التسليم في المختبر وفي الجسم الحي لارتفاع حرارة الجسيمات النانوية المغناطيسية باستخدام نظام توصيل مصمم خصيصا

يقدم هذا البروتوكول التقنيات والمنهجية اللازمة للتوصيل الدقيق لارتفاع حرارة الجسيمات النانوية المغناطيسية باستخدام نظام توصيل ومراقبة متطور.

هذه الطريقة مهمة لأنها توفر الطريقة الأكثر قوة وقابلية للتكرار لتقديم علاج فرط حرارة الجسيمات النانوية المغناطيسية في النماذج قبل السريرية. تسمح هذه التقنية بالتوصيل الدقيق والمتسق لارتفاع حرارة الجسيمات النانوية من خلال المراقبة الدقيقة والتحكم في البيئة المحلية وفسيولوجيا والجرعة الحرارية. عند محاولة هذا البروتوكول ، ضع في اعتبارك أن تسخين الجسيمات النانوية يجب أن يظل محصورا في الأنسجة المستهدفة.

من الضروري استخدام قياس حرارة وفير ومناسب لضمان التكاثر والسلامة. بعد 24 ساعة من الطلاء B16 F10 تضيف خلايا الورم الميلانيني الفئران الجسيمات النانوية المغناطيسية إلى التركيز النهائي البالغ ثلاثة ملليغرام من الأيون لكل مليلتر. تأكد من توزيع الجسيمات النانوية بالتساوي في جميع أنحاء البئر عن طريق إنشاء محلول مخزون من الوسائط والجسيمات النانوية المغناطيسية مسبقا.

بعد 48 ساعة من إضافة الجسيمات النانوية ، أضف 0.5 مل من التربسين إلى كل بئر يتم معالجته وقم بتدوير اللوحة برفق. استخدم مجهرا للتحقق من انفصال الخلايا. بعد ذلك ، أضف ملليلتر واحد من الوسائط إلى كل بئر واجمع جميع الخلايا في أنابيب سعة 1.5 مليلتر باستخدام أنبوب منفصل محدد بوضوح لكل بئر.

قم بتدوير الأنابيب عند 60 جم لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق لتكسير الخلايا. ثم ضع الأنابيب في الفاصل المليء بالماء داخل الملف. اضبط درجة حرارة الحمام المائي للحفاظ على الوسائط ومنصة الخلية عند 37 درجة مئوية.

قم بإعداد مجسات منفصلة لدرجة حرارة الألياف الضوئية لمراقبة درجة الحرارة داخل الأنبوب والحمام المائي. قم بتشغيل المبرد وتأكد من تدفق المبرد عبر الملف. ثم قم بتشغيل مصدر الطاقة واضبط النسبة المئوية للحد الأقصى على الحقل المطلوب.

قم بتشغيل ملف الملف اللولبي ذو 14 دورة مدعوم بمولد 10 كيلووات بسرعة 165 كيلو هرتز و 23.87 كيلوأمبير لكل متر. عالج الخلايا حتى يتم الوصول إلى جرعة حرارية محددة مسبقا. بعد العلاج ، أعد تعليق الخلايا المحببة في الوسائط داخل الأنابيب وأعد صفائها إلى ألواح جديدة ذات ستة آبار مصنفة بوضوح.

بعد تخدير الماوس ، قم بتنظيف الورم بمنديل كحولي. حقن الجسيمات النانوية المغناطيسية في الورم قبل ثلاث ساعات من علاج AMF. بعد ثلاث ساعات ، قم بتخدير الماوس مرة أخرى وتحقق من عدم الاستجابة لردود الفعل الصحيحة.

قم بإزالة علامة الأذن أو أي أجسام معدنية أخرى على الماوس وضع مسبار درجة حرارة الألياف البصرية المزلق برفق في المستقيم. ضع القسطرة في الورم. إزالة الإبرة.

ثم قم بقص القسطرة حتى لا تخرج من الورم كثيرا. أدخل مسبار درجة حرارة الألياف البصرية ثلاثي المستشعرات في القسطرة ، مما يحمي المستشعرات. ألصق مسبار المستقيم وداخل الورم على ذيل.

ضع الماوس في أنبوب سعة 50 مليلتر يجب أن يكون به ثقب بالقرب من الرأس حيث يمكن توصيل التخدير وتوصيله. ضع الأنبوب داخل إعداد الملف وأعد توصيل التخدير. ضع مسبار درجة حرارة الألياف الضوئية بشكل غير محكم في الأنبوب لقياس درجة حرارة البيئة.

ثم قم بتشغيل المبرد وتأكد من تدوير المبرد. تحقق من أن برنامج الكمبيوتر يعرض درجات الحرارة المختلفة وابدأ التسجيل للسماح بعرض حساب CEM43 في الوقت الفعلي حيث كان من المفترض أن تكون جرعة CEM43 المطلوبة قد تم تحديدها مسبقا. قم بتشغيل المغناطيس بنسبة طاقة منخفضة وتأكد من أن مجسات درجة حرارة الألياف الضوئية تسجل التغيرات في درجات الحرارة.

باختصار ، تظل درجة الحرارة الأساسية للحيوان عند 38 درجة مئوية ، وتنظمها باستخدام سترة الهواء المكيفة. اضبط قوة المجال المغناطيسي عن طريق تغيير الطاقة التي تتحكم في مستوى درجة الحرارة في الورم. أغلق AMF بمجرد تحقيق الجرعة المطلوبة.

قم بإزالة الأنبوب من الملف وإزالة الماوس من الأنبوب. ثم أغلق المبرد. استخرج المجسات والقسطرة وإذا لزم الأمر ، ضع علامة على بعلامة أذن معدنية جديدة.

راقب الفأر أثناء التعافي من التخدير ، وتأكد من أنه يستأنف سلوكه الطبيعي وعدم وجود مضاعفات. بالنسبة لانخفاض حرارة الجسم في الجسم الحي ، من الضروري وضع أكبر عدد ممكن من مجسات درجة حرارة الألياف الضوئية في المواقع الإستراتيجية لتقييم الفعالية والسلامة في الوقت الفعلي. تتيح هذه المجسات تسجيل درجة الحرارة طوال التجربة ، مما يسمح بقياس الجرعات والتاريخ الحراري بدقة.

يتم عرض المنحنيات التي تم إنشاؤها أثناء تجربة في الجسم الحي هنا ، مما يسلط الضوء على القدرة على مراقبة درجة الحرارة عن كثب وضبط النظام للحفاظ على درجات حرارة الورم ضمن النطاق المطلوب. تظهر مخططات البركان جينات معبرا عنها تفاضلية تتبع علاج ارتفاع الحرارة للجسيمات النانوية المغناطيسية في المختبر وفي الجسم الحي ، مما يدل على كيفية استخدام التقنيات الجزيئية لمراقبة تأثيرات ارتفاع الحرارة. تعد المراقبة الدقيقة لدرجات حرارة الورم ودرجة الحرارة الأساسية للحيوانات والجرعة الحرارية ضرورية لتقديم العلاج بشكل متسق.

بعد ارتفاع الحرارة ، يمكن إجراء تحليلات مختلفة لفهم تأثير وآلية العلاج. ويمكن تنفيذ علاجات أخرى للحصول على تأثير علاجي أكبر.