهرتز واحد ، والسعة إلى 0.65 ميجا باسكال ، والمؤشر الميكانيكي إلى 0.65. اضغط على تعيين لتحديد شكل الموجة وتخزين شكل الموجة في الذاكرة.

بعد تحديد خطة العلاج ، افتح علامة تبويب المسح الضوئي في نافذة وحدة التحكم في الحركة وأدخل قيم البدء والإيقاف والزيادة للحركة في البعد X وقيم البدء والإيقاف والزيادة للحركة في الاتجاه Y. لتحديد الإجراءات الخاصة بمواقع العلاج، انقر فوق الحدث وافتح نافذة تحرير البرنامج النصي. حدد قائمة بالإجراءات التي سيتم تنفيذها بالترتيب المحدد في كل موقع معالجة وقم بتعيين نوع الحركة إلى الشبكة النقطية.

في علامة تبويب الأحداث، حدد إضافة إجراءات وانقل الحركة بشكل متزامن لبدء تشغيل ARB في الانتظار والإيقاف لتشغيل إجراءات ARB إلى لوحة البرنامج النصي. ثم انقر فوق إجراء الانتظار وحدد وقت انتظار يبلغ 6,000 مللي ثانية. لتحضير للتحليل ، بعد التأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم في فأر مخدر ، استخدم علامة دائمة لتسمية مركز الرأس ، ثم قم بلصق غلاف بلاستيكي في قاع قارب وزن صغير مع القطع السفلي واملأ قارب الوزن بهلام الموجات فوق الصوتية.

للعلاج بالموجات فوق الصوتية المركزة ، اقلب قارورة الفقاعات الدقيقة وقم بتحميل ميكرولتر واحد من المحلول برفق لكل جرام من وزن جسم الفأر في حقنة أنسولين قياس 29. أضف 100 ميكرولتر من الجسم المضاد المصنف بالفلورسنت إلى المحقنة وقم بقلب المحقنة برفق ولفها بين الإبهام والسبابة لخلط الجسم المضاد والفقاعات الدقيقة داخل المحقنة. قم بحقن 150 ميكرولترا من الفقاعة الدقيقة ومحلول الأجسام المضادة في الماوس بعناية وببطء وبطء في الماوس واضبط مؤقتا لمدة دقيقتين.

ضع مرهم العيون ، ثم ضع الماوس في حامل الرأس وثب أنفه في الحامل. ضع قارب الوزن الصغير المملوء بالموجات فوق الصوتية فوق الرأس وقم بخفض بلعة الماء حتى يجلس فوق هلام الموجات فوق الصوتية داخل قارب الوزن. ثم استخدم عصا التحكم لمحاذاة تركيز محول الطاقة بصريا داخل منتصف الرأس.

عندما يرن المؤقت ، في علامة تبويب الحركة في البرنامج ، حدد إعادة تعيين الأصل وحدد فحصا كاملا. عند اكتمال العلاج ، ضع مرهم العيون على عيون وضع الفأر في غرفة تعافي دافئة. هنا ، يتم عرض النتائج التمثيلية من قياسات عداد الثقافة للحجم والتركيز الذي يمكن الحصول عليه عند إنتاج الفقاعات الدقيقة بشكل صحيح.

يمكن تصور امتصاص الأجسام المضادة من قبل الدماغ بسهولة في أقسام الدماغ أو الأنسجة بأكملها باستخدام ماسح ضوئي بالأشعة تحت الحمراء أو فحص مجهري فلوري للأقسام. كما هو موضح في هذه الصور ، يمكن استخدام التلوين التمثيلي لعلامات الخلايا الدبقية الصغيرة لتحديد ما إذا كانت الخلايا الدبقية الصغيرة تصبح أكثر بلعة بعد توصيل الجسم المضاد. من المهم ضمان رفاهية وسلامتها خاصة عند إجراء الحقن المداري الرجعي وتطبيق محول الطاقة فوق رؤوس الفئران.

تسمح هذه الطريقة بتطبيق أنماط مسح مختلفة لاستهداف مناطق مختلفة من الدماغ ، مثل الحصين أو القشرة أو نصفي الدماغ الفرديين. يمكن استخدام هذه التقنية لتطوير علاجات وأدوية جديدة تخترق الحاجز الدموي الدماغي ودراسة آلية تكوين الحاجز الدموي الدماغي وفتحه.