قياس النشاط المتطاير وغير المتطاير المضاد للفطريات لمنتجات التحكم الحيوي

يوفر هذا البروتوكول طريقة لإجراء مقارنات دقيقة جنبا إلى جنب للفعالية النسبية للمركبات المضادة للفطريات المتطايرة وغير المتطايرة في مراحل نمو الفطريات المختلفة. هذه الطريقة مناسبة تماما لتقييم النشاط المضاد للفطريات للمنتجات المشتقة من النباتات المستخدمة في الأشكال المجففة أو السائلة التي تحتوي على مجموعة متنوعة من الجزيئات. يمكن أن توفر هذه الطريقة معلومات قيمة حول طريقة تطبيق المنتجات المشتقة من النباتات وهي مناسبة بشكل خاص في مجال المكافحة الحيوية.

ستظهر الإجراء فالنتينا غليغوريفيتش ، مساعدة مهندس من مختبر Sup'Biotech. لجمع الكونيديا ، ضع طبقة ثلاثة ملليلتر من 0.05٪ توين 20 على مزرعة فطريات مشعرات الجلد واستخدم أشعل النار لتحرير الكونيديا من الكونيديوفورات مع الحرص على عدم الضغط على الفطريات لمنع تمزق الخيوطا. عندما يتم تحرير كل الكونيديا ، استخدم ماصة دقيقة للاسترداد بسرعة وإضافة محلول الكونيديا إلى أنبوب سعة 15 مليلتر للعد.

لتحضير الألواح الفطرية ، قم بإيداع 100 ميكرولتر من الجراثيم بتركيز ثلاثة أضعاف 10 إلى ستة جراثيم لكل مليلتر على طبق بتري يبلغ طوله تسعة سنتيمترات يحتوي على وسط المساعد الشخصي الرقمي ، واستخدم ملعقة معقمة لإضافة 10 جرامات من الخرز الزجاجي بقطر ملليمترين إلى اللوحة. ثم قم بهز اللوحة برفق للأمام والخلف وقم بتدوير اللوحة ودورها في أجزاء 90 درجة حتى يتم تدويرها بالكامل لتوزيع الجراثيم بالتساوي عبر سطح الأجار. ثم احتضان اللوحة عند 30 درجة مئوية حتى تحليل تثبيط النمو.

لإجراء اختبار تثبيط التلامس باستخدام مسحوق الثوم ، استخدم ملعقة معقمة لوزن كمية مسحوق الثوم المطلوبة في أنابيب فردية سعة 50 مل. للحصول على تركيزات تتراوح بشكل عام من 0.25 إلى 16 ملليغرام لكل مليلتر. أضف 10 ملليلتر من حوالي 45 درجة مئوية المساعد الرقمي الشخصي إلى كل أنبوب واقلب كل أنبوب بعناية عدة مرات لتوزيع المسحوق بالتساوي في جميع أنحاء الأجار.

بسرعة ، اسكب المعلقات المتجانسة في أطباق بتري قطرها خمسة سنتيمترات واترك الأجار يتجمد في درجة حرارة الغرفة. لإجراء فحص تثبيط التلامس ، استخدم أنبوبا معقما من الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر خمسة ملليمترات لرسم دائرة في وسط الأجار في أطباق التحكم والأطباق المعالجة بالمركبات المضادة للفطريات ، واستخدم عود أسنان معقم للتخلص من أسطوانات الأجار. بعد ذلك ، استخدم أنبوبا جديدا من الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر خمسة ملليمترات لرسم 15 إلى 20 دائرة بشكل عشوائي في الصفائح الفطرية ، واستخدم أعواد أسنان معقمة لنقل الأبواغ أو الخيوط أو الأسطوانات المغطاة بالفطريات بعناية إلى المناطق الفارغة من ألواح المساعد الرقمي الشخصي.

ثم أعد الألواح إلى حاضنة 30 درجة مئوية. لتحضير لوحات لمقايسة تثبيط مضاد للفطريات في مرحلة البخار ، اسكب 10 ملليلتر من وسط المساعد الشخصي الرقمي في غطاء طبق بتري قطره خمسة سنتيمترات يحتوي على 10 مل من وسط المساعد الشخصي الرقمي الذي يحتوي على مركبات مضادة للفطريات أو وسط المساعد الشخصي الرقمي وحده ، واسمح للأجار بالتصلب في درجة حرارة الغرفة. باستخدام أنبوب مركزي سعة 50 مليلتر كأداة معايرة ، قم بعمل دائرة من المساعد الشخصي الرقمي في وسط الأجار واستخدم ملعقة معقمة لإزالة الأجار حول الدائرة.

استخدم أنبوبا معقما من الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر خمسة ملليمترات لرسم دائرة في وسط الوسط في الغطاء واستخدم عود أسنان معقم للتخلص من أسطوانة المثقاب. ثم استخدم أنبوبا معقما من الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر خمسة ملليمترات لعمل سدادات عشوائية في الألواح الفطرية المحضرة ، واستخدم عود أسنان معقم لنقل سدادات الأبواغ أو الخيوط أو المقابس المطلية بالفطريات بعناية إلى أغطية ألواح الفحص. في هذا التحليل ، تم تقييم تثبيط نمو أنواع المشعرات SBT 10-2018 الناجم عن ثلاثة مركبات مضادة للفطريات باستخدام فحوصات تثبيط التلامس وطور البخار كما هو موضح في كل مرحلة فطرية.

لوحظت حساسية أعلى للأبواغ للكاربندازيم مقارنة بشبكات الخيوط والفطريات المبكرة عندما كانت المشعرات والمركبات المضادة للفطريات على اتصال في المقابل ، لم يكن للكاربندوزيم أي تأثير مضاد للفطريات على المشعرات عندما تم وضع الفطريات على مسافة من مبيد الفطريات وفقا للتقلب المنخفض لهذه المادة. عندما تم استخدام زيت الغدة الصعترية العربية العطري كمركب مضاد للفطريات ، لوحظت حساسية أعلى للجراثيم والخيوط المبكرة مقارنة بتثبيط نمو الفطريات عند 0.025٪ زيت أساسي.

كما هو متوقع ، قدم زيت الغدة الصعترية الثورية العطري نشاطا مضادا للفطريات متطابقا بغض النظر عن المسافة بين الفطريات والزيت. عند استخدام مسحوق الثوم ، لوحظت فعالية أعلى ضد إنبات الأبواغ واستطالة الخيوط المبكرة مقارنة بنمو الفطريات. يجب إيلاء اهتمام خاص أثناء تحضير الصفيحة الفطرية للتأكد من توزيع الجراثيم بالتساوي على سطح صفيحة الأجار لضمان نتائج قابلة للمقارنة.