الإدارة داخل الراشية لصياغة مسحوق جاف في الفئران

إعطاء المسحوق الجاف داخل القصبة الهوائية أمرا ضروريا لتقييم الأداء والأنشطة البيولوجية لتركيبة المسحوق المستنشق ، مثل الامتصاص الرئوي والتوافر البيولوجي والتأثيرات العلاجية في النماذج الحيوانية قبل السريرية. عملية التنبيب غير جراحية ويمكن أن توفر تركيبة مسحوق للفئران بأمان ودقة. إن نفخ المسحوق الجاف المصنوع حسب الطلب يمكن التخلص منه وغير مكلف وفعال في صرف تركيبات المسحوق.

يمكن استخدام أجهزة النفخ في تقييم تركيبات مختلفة على فئران متعددة في نفس التجارب دون التعرض لخطر التلوث المتبادل من المسحوق المتبقي. تعتبر عملية التنبيب صعبة للباحثين غير ذوي الخبرة. تعد القدرة على تصور وتصويب أفضل طرف من القنية عند فتحة القصبة الهوائية أمرا بالغ الأهمية للإدخال الصحيح للقنية التوجيهية.

تتطلب هذه التقنية ممارسة لتقليل الإدخال غير السليم. ستظهر كارول باحثة ما بعد الدكتوراه وطالبة الدكتوراه راشيل على إجراء التحضير والتنبيب. للبدء ، قم بتحييد الشحنات الساكنة للمسحوق الجاف وطرف ماصة تحميل الهلام المستديرة غير المرشحة سعة 200 ميكرولتر بمسدس مضاد للكهرباء الساكنة أو توازن مع وظيفة إزالة الأيونات.

قم بإعداد ورق وزن بحجم تقريبي يبلغ أربعة × أربعة سنتيمترات. اطو الورقة من المنتصف قطريا ثم افتحها. ثم استخدمه لوزن ملليغرام إلى ملليغرامين من المسحوق الجاف.

املأ طرف ماصة تحميل الجل بالمسحوق من خلال الفتحة العريضة واضغط عليها برفق لتعبئة المسحوق حتى تشكل تكتلات فضفاضة بالقرب من الطرف الضيق من الطرف. تجنب تعبئة المسحوق بإحكام شديد لأنه قد يعيق التشتت. قم بتوصيل الطرف المحمل بالمسحوق بحقنة سعة مليلتر واحد من خلال محبس ثلاثي الاتجاهات يمسك الطرف والحقنة عموديا أثناء التوصيل لمنع انسكاب المسحوق.

يمكن تغيير حجم المحقنة وفقا لحجم الهواء المستخدم لتفريق المسحوق. إذا لم يتم إجراء الإعطاء على الفور ، فاستخدم البارافيلم لإغلاق فتحات الطرف وتخزينه مؤقتا في ظل ظروف مناسبة حتى الإعطاء. بعد تخدير فأر BALB / c البالغ من العمر سبعة إلى تسعة أسابيع بالكيتامين والزيلازين ، ضعه على منصة زجاجية مثبتة على حامل.

قم بتعليق الماوس عن طريق ربط قواطعه بخيط نايلون وتأمين موضعه بقطعة من الشريط اللاصق أو الشريط المطاطي. اضبط ارتفاع وزاوية المنصة. أدخل الألياف الضوئية في قنية التوجيه بطرف مستوى الألياف مع فتح القنية.

ثم قم بتشغيل شعلة LED للإضاءة. تبرز لسان الفأر برفق باستخدام ملقط لفضح القصبة الهوائية. استخدم اليد الأخرى لتثبيت قنية التوجيه بالألياف الضوئية وإدخالها من خلال تجويف الفم.

مع الإضاءة من الألياف الضوئية ، يمكن تصور فتح القصبة الهوائية على أنه فتحة بين الحبال الصوتية. قم بمحاذاة شطبة القنية التوجيهية باتجاه خط الوسط للفتحة وقم بتنبيبها برفق باستخدام الألياف الضوئية في القصبة الهوائية عن طريق توجيه أفضل طرف من القنية عند فتحة القصبة الهوائية. عند التنبيب ، قم بإزالة الألياف الضوئية بسرعة واترك القنية التوجيهية داخل القصبة الهوائية.

يجب مراعاة الاستعادة الطبيعية. أمسك الماصة ذات الطرف الناعم عند فتحة القنية التوجيهية وقم بنفخة صغيرة من الهواء في رئة الفأر. يشير التضخم الطفيف في الصدر إلى التنبيب المناسب.

قم بإزالة الماصة ذات الطرف الدقيق قبل إعطاء المسحوق. أمسك الطرف المحمل بالطاقة المتصل بالمحقنة ، وتأكد من فصل تدفق الهواء بين المحقنة والطرف. اسحب مكبس المحقنة للخلف لسحب 0.6 مل من الهواء.

أدر صمام محبس ثلاثي الاتجاهات لتوصيل تدفق الهواء بين المحقنة والطرف المحمل بالطاقة. ثم أدخل الطرف المحمل بالطاقة في قنية التوجيه التي تم وضعها بالفعل في القصبة الهوائية للماوس. أمسك قنية التوجيه وادفع مكبس المحقنة بقوة في إجراء واحد مستمر لتفريق المسحوق على شكل هباء جوي في الرئة ، مما يقلل من أي حركة أمامية لتجنب إصابة.

قم بإزالة الطرف وتحقق مما إذا كان المسحوق قد تم إفراغه. بمجرد اكتمال الإعطاء ، قم بإزالة قنية التوجيه من القصبة الهوائية. اسمح للفأر بالتعافي عن طريق وضعه أفقيا في وضع ضعيف مع نصف لسانه بارز لتجنب انسداد الشعب الهوائية.

لتحسين الطريقة ، تم استخدام كميات مختلفة من الهواء لتفريق ملليغرام واحد من المانيتول المجفف بالرذاذ ومراقبة وزن الفئران. لم يتسبب استخدام 0.3 و 0.6 مل من الهواء في فقدان وزن الفئران حتى 48 ساعة بعد الإعطاء. أدى تشتيت المسحوق بملليلتر واحد من الهواء إلى فقدان الوزن بنسبة تزيد عن 5٪ في غضون 24 ساعة ، والذي لم يتم استرداده بالكامل بعد 48 ساعة.

تم إعطاء الفئران داخل القصبة الهوائية بملليغرام واحد من مسحوق SFD يحتوي على خمسة ميكروغرامات من mRNA وتم تقييم تعبير لوسيفيراز في الرئتين بعد 24 ساعة من الإعطاء باستخدام نظام التصوير في الجسم الحي. تم تشتيت مسحوق SFD في الرئة العميقة ولوحظ تعبير لوسيفيراز. على سبيل المقارنة ، أعيد تكوين المسحوق في الماء وأعطى باستخدام بخاخ دقيق باستخدام نفس إجراء التنبيب.

كان تعبير لوسيفيراز في التركيبة المعاد تكوينها أعلى بكثير من تركيبة المسحوق الجاف ، والتي يمكن أن تكون بسبب مشكلة خيبة أمل المسحوق أو ملف تعريف الحرائك الدوائية المختلفة بين شكل المسحوق والسائل. تمت مقارنة الخصائص النسيجية للرئتين المعالجة بالمسحوق الجاف mRNA مع المجموعات الضابطة غير المعالجة والمجموعات المعالجة ب LPS. أظهرت الرئة دون أي علاج عرضا صحيا بينما أظهرت الرئة المعالجة ب LPS توزيعا غير منتظم للفضاء الجوي وتسلل الخلايا الالتهابية إلى الفراغات الخلالية والسنخية.

تظهر على الرئتين المعالجة بمسحوق SFD أي علامات للالتهاب. لتشتت المسحوق بنجاح ، يجب النقر على المسحوق الموجود في طرف التحميل برفق وعدم تعبئته بإحكام شديد في الحافة. يمكن أيضا تكييف إعداد التنبيب هذا لإدارة التركيبات السائلة إما باستخدام ماصة أو بخاخ صغير.