تخطيط كهربائي مباشر مقرونة (DC-ERG) لتسجيل الاستجابات الكهربائية ذات الضوء المُثار من ظهارة صبغ الشبكية الماوس

يمكن استخدام تقنية DC-ERG للتقييم غير المراوغة لوظيفة ظهارة صبغ الشبكية لرصد التغيرات المرتبطة بالعمر أو تطور المرض وتقييم تأثيرات التدخل الدوائي. هذه التقنية يحسن على DC-ERG القدرة على التكاثر وسهلة الاستخدام عن طريق تبسيط إعداد القطب الشعري. ويمكن أيضا أن تستكمل مع تطبيق برنامج أوم القياسية لتسهيل التحليل.

تبدأ عن طريق انزلاق بعناية إبرة حقنة قياس 25 من خلال طوقا المطاط السيليكون إلى الجدار الخلفي من حامل القطب. ملء قاعدة من حامل القطب مع HBSS degassed مع تراجع ببطء الإبرة، مع الحرص على عدم إدخال فقاعات، واستبدال الغطاء مترابطة دون تشديد. أعد إدخال إبرة الحقنة لملء المساحة الفارغة داخل الفجوة مع HBSS وعقد الشعرية أفقيا في حين ملء لمنع الحل الهروب من الطرف الآخر.

استيعاب شعري مملوءة في نهاية عازمة، وإدراج ببطء الطرف الآخر من خلال سقف خففت وتشديد غطاء المسمار في مكانها. إمالة أصحاب القطب مع الأقطاب الشعرية التي تواجه ما يصل للسماح لأي فقاعات لتدفق بها وdegas الشعيرات الدموية في غرفة فراغ لمدة خمس إلى 10 دقائق. ثم، ببطء الافراج عن الفراغ وإعادة ملء أصحاب القطب الكهربائي والشعيرات الدموية الزجاجية، كما هو موضح.

لجعل موقف مخصص لحامل microelectrode، وإزالة مقاطع متعددة الخصية السوداء من جانب واحد من رقم ثمانية T-كليب واستخدام قاعدة اسطوانة مع المفاصل الكرة المغناطيسية تشكيلها في نصف لضبط الارتفاع. تأمين تعديل T-مقاطع إلى الكرة المغناطيسية تصاعد مسامير مع المكسرات M3 الحجم وشريحة في ما يقرب من واحد بوصة مقبض خشبي مدبب، تعديل من عصا تنظيف طرف القطن، في موقف في زاوية لتأمين حامل microelectrode في موقف مشترك الكرة المغناطيسية تي كليب حسب الطلب. ثم، استخدم قاعدة اسطوانة المغناطيس الأرضية النادرة لوضع حامل القطب المخصص بشكل آمن على اللوحة المعدنية للمرحلة، مما يتيح دوران 360 درجة على محور 180 درجة.

لإجراء اختبار القطب، أولا، خفض بلطف تجميعها بالكامل HBSS المليء بالميكروفينات الشعرية في حاوية صغيرة من HBSS. ضع قطب الإبرة الأرضية والفضة، كلوريد الفضة محورها القطب المرجعي بيليه في نفس HBSS لإكمال الدائرة وتحديد أو إنشاء معرف مناسب لوصف الماوس ليتم اختبارها. لتحديد بروتوكول تخطيط كهربائي مقرونة مباشرة ليتم تنفيذها، انقر فوق البروتوكولات وحدد DC-ERG.

انقر فوق تشغيل. مربع حوار سوف يطفو على رأس مع معلومات المريض. إذا كانت المعلومات صحيحة، انقر فوق نعم ثم انتقل إلى الخطوات الأولى من ستة.

أغلق الأبواب أمام قفص فاراداي وانقر على المقاومة لعرض وضع المقاومة. تحقق من أن القيم للمرجع الفم، الأرض الذيل وتسجيل الأقطاب الكهربائية مقبولة وانقر خطوة للمتابعة إلى الخطوة الرابعة من ستة لاختبار الاستقرار خط الأساس. لبدء عرض التتبعات، انقر فوق معاينة.

وينبغي أن تكون الآثار منخفضة الضوضاء مع اتساع الذروة إلى الذروة أقل من 200 ميكروفولت. لوضع الماوس والأقطاب الكهربائية لتجربة، تخدير القرنية من الماوس مخدر مع قطرة من حمض الهيدروكلوريك بروباراكين 5٪ قبل توسيع القرنية مع قطرة 2.5٪ فينيليفرين HCL و 5٪ تروبيكاميد. في برنامج نظام ERG، تحقق من تحديد المريض الصحيح.

انقر فوق البروتوكولات. ضمن وصف البروتوكول، حدد DC-ERG وانقر فوق تشغيل. انقر فوق نعم للتحقق من أنه يتم تنفيذ الاختبار الصحيح.

استخدام الخطوة الأولى من ستة لتشغيل ضوء أحمر خافت داخل القبة ووضع الماوس على طاولة تسجيل ساخنة. استخدام ملقط خيمة بعناية الجلد من الساق الخلفية. وباستخدام يد واحدة لعقد بحزم القطب إبرة، واستخدام اليد الأخرى لإدراج القطب تحت الجلد في الساق الخلفية لتأمين القطب في مكان.

ضع الفضة المرجعية، قطب كلوريد الفضة في فم الحيوان بحيث تقع الكريه المركزة على طول الخد الخلفي ويتم احتجازها في مكان خلف الأسنان. قبل وضع الأقطاب الشعرية على العين، ضع حامل القطب مع الشعيرات الشعرية الزجاجية الموجهة عموديا ونفض الغبار حامل القطب مع السبابة لإزالة أي فقاعات التي قد تم إدخالها. استخدام إبرة 25 قياس لملء نصائح شعرية مع HBSS وفحص الشعيرات الدموية للتأكد من عدم وجود فقاعات الهواء المحاصرين في النصائح.

ضع حامل القطب الكهربائي بحيث تكون النصائح المفتوحة من الشعيرات الدموية المملوءة بـ HBSS على اتصال لطيف مع القرنية. و الحرص على تجنب إدخال الفقاعات، عكس موزع هلام العين المزيتة للتخلص من القطرات الأولية. ثم ضع قطرة من جل العين المُشحم على كل عين للحفاظ على الموصلية ومنع الجفاف أثناء التسجيل.

لتسجيل DC-ERGs، انقر فوق الخطوة لتحديد الخطوة الخامسة من ستة وانقر فوق مقاومة لاستخدام شاشة التحقق من المعاوقة لفحص مقاومة العينين اليمنى واليسرى. وينبغي أن تكون قيم المعاوقة لأقطاب تسجيل في كل عين متشابهة. وقيم المعاوقة لكل من الأرض والأقطاب المرجعية يجب أن تكون أقل من 10 كيلو أم.

انقر فوق معاينة لعرض آثار للعيون اليمنى واليسرى وانتظر ما يصل إلى 10 دقائق للحصول على خط أساس مستقر لتحقيقه. ثم، انقر فوق إيقاف لإنهاء معاينة التتبع ثم انقر فوق تشغيل لبدء التسجيل. هنا، يتم عرض مجموعة بيانات عينة من فئران الدفع المشروطة والفئران من النوع البري.

في هذا التحليل، عانى التتبع من فقاعات دقيقة في القطب الكهربائي. هو زاد الذروة إلى الذروة ضوضاء في الأثر. في تحليل منفصل، تم القضاء على فقاعات باستخدام غرفة فراغ قبل تجميع microelectrodes داخل حامل القطب حامل.

يمكن حساب أفضل خطوط تناسب 25 ثانية الأولية، مما يسمح للاستجابات المصححة الانجراف أن يكون relotted وسعة مكونات DC-ERG لتحديد. كما هو متوقع، انخفاض التعبير عن علاج 7.1 قنوات البوتاسيوم في RPE يخفف إلى حد كبير من موجة ج والتذبذب السريع، مما يدل على ضعف كبير في خصائص ظهارة صبغة الشبكية. هنا ، يتم عرض السعات النسبية لمكونات DC-ERG ، التي تم تطبيعها إلى نوع البرية ورسمها ضد أكبر اثنين من السعات ذات الموجات الخفيفة.

يمكن لهذا الشكل من التحليل تحديد ما إذا كان يمكن حساب الاستجابات الكهربائية المخفضة لـ RPE من خلال تقليل نشاط المستقبلات الضوئية وحدها. أو إذا كان هناك عيب الكامنة التي تنشأ في RPE. تذكر لتحقيق خط أساس مستقر قبل الانتقال إلى تسجيل الماوس وإعادة تشغيل الأقطاب الكهربائية بشكل دوري للفقاعات التي قد تكون قد أدخلت.

يمكن تسجيل ERGs المتكيفة مع الظلام قبل DC-ERG لقياس وظيفة شبكية العين التي تحركها المخروطية. ويمكن أيضاً إجراء ERGs المكيفة على ضوء بعد DC-ERG لتقييم استجابات شبكية العين التي تحركها المخروطية.