زرع تحت الشبكية لأنسجة الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في نموذج حيواني كبير للقطط

يظهر البروتوكول الحالي بالتفصيل التسليم تحت الشبكية لعضويات الشبكية بأكملها في نموذج حيواني كبير ، بهدف تطوير مناهج العلاج الخلوي لتنكس الشبكية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بتوصيل المواد العضوية مباشرة إلى الأنسجة المستهدفة ، شبكية العين. تهدف هذه التقنية إلى علاج الحالات التنكسية المتقدمة المسببة للعمى في الشبكية ، مثل التنكس البقعي المرتبط بالعمر ، أو التهاب الشبكية الصباغي ، أو داء الشبكية الخلقي.

إظهار الإجراء سيكون الدكتور بيترسون جونز. لزرع المواد العضوية تحت الشبكية ، استخدم مقص Stevens Tenotomy Scissors لإجراء بضع الكانتوتومي الجانبي من 0.5 إلى 1 سم في قطة مخدرة تبلغ من العمر أربعة أشهر ، ووضع منظار جفن باراكير بحجم مناسب في الشق لإبقاء الجفون مفتوحة مع مساعد جراحي يروي القرنية بانتظام باستخدام BSS طوال العملية. استخدم 0.5 ملقط ربط القرنية Castroviejo ومرقئ صغير للبعوض للإمساك بلطف بالملتحمة البصلية بجوار الطرف.

ضع غرزتين حريريتين 6-0 في الملتحمة المجاورة مباشرة للطرف في مواضع الساعتين 4 و 8 لإبقاء العين في النظرة الأولية وسحب الجفن الثالث. قم بتثبيت نهايات الغرز بمرقئ البعوض الصغير للمساعدة في التلاعب بها ، ووضع خياطة أخرى في موضع الساعة 12 عند الحافة جزئيا من خلال سمك الحافة ، مع الحرص على عدم اختراق العين. عقد الخيط بشكل فضفاض ، وقطع النهاية قصيرة ، ووضع خياطة البقاء في الملتحمة المجاورة مباشرة للطرف في وضع الساعة 4 لعقد العين والنظرة الأولية.

تعكس الملتحمة البصلية بين الساعة 10 و 2 ، واستخدم مقص بضع الوتر لشق الملتحمة من 2 إلى 3 ملليمترات من الطرف. تقويض الملتحمة ومسح كبسولة تينون لكشف الصلبة في موقعي منفذ استئصال الزجاجية في الساعة الثانية والساعة 10 من ثلاثة إلى خمسة ملليمترات من الطرف. استخدم الفرجار لتحديد مواقع بضع التصلب ، وتجنب الأوعية الصلبة الرئيسية التي يمكن أن تكون بارزة في القط.

التخطيط لمنطقة ثلاثة ملليمترات عند منفذ أداة الساعة 10 للجراح الأيمن ، قبل وضع 6-0 أو 7-0 خيوط نمط الصليبي polyglactin دون ربط في مواقع عمليات استئصال التصلب المقترحة. بمجرد وضع الغرز في مكانها ، اطلب من المساعد الإمساك بخيوط الساعة 12 للمساعدة في الحفاظ على الكرة الأرضية في مكانها ، واستخدم ملقط Castroviejo 0.12 ملم لتثبيت الأنسجة بجوار موقع بضع التصلب. يستخدم مبزل لإدخال منفذ استئصال الزجاجية بقياس 23 من خلال الصلبة في كل من مواضع الساعتين 2 و 10 بزاوية نحو العصب البصري لتجنب ملامسة العدسة ، واستخدام ملقط ربط لدفع منفذ الري برفق لتحديد ما إذا كان يمكن تصور الأطراف داخل الجسم الزجاجي.

اطلب من المساعد وضع عدسة استئصال الزجاجية المكبرة للري من Machemer على القرنية للسماح بتصور الجزء الخلفي من العين ، وقاطع مسبار استئصال الزجاجية بقياس 23 من خلال منفذ الجهاز لإجراء استئصال الزجاجية الأساسية الجزئية. بعد ذلك ، أدخل إبرة حقنة ملليلتر واحدة تحتوي على ملليلتر واحد من محلول تريامسينولون في منفذ الأداة وحقن 250 إلى 500 ميكرولتر من التعليق البلوري. عندما يتم تسليم المحلول ، قم بدفع مسبار استئصال الزجاجية عبر منفذ الجهاز لإغلاق رأس العصب البصري مع توجيه المنفذ بعيدا عن سطح الشبكية.

استخدم فراغا عاليا للمساعدة في فصل الوجه الزجاجي عن الشبكية ، وأدخل الحاقن من خلال منفذ الجهاز باتجاه سطح الشبكية ، وبثق طرف القنية. اضغط برفق على طرف سطح الشبكية واطلب من المساعد إعطاء دفعة سريعة طفيفة على مكبس المحقنة لبدء انفصال الشبكية ، مما يقلل من ضغط الحقن للسماح بزيادة بطيئة في انفصال الشبكية حتى يتم تحقيق الحجم المطلوب. استخدم قنية قياس 41 للحاقن لتكبير الانفصال قليلا حتى يمكن إدخال مقص الشبكية ، وإزالة منفذ الصلبة عند الساعة 10.

ثم استخدم سكينا مستقيما بشق 2.850 ملم موجها نحو العصب البصري لتجنب لمس العدسة لتكبير بضع التصلب في هذا الموقع. اجعل بضع الشبكية على الفقاعة بعيدا عن العصب البصري لتجنب إتلاف الألياف العصبية الشبكية الناشئة من المنطقة المزروعة ، وتجنب قطع الأوعية الشبكية الرئيسية لتقليل خطر النزيف. لزرع المواد العضوية ، أدخل شعرية زجاجية محملة بالمواد العضوية من خلال بضع التصلب الموسع باتجاه موقع بضع الشبكية ، واستخدم طرف الشعيرات الدموية لفتح بضع الشبكية قليلا للسماح بالوصول إلى فتحة الفقاعة تحت الشبكية.

اطلب من المساعد الضغط ببطء على مكبس الحاقن مرة أخرى لحقن المواد العضوية في الفقاعة تحت الشبكية. يجب أن تستمر BSS في المواد العضوية والأعضاء وفتح بضع الشبكية. عندما يتم تسليم جميع المواد العضوية ، اترك الشعيرات الدموية الزجاجية في مكانها لبضع ثوان قبل إزالة الشعيرات الدموية ببطء من العين ، مع الحرص على تجنب أي إطلاق مفاجئ للسوائل.

عندما تتم إزالة الشعيرات الدموية ، أغلق بضع التصلب باستخدام الخيط الموضوعة مسبقا في نمط صليبي. اطلب من المساعد إزالة منفذ التسريب ، وربط خياطة بضع التصلب بسرعة وإغلاق الصفاق بخيوط polyglactin في نمط مستمر بسيط. أغلق بضع العظمة الجانبي بخياطة polyglactin 6-0 وخيوط الجلد الشكل الثامن لأداء canthus الجانبي واستخدم خيوط الجلد المتقطعة البسيطة لإغلاق بقية الجرح.

ثم يتم تطبيق كوكتيل الستيرويد والمضادات الحيوية المناسب بعد الجراحة. يمكن تأكيد تحميل عضوي شبكية الشبكية المشتق من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات داخل القنية الزجاجية لجهاز الحقن وأثناء الجراحة عن طريق التصور المباشر. يمكن تأكيد وجود المواد العضوية داخل الفضاء تحت الشبكية بعد الجراحة عن طريق فحص العيون وتصوير قاع العين.

قبل القتل الرحيم ، يمكن أيضا إجراء تنظير العين بالليزر للمسح البؤري والتصوير المقطعي للتماسك البصري في المجال الطيفي لتقييم موضع الكائنات العضوية. يمكن استخدام هذه التقنيات لإثبات استمرار عضويات الشبكية في الفضاء تحت الشبكية بين الشبكية العصبية وظهارة الشبكية الصبغية للعين المتلقية. يمكن استخدام التحليلات النسيجية والكيميائية المناعية لتوضيح بقاء الرسوم البيانية الغريبة داخل الفضاء تحت الشبكية لعين كبيرة في مثبط للمناعة.

فقط أولئك المهرة في جراحة الشبكية والجسم الزجاجي ، مثل أطباء العيون البيطريين المدربين أو جراحي الشبكية والجسم الزجاجي المطلعين على اختلافات الأنواع في عين القط مقارنة بالعين البشرية يجب أن يقوموا بهذا الإجراء. يجب أن تكون التقنية المقدمة في هذا الفيديو قابلة للتطبيق على النماذج الحيوانية الكبيرة الأخرى المستخدمة لترجمة تقنيات جراحة الشبكية والجسم الزجاجي إلى العيادات.